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中国玉米新品种DNA指纹库建立系列研究 Ⅲ.多重PCR技术在玉米SSR引物扩增中的应用 被引量：49
1
作者 王凤格 赵久然 +5 位作者 佘花娣 郭景伦 陈刚 廖琴 孙世贤 陈如明 《玉米科学》 CAS CSCD 2003年第4期3-6,共4页
根据21对玉米SSR引物扩增片段大小范围组成不同的引物组合进行多重PCR反应的研究。在与单一PCR相同的反应条件下,47个两重PCR组合出现5种不同的扩增情况,其中30个组合扩增正常;10个三重PCR组合中有9个组合扩增正常;两个四重PCR组合中有... 根据21对玉米SSR引物扩增片段大小范围组成不同的引物组合进行多重PCR反应的研究。在与单一PCR相同的反应条件下,47个两重PCR组合出现5种不同的扩增情况,其中30个组合扩增正常;10个三重PCR组合中有9个组合扩增正常;两个四重PCR组合中有1个扩增正常,这些筛选出的正常扩增的组合可应用于今后玉米DNA指纹库构建研究中。研究表明,应用与单一PCR完全相同的反应条件,大部分能够获得正常扩增的多重PCR组合,在此基础上提出了简化的多重PCR优化程序。 展开更多
关键词 中国 玉米 品种 DNA指纹库 多重pcr技术 SSR引物 扩增片段
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食品中4种肉类成分多重PCR的快速鉴别方法 被引量：62
2
作者 何玮玲 张驰 +2 位作者 杨静 黄明 杨军 《中国农业科学》 CAS CSCD 北大核心 2012年第9期1873-1880,共8页
【目的】建立快速可靠的用于食品中4种肉类(猪肉、牛肉、羊肉和鸡肉)成分快速鉴别的通用引物多重PCR(universal primers-multiplex PCR,UP-M-PCR)方法。【方法】使用DNeasy试剂盒提取法、SDS-蛋白酶K法和CTAB-蛋白酶K法分别提取肉类中总... 【目的】建立快速可靠的用于食品中4种肉类(猪肉、牛肉、羊肉和鸡肉)成分快速鉴别的通用引物多重PCR(universal primers-multiplex PCR,UP-M-PCR)方法。【方法】使用DNeasy试剂盒提取法、SDS-蛋白酶K法和CTAB-蛋白酶K法分别提取肉类中总DNA,通过比较提取效率和纯度,确定提取肉类中总DNA的方法;基于动物线粒体细胞色素b基因的差异性位点,设计两组各5条长度不同的多重PCR引物,建立并优化多重PCR反应体系,通过电泳检测扩增产物分子量差异实现4种肉类的快速鉴别;应用优化的多重PCR方法对80份市售食品样本进行盲样检测,验证鉴别方法的准确性。【结果】SDS-蛋白酶K法与DNeasy试剂盒提取法的DNA效率显著优于CTAB-蛋白酶K法;在优化的反应条件下,选择特异性高、序列较长的多重PCR引物可有效地进行食品中猪、牛、羊和鸡源性成分的快速鉴定,检测灵敏度达到皮克级DNA;对市售食品样本的鉴别验证了方法的实用价值。【结论】多重PCR方法精确稳定,可用于食品中多种动物源性成分的快速鉴别。 展开更多
关键词 多重pcr 鉴别 猪肉 牛肉 羊肉 鸡肉
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PCR技术研究进展 被引量：40
3
作者 陶生策 张治平 张先恩 《生物工程进展》 CSCD 2001年第4期26-29,共4页
PCR(Polymerasechainreaction)在生命科学研究及相关诸多领域已经得到了广泛应用。本文对PCR技术的最新进展作一简要综述 ,包括 :热循环仪的改进 ,引物的软件设计及网络设计 ,各种DNA聚合酶体系及其特性 ,多种PCR(MultiplexPCR) ,DNAshu... PCR(Polymerasechainreaction)在生命科学研究及相关诸多领域已经得到了广泛应用。本文对PCR技术的最新进展作一简要综述 ,包括 :热循环仪的改进 ,引物的软件设计及网络设计 ,各种DNA聚合酶体系及其特性 ,多种PCR(MultiplexPCR) ,DNAshuffling ,PCR芯片 ,固相PCR和电子PCR(ElectronicPCR) 展开更多
