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题名多重PCR快速确证外源基因在转基因小麦后代的传递
被引量：1
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作者
施农农
王慧中
徐莺
何光源
胡斌
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机构
华中科技大学HUST-RRes中英作物基因工程与基因组学联合实验室
杭州师范学院生命科学学院生化与分子生物学杭州市重点实验室
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出处
《中国生物工程杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2006年第4期51-57,共7页
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基金
中国博士后二等科研基金资助项目(2003034065)
浙江省自然科学基金资助项目(M303081)
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文摘
根据转入小麦0世代中的高分子谷蛋白亚基1Dx5基因和报告基因uidA、作为选择标记的除草剂抗性基因bar的序列,设计合成三对引物。以整合uidA+bar的质粒pAHC25和整合1Dx5 的质粒p1Dx5为模板寻找uidA与1Dx5及或bar多重扩增的最佳模板浓度及最适退火温度。 MPCR模板量是单对引物扩增时的两倍,引物浓度同常规PCR为0．3μmol／L,uidA与bar的适宜退火温度范围为57．1-62．3℃;uidA与1Dx5为60．0℃-60．6℃;uidA、bar、1Dx5的最适合退火温度范围为57．0℃～58．4℃。MPCR对大小相差50bp及以下的多重扩增片段可通过10％的非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳分离。在此基础上对14株T1代转基因小麦基因组DNA进行多重PCR 扩增,筛选出基因未分离的小麦后代,并与常规PCR比较,结果一致,其中11株同时传递1Dx5和 bar基因、1株同时传递uidA、bar和1Dx5基因,3株未检测到外源基因。表明MPCR在快速确证外源基因在转基因植株后代的传递中作用显著。研究在常规PCR反应体系上,对模板浓度和多重引物退火温度进行微调,且把MPCR技术与PAGE技术结合起来,提高了研究结果的准确性,获得了较好的扩增和检测效果,简化了MPCR优化程序,使MPCR的优势更明显,为该技术的广泛应用提供了借鉴。
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关键词
多重PCR转基因检测
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Keywords
multiplex polymerase chain reaction （mpcr） transgenes detection
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分类号
Q789
[生物学—分子生物学]
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