关键词 多重pcr DNAshuffling pcr芯片 固相pcr 电子pcr 研究进展
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沙门菌、大肠杆菌和金黄色葡萄球菌的多重PCR检测 被引量：50
4
作者 许一平 成炜 +1 位作者 邵彦春 陈福生 《微生物学通报》 CAS CSCD 北大核心 2006年第6期89-94,共6页
根据沙门菌invA基因、大肠杆菌phoA基因和金黄色葡萄球菌nuc基因序列，设计3对特异性引物进行多重PCR并对反应条件进行优化。结果表明3对引物能特异地扩增出284bp、622bp、484bp的目的条带；最佳反应条件为沙门菌、大肠杆菌、金黄色葡... 根据沙门菌invA基因、大肠杆菌phoA基因和金黄色葡萄球菌nuc基因序列，设计3对特异性引物进行多重PCR并对反应条件进行优化。结果表明3对引物能特异地扩增出284bp、622bp、484bp的目的条带；最佳反应条件为沙门菌、大肠杆菌、金黄色葡萄球菌的引物浓度分别为40nmol／L、40nmol／L、80nmol／L，Mg^2＋浓度2．4mmol／L，dNTP浓度2001μmol／L，Taq DNA聚合酶1.5u，退火温度55．0℃-57．4℃之间；在此条件下多重PCR同时检测DNA的敏感性分别是10．2pg、10．2pg、102．0pg，检测时间4h。建立的多重PCR是一种敏感、特异、准确、快速的方法，为同时检测食品中沙门菌、大肠杆菌和金黄色葡萄球菌奠定了基础。 展开更多
关键词 多重pcr 沙门菌 大肠杆菌 金黄色葡萄球菌
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弯曲菌多重PCR检测方法的建立及其初步应用 被引量：50
5
作者 何蕊 黄金林 +3 位作者 许海燕 苏洁 潘志明 焦新安 《扬州大学学报（农业与生命科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2007年第1期5-8,共4页
以16S rRNA、mapA和ceuE为靶基因,建立检测空肠弯曲菌和结肠弯曲菌的多重PCR方法。特异性试验能分别扩增出空肠弯曲菌和结肠弯曲菌的特异性条带,其他参考菌株均未扩增出条带;敏感性试验表明,基于增菌培养和选择性培养的多重PCR方法对弯... 以16S rRNA、mapA和ceuE为靶基因,建立检测空肠弯曲菌和结肠弯曲菌的多重PCR方法。特异性试验能分别扩增出空肠弯曲菌和结肠弯曲菌的特异性条带,其他参考菌株均未扩增出条带;敏感性试验表明,基于增菌培养和选择性培养的多重PCR方法对弯曲菌检测限为10 mL或10 g模拟污染样品,最低可检测0.925 pg.μL-1空肠弯曲菌DNA和1.050 pg.μL-1结肠弯曲菌DNA。以国家标准为参照,应用该方法对180份生鲜鸡肉样品进行检测,结果表明多重PCR方法具有快速、简便、特异性强和灵敏度高等特点,可克服传统生化鉴定和血清学方法的不足,为弯曲菌检测提供新的技术。 展开更多
关键词 空肠弯曲菌 结肠弯曲菌 多重pcr 快速检测
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多重PCR技术在病原检测中的应用 被引量：51
6
作者 赵红庆 苑锡铜 黄留玉 《生物技术通讯》 CAS 2007年第5期863-865,共3页
多重PCR能够同时扩增不同片段,具有普通PCR方法不可比拟的优势。简要论述了多重PCR在细菌病原体的检测、病毒病原体的检测、支原体和衣原体及寄生虫的检测、微生物耐药性检测等方面的应用,分析了多重PCR的影响因素及条件优化,并进一步... 多重PCR能够同时扩增不同片段,具有普通PCR方法不可比拟的优势。简要论述了多重PCR在细菌病原体的检测、病毒病原体的检测、支原体和衣原体及寄生虫的检测、微生物耐药性检测等方面的应用,分析了多重PCR的影响因素及条件优化,并进一步综述了多重PCR的应用前景。 展开更多
关键词 多重pcr 病原 检测 影响因素
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多重PCR检测猪瘟病毒、猪细小病毒、猪伪狂犬病病毒 被引量：43
7
作者 刘建柱 崔玉东 +3 位作者 李鹏 王志强 石星明 朴范泽 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2003年第6期535-537,共3页
根据猪瘟病毒 ( CSFV)、猪细小病毒 ( PPV)和猪伪狂犬病病毒 ( PRV) 3种病原体的基因保守序列 ,分别设计了与CSFV的 E2基因、PPV的 VP2基因和 PRV的 g 基因序列互补的 3对引物。用这 3对引物对人为混合的样品中的PPV和 PRV的 DNA模板及 ... 根据猪瘟病毒 ( CSFV)、猪细小病毒 ( PPV)和猪伪狂犬病病毒 ( PRV) 3种病原体的基因保守序列 ,分别设计了与CSFV的 E2基因、PPV的 VP2基因和 PRV的 g 基因序列互补的 3对引物。用这 3对引物对人为混合的样品中的PPV和 PRV的 DNA模板及 CSFV反转录后的 c DNA模板进行多重 PCR扩增和多重 PCR反应条件的优化 ,结果同时得到 3条与试验设计相符的 2 88bp( CSFV)、5 75 bp( PPV)和 70 0 bp( PRV)特异性条带 ;敏感性检测结果表明 ,该多重 PCR可以检测到 14 .5 ng/ L 的 CSFV、2 7.1pg/ L 的 PPV、31.4 ng/ L 的 展开更多
关键词 猪瘟病毒 细小病毒 伪狂犬病病毒 检测 多重pcr 早期诊断
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致病性嗜水气单胞菌多重PCR检测方法的建立 被引量：42
8
作者 饶静静 李寿崧 +2 位作者 黄克和 江树勋 潘群兴 《中国水产科学》 CAS CSCD 北大核心 2007年第5期749-755,共7页
致病性嗜水气单胞菌(Aeromonas hydrophila)是近年中国各地大规模流行的淡水养殖鱼类暴发性疾病的主要病原,本研究针对GenBank中登录的致病性嗜水气单胞菌的气溶素基因(hlyA)、溶血素基因(aerA)以及为气单胞菌属所特有的内参照基因16S r... 致病性嗜水气单胞菌(Aeromonas hydrophila)是近年中国各地大规模流行的淡水养殖鱼类暴发性疾病的主要病原,本研究针对GenBank中登录的致病性嗜水气单胞菌的气溶素基因(hlyA)、溶血素基因(aerA)以及为气单胞菌属所特有的内参照基因16S rRNA保守区设计了3对特异性引物,通过进行多重PCR反应体系优化,多重PCR产物的测序鉴定与特异性和敏感性实验,试图建立一种检测致病性嗜水气单胞菌的多重PCR检测方法。对8株嗜水气单胞菌、16株相关菌株进行多重PCR检测,结果显示,非致病性分离株均未扩增出毒力基因hlyA和aerA,而致病性分离株则至少含有hlyA基因;对40份送检的水产动物样品进行多重PCR检测,结果与常规微生物学检测符合率为97.5%。多重PCR检测方法具有较高的敏感性与特异性,最低可检测模板量为10 ng的样品。该方法的建立对水产动物嗜水气单胞菌病的快速诊断和分子流行病学的调查有重要意义。 展开更多
关键词 嗜水气单胞菌 hlyA基因 aerA基因 多重pcr
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北京地区儿童急性上呼吸道感染病毒病原学调查 被引量：44
9
作者 石伟先 彭晓旻 +12 位作者 韩莉莉 梁慧洁 王晓梅 丁立新 杨鹏 吕敏 段玮 孙强 初艳慧 张震 黄芳 王全意 吴淑艳 《中国卫生检验杂志》 CAS 2008年第7期1263-1265,共3页
目的:了解北京地区儿童急性上呼吸道感染病毒病原学现况,探讨不同年龄组、不同月份病毒检出情况,为预防策略制定、临床诊断、治疗提供病原学依据。方法:采用多重RT-PCR法,对365份咽拭子样本同时检测腺病毒,偏肺病毒,冠状病毒229E,1、2、... 目的:了解北京地区儿童急性上呼吸道感染病毒病原学现况,探讨不同年龄组、不同月份病毒检出情况,为预防策略制定、临床诊断、治疗提供病原学依据。方法:采用多重RT-PCR法,对365份咽拭子样本同时检测腺病毒,偏肺病毒,冠状病毒229E,1、2、3型副流感病毒;甲、乙型流感病毒,甲、乙型呼吸道合胞病毒,甲型鼻病毒,冠状病毒OC43共12种常见呼吸道病毒。结果:365份样本中有阳性检出结果的有246份,阳性率为63.08%,其中有2种以上病毒混合感染65份,占17.80%;6个月以下患儿以甲型呼吸道合胞病毒检出阳性率最高;6个月以上至14岁患儿中以甲型流感病毒检出阳性率最高;2006年10月及2007年4月腺病毒检出率最高,11月份与2月份以呼吸道合胞病毒检出率最高,12月与1月份以流感病毒检出率最高;在阳性检出样本中流感病毒占52.85%、呼吸道合胞病毒占26.42%、腺病毒占18.70%。结论:流感病毒、呼吸道合胞病毒、腺病毒为北京地区儿童急性上呼吸道病毒感染主要致病原,随年龄不同、流行季节中月份不同而有一定的流行规律。 展开更多
关键词 急性上呼吸道感染 多重pcr法 病毒病原学
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多重荧光PCR同时检测转基因成分35S和Nos方法的建立 被引量：33
10
作者 刘光明 李庆阁 +4 位作者 王群力 梁基选 陈伟铃 栾国彦 苏文金 《厦门大学学报（自然科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2002年第4期493-497,共5页
根据商品化转基因作物中常用的花椰菜花叶病毒启动子 (CaMV 35S)和根癌农杆菌终止子 (Nos)的序列特点 ,设计并合成了两对引物和相对应的荧光双链探针 ,建立一种应用荧光双链探针的多重荧光PCR同时检测转基因成分 35S启动子和Nos终止子... 根据商品化转基因作物中常用的花椰菜花叶病毒启动子 (CaMV 35S)和根癌农杆菌终止子 (Nos)的序列特点 ,设计并合成了两对引物和相对应的荧光双链探针 ,建立一种应用荧光双链探针的多重荧光PCR同时检测转基因成分 35S启动子和Nos终止子的方法 .并利用该方法对马铃薯、大豆、玉米、甜椒、番茄等 11份实物样品进行了检测 ,其中有 5份样品结果阳性 .结果表明所建立的多重荧光PCR方法能同时检测出 35S和Nos双组分 ,较常规PCR技术更为简便、快速、准确 ,有很好的应用前景 . 展开更多
关键词 多重荧光pcr 35S NOS 转基因作物 荧光双链探针 花椰菜花叶病毒启动子 极癌农杆菌终止子 检测方法
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单管多重PCR快速检测中国人三种常见缺失型α-地中海贫血基因 被引量：40
11
作者 周玉球 张永良 +4 位作者 李莉艳 李文典 莫秋华 郑勤 徐湘民 《中华医学遗传学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2005年第2期180-184,共5页
目的　建立一种简单快速、准确可靠、经济实用的检测常见缺失型α-地中海贫血(α-地贫)突变(- - SEA、- α3.7和- α4 .2 )的单管多重PCR技术以用于α-地贫的分子筛查和产前诊断。方法　采用gap- PCR方案设计4组PCR引物并对PCR反应条件... 目的　建立一种简单快速、准确可靠、经济实用的检测常见缺失型α-地中海贫血(α-地贫)突变(- - SEA、- α3.7和- α4 .2 )的单管多重PCR技术以用于α-地贫的分子筛查和产前诊断。方法　采用gap- PCR方案设计4组PCR引物并对PCR反应条件进行系统优化以扩增代表这3种地贫和α2 基因存在的特异性DNA片段。此外,还设计1对引物扩增L IS1基因3′-端非翻译区片段作为整个PCR体系扩增成功与否的内在对照。采用盲法分析对该技术的特异性、准确性和可靠性进行评价并应用于产前分子诊断中。结果　所建的单管多重PCR技术成功地检出这3种常见缺失型α-地贫突变的纯合子、杂合子和双重杂合子。正常人出现L IS1和α2 基因特异扩增片段,而- - SEA、- α3.7和- α4 .2杂合子除了出现正常人的2条扩增带外,还分别出现1条指示这些突变存在的特异性扩增片段。盲法分析结果显示,该技术对α-珠蛋白基因型经过Southern印迹法或DNA直接测序确证的DNA标本的诊断准确性达到10 0 % ,并被成功地应用于9个重症α-地贫高风险家庭的产前诊断中。结论　该技术可准确、快速地检测- - SEA、-α3.7和-α4 .2 3种常见缺失型α-地贫突变,且具有经济和实用的优点,非常适合于α-地贫的大人群分子筛查和临床样品的基因诊断。 展开更多
关键词 α-地中海贫血基因 快速检测 缺失型Α-地中海贫血 多重pcr技术 Southern DNA直接测序 中国 产前分子诊断 产前诊断 分子筛查 扩增片段 DNA片段 pcr引物 双重杂合子 诊断准确性 DNA标本 特异性 经济实用 系统优化 反应条件
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耐甲氧西林金黄色葡萄球菌SCCmec基因分型及耐药谱分析 被引量：43
12
作者 陈洁 李岩 +3 位作者 王晶 韩丽霞 肖晓光 林琳 《中华医院感染学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2012年第5期894-897,共4页
目的研究耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)SCCmec基因分型情况,并对其耐药谱进行分析。方法收集从临床标本分离出的MRSA 91株,应用多重PCR法对MRSA进行SCCmec基因分型,采用MicroScanWalk-Away-40全自动微生物鉴定药敏分析仪进行细菌的鉴... 目的研究耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)SCCmec基因分型情况,并对其耐药谱进行分析。方法收集从临床标本分离出的MRSA 91株,应用多重PCR法对MRSA进行SCCmec基因分型,采用MicroScanWalk-Away-40全自动微生物鉴定药敏分析仪进行细菌的鉴定及药敏试验,部分药敏试验采用K-B法。结果 91株MRSA中SCCmecⅡ型72株,占79.1%,SCCmecⅢ型16株,占17.6%,未分型3株,占3.3%,未见SCCmecⅠ型及SCCmecⅣ型;ICU中MRSA所占比例最多,为SCCmecⅡ型51.4%、SCCmecⅢ型37.5%,2种SCCmec基因型的MRSA对万古霉素、磺胺甲噁唑/甲氧苄啶、利奈唑胺、喹奴普汀/达福普汀的耐药率为0,对氯霉素的耐药率分别为11.1%和12.5%,对利福平的耐药率分别为8.3%和37.5%,其余均呈高水平耐药,2种SCCmec基因型的MRSA均表现为多药耐药。结论临床分离的MRSA以SCCmecⅡ型为主,且对抗菌药物呈多药耐药。 展开更多
关键词 耐甲氧西林金黄色葡萄球菌 葡萄球菌染色体基因盒 多重聚合酶链反应
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用多重PCR鉴别猪伪狂犬病野毒与疫苗毒的研究 被引量：38
13
作者 刘丽娜 何启盖 +3 位作者 陈焕春 刘正飞 张松林 汪招雄 《中国兽医科技》 CSCD 北大核心 2005年第2期95-98,共4页
根据基因库中的猪伪狂犬病病毒(PRV)各基因的序列,设计了与PRV的 gB、gD、gE基因序列互补的3对引物。对样品中的PRV DNA模板进行了多重PCR扩增及反应条件的优化,结果同时得到与设计相符合的3条特异性条带,分别为549 bp(gB)、429 bp(gD)... 根据基因库中的猪伪狂犬病病毒(PRV)各基因的序列,设计了与PRV的 gB、gD、gE基因序列互补的3对引物。对样品中的PRV DNA模板进行了多重PCR扩增及反应条件的优化,结果同时得到与设计相符合的3条特异性条带,分别为549 bp(gB)、429 bp(gD)、366 bp(gE)。用这3对引物对三基因缺失疫苗毒的样品DNA模板进行多次多重 PCR扩增,均能稳定得到与设计相符合的2条特异性条带。敏感性试验结果表明,多重 PCR可以检测到 106 pg三基因缺失疫苗毒或756 pg PRV野毒的核酸模板量。特异性试验结果表明,以正常对照细胞及猪圆环病毒和猪细小病毒DNA为模板进行多重PCR扩增,均无任何条带。 展开更多
关键词 猪伪狂犬病 基因缺失疫苗 多重pcr PRV 引物 GE基因 酸模 扩增 鉴别 特异性
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多重PCR检测无公害畜禽肉和水产品中4种致病菌 被引量：33
14
作者 杨小鹃 吴清平 +1 位作者 张菊梅 吴慧清 《微生物学通报》 CAS CSCD 北大核心 2005年第3期95-101,共7页
建立无公害畜禽肉和水产品中肠出血性大肠杆菌(EHEC)、沙门氏菌、副溶血性弧菌(VP)和单核细胞增生性李斯特氏菌(LM)的多重PCR检测方法,为这些致病菌的快速诊断提供实验依据。选择分别针对EHEC溶血素基因hlyAB、副溶血性弧菌属保守序列t... 建立无公害畜禽肉和水产品中肠出血性大肠杆菌(EHEC)、沙门氏菌、副溶血性弧菌(VP)和单核细胞增生性李斯特氏菌(LM)的多重PCR检测方法,为这些致病菌的快速诊断提供实验依据。选择分别针对EHEC溶血素基因hlyAB、副溶血性弧菌属保守序列toxR基因、沙门氏菌侵袭基因invA和LM的iap基因特异的4对引物,先分别进行单重PCR扩增,再同时加入4对引物进行多重PCR扩增,扩增产物经测序验证。建立的多重PCR方法可简便、快速、灵敏地实现对EHEC、LM、沙门氏菌和VP的同时检测,在畜禽肉和水产品中的检测灵敏度达到103cfu/mL。 展开更多
关键词 食源性致病菌 多重pcr 无公害畜禽肉和水产品
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沙门氏菌多重PCR检测方法的建立 被引量：33
15
作者 邵碧英 陈彬 +2 位作者 汤敏英 吴谦 张体银 《食品科学》 EI CAS CSCD 北大核心 2007年第10期489-492,共4页
采用CTAB/NaCl法提取沙门氏菌及对照菌株的基因组DNA。对引物浓度、TaqDNA聚合酶用量进行优化,建立了沙门氏菌属特异基因-hut基因(495bp)、hilA基因(490bp)、invA基因(284bp)和hns基因(152bp)间的多重PCR检测方法,并进行了灵敏度测试。... 采用CTAB/NaCl法提取沙门氏菌及对照菌株的基因组DNA。对引物浓度、TaqDNA聚合酶用量进行优化,建立了沙门氏菌属特异基因-hut基因(495bp)、hilA基因(490bp)、invA基因(284bp)和hns基因(152bp)间的多重PCR检测方法,并进行了灵敏度测试。结果表明,建立的多重PCR检测结果与预期一致,二重PCR的检测灵敏度与单一PCR的一致,三重PCR检测灵敏度有所下降。 展开更多
关键词 沙门氏菌 基因组DNA 多重pcr 检测灵敏度
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猪链球菌2型和9型菌株的多重PCR检测 被引量：32
16
作者 刘军 冯书章 +3 位作者 尹铁勇 孙洋 郭学军 祝令伟 《中国人兽共患病杂志》 CSCD 北大核心 2005年第6期510-514,共5页
目的建立一种快速、特异且敏感的检测方法。方法以猪链球菌2型和9型的荚膜多糖抗原编码基因簇中的cps2J和cps9H基因、猪链球菌2型的主要毒力因子编码基因epf和mrp为靶基因设计了四对引物,建立了检测猪链球菌的多重PCR反应体系。用编码cp... 目的建立一种快速、特异且敏感的检测方法。方法以猪链球菌2型和9型的荚膜多糖抗原编码基因簇中的cps2J和cps9H基因、猪链球菌2型的主要毒力因子编码基因epf和mrp为靶基因设计了四对引物,建立了检测猪链球菌的多重PCR反应体系。用编码cps2J和cps9H基因的引物可对猪链球菌2型和9型进行分型,用编码epf和mrp基因的引物可鉴定猪链球菌2型的主要毒力相关基因。用该多重PCR反应体系对10株猪链球菌分离株进行了鉴定,并以其它几株阴性对照菌株进行对照,检测了该反应体系的特异性。以新鲜培养的猪链球菌2型菌株进行倍比稀释后进行菌落计数,并将之作为模板,对该多重PCR反应体系检测的敏感性进行了鉴定。结果10株猪链球菌分离株中有5株是9型菌株,另有5株是2型菌株,2型菌株有2种基因型:3株cps2+mrp+epf+型,2株cps2+mrp-epf-型。同时还表明该多重PCR反应体系有高度的特异性和敏感性,当模板含量在10cfu时仍能检出目的菌株。结论该多重PCR反体系是一种检测和鉴定猪链球菌2型的快速、特异且敏感的方法。 展开更多
关键词 猪链球菌 多重pcr 毒力基因
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应用多重RT-PCR检测百合无症病毒和百合斑驳病毒 被引量：30
17
作者 王继华 王丽花 +3 位作者 丁元明 瞿素萍 熊丽 唐开学 《园艺学报》 CAS CSCD 北大核心 2005年第2期284-287,共4页
根据病毒外壳蛋白基因序列,设计了2对检测百合无症病毒(LSV)、百合斑驳病毒(LMoV)的引物,对扩增条件进行优化,建立了同时检测LSV和LMoV的多重RTPCR检测方法。此方法可特异地从带有LSV和LMoV的样品中扩增出2条带LSV(876bp)、LMoV(662bp)... 根据病毒外壳蛋白基因序列,设计了2对检测百合无症病毒(LSV)、百合斑驳病毒(LMoV)的引物,对扩增条件进行优化,建立了同时检测LSV和LMoV的多重RTPCR检测方法。此方法可特异地从带有LSV和LMoV的样品中扩增出2条带LSV(876bp)、LMoV(662bp)。灵敏性测定结果表明,该双重PCR可从稀释104组织中检测出病毒,具有与单一PCR相同的灵敏性。扩增产物测序表明,LSV扩增产物与其它分离物核苷酸同源性为87.8%～99.3%,LMoV扩增产物与其它分离物的同源性为90.1%～99.5%。 展开更多
关键词 多重pcr 检测 百合无症病毒 百合斑驳病毒
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革兰阴性杆菌中质粒ampC基因的检测与分析 被引量：33
18
作者 蒋燕群 曹娜 +2 位作者 陈泰尧 汤瑾 倪语星 《上海医学检验杂志》 北大核心 2003年第6期328-330,共3页
目的　运用多重聚合酶链反应 (PCR)检测革兰阴性杆菌的质粒ampC基因。 方法　通过热裂解获得DNA模板 ,用 6组引物进行多重PCR扩增 ,用琼脂糖凝胶电泳区分PCR产物。结果　 2 0 0株临床分离的革兰阴性杆菌中有 6株为质粒ampC基因阳性。 ... 目的　运用多重聚合酶链反应 (PCR)检测革兰阴性杆菌的质粒ampC基因。 方法　通过热裂解获得DNA模板 ,用 6组引物进行多重PCR扩增 ,用琼脂糖凝胶电泳区分PCR产物。结果　 2 0 0株临床分离的革兰阴性杆菌中有 6株为质粒ampC基因阳性。 结论　用多重PCR技术能简单、快速地检测革兰阴性杆菌质粒ampC基因 ,且特异性高。 展开更多
关键词 革兰阴性杆菌 质粒 AMPC基因 检测 分析 多重聚合酶链反应
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利用SRAP和ISSR建立快速鉴定灵芝属菌株的SCAR标记 被引量：34
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作者 许美燕 唐传红 +4 位作者 张劲松 唐庆九 杨焱 贾薇 潘迎捷 《菌物学报》 CAS CSCD 北大核心 2008年第5期707-717,共11页
根据ERIC聚类分析的结果,把152株灵芝属菌株(包括128株来自中国的栽培菌株及24株国外菌株)建成48个DNA池。用SRAP和ISSR引物对48个DNA池进行扩增,筛选获得4个特异性标记,回收特异性条带,经克隆测序后设计了4对SCAR引物,并通过SCAR-PCR... 根据ERIC聚类分析的结果,把152株灵芝属菌株(包括128株来自中国的栽培菌株及24株国外菌株)建成48个DNA池。用SRAP和ISSR引物对48个DNA池进行扩增,筛选获得4个特异性标记,回收特异性条带,经克隆测序后设计了4对SCAR引物,并通过SCAR-PCR扩增验证,从而将SRAP标记和ISSR标记均成功地转化为特异性和稳定性更好的SCAR标记;将得到的4个SCAR标记在构成DNA池的152个菌株上验证,并建立多重PCR体系,最终证实了SCAR特异标记在菌株快速检测鉴定中的可行性和可靠性。 展开更多
关键词 DNA池 灵芝 多重pcr
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食品中4种致病微生物的多重PCR快速检测技术研究 被引量：35
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作者 杨平 杨迎伍 +2 位作者 陈伟 王国民 李正国 《西南大学学报（自然科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2007年第5期90-94,共5页
传统微生物检测方法耗时长、灵敏性差,难以满足食品安全快速检测要求,建立和完善食品中致病微生物快速检测技术具有重要的现实意义.本研究针对沙门氏菌、志贺氏菌、金黄色葡萄球菌和单核细胞增生性李斯特菌,根据其特异基因设计出4对引物... 传统微生物检测方法耗时长、灵敏性差,难以满足食品安全快速检测要求,建立和完善食品中致病微生物快速检测技术具有重要的现实意义.本研究针对沙门氏菌、志贺氏菌、金黄色葡萄球菌和单核细胞增生性李斯特菌,根据其特异基因设计出4对引物,通过对食品样品进行梯度离心处理、改良异硫氰酸胍法提取基因组DNA和多重PCR(multiplex PCR)条件的优化,建立了这4种食源性致病微生物的多重PCR检测方法.通过人工污染检测和市场样品检测,同时进行传统方法验证,结果表明:该检测方法简单、快速、准确、灵敏度高,只需经过增菌4～8h其最低检出限可达1cfu/mL,具有较强的实际应用价值,可广泛应用于食品卫生检测和临床检验等领域. 展开更多
关键词 食源性致病微生物 多重pcr 快速检测
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