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Experimental Study Enhancing the Chemosensitivityof Multiple Myeloma to Melphalan by Using a Tissue-Specific APE1-Silencing RNA Expression Vector 被引量:9
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作者 CHEN Xing- Hua ZHANG Xi YANG Zhen- Zhou LI Zhong- Jun WANG Ji-Gang WANG Qing-Yu 《中国实用内科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2007年第S1期72-73,共2页
Introduction:Multiple myeloma (MM) is a geriatric disease with onset at an average age of approximately 61 years.With the aging of the population,the incidence rate of MM is climbing.In the United States,the annual in... Introduction:Multiple myeloma (MM) is a geriatric disease with onset at an average age of approximately 61 years.With the aging of the population,the incidence rate of MM is climbing.In the United States,the annual incidence rate of MM is 2-5/100,000.Multiple myeloma accounts for approximately 1% of all tumor eases and slightly 】10% of cases with hematologic malignancy.Although an 展开更多
关键词 APE RNA Experimental Study Enhancing the Chemosensitivityof multiple Myeloma to Melphalan by Using a Tissue-Specific APE1-Silencing RNA expression vector
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经修饰的烟草几丁质酶基因的克隆及多基因香蕉转化载体构建 被引量:2
2
作者 阮小蕾 李华平 《华南农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2008年第1期23-27,共5页
从烟草中克隆得到1个经修饰的几丁质酶基因chi,将它与1个已经克隆的核糖体失活蛋白基因Cassin以及1个抗病毒的融合基因FBC(CMV香蕉株系的CP基因和BBTV的Rep基因)共同构建在1个表达载体上,得到多基因植物表达载体pYLTAC747NH-c-C-FBC.
关键词 几丁质酶基因 多基因组装 植物表达载体
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多靶点CRISPR表达载体系统的设计和构建 被引量:3
3
作者 王令 郭苗苗 +4 位作者 杜伟立 杨理凯 胡重洋 张涛 路宏朝 《基因组学与应用生物学》 CAS CSCD 北大核心 2017年第4期1518-1525,共8页
CRISPR/Cas9核酸酶系统能实现多基因的高效靶向编辑,但是多靶点CRISPR表达载体的构建比较复杂。本研究以细菌的DNA旋转酶和二氢叶酸还原酶为靶基因,选择多个打靶位点,合成携带靶序列和多克隆位点的寡聚核苷酸引物,直接退火延伸合成靶序... CRISPR/Cas9核酸酶系统能实现多基因的高效靶向编辑,但是多靶点CRISPR表达载体的构建比较复杂。本研究以细菌的DNA旋转酶和二氢叶酸还原酶为靶基因,选择多个打靶位点,合成携带靶序列和多克隆位点的寡聚核苷酸引物,直接退火延伸合成靶序列DNA,利用同尾酶产生相同粘性末端的特点,将靶序列克隆至骨架载体,然后依次加入更多靶序列,实现多靶点的串联。最后测序验证,单靶点、双靶点和三靶点成功插入CRISPR表达载体,同时保留了多克隆位点,实现多靶点串联。本研究设计的多靶点CRISPR表达载体系统操作简单、成本低、成功率高,为后续细菌多基因编辑提供技术支撑,同时可拓展应用于其他生物多基因打靶研究。 展开更多
关键词 CRISPR系统 多靶点 表达载体 同尾酶
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抗菌肽P113多拷贝表达载体的构建 被引量:2
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作者 姜琼 《宜春学院学报》 2011年第4期116-117,189,共3页
目的:构建唾液抗菌肽P113基因多拷贝串联重组体,并将其克隆到表达载体pET-28a。方法:根据大肠杆菌偏爱的密码子设计并合成人唾液抗菌肽P113基因,采用PCR技术构建P113基因的自融合多拷贝串联重组体polyP113,BamHⅠ和HindⅢ双酶切表达载体... 目的:构建唾液抗菌肽P113基因多拷贝串联重组体,并将其克隆到表达载体pET-28a。方法:根据大肠杆菌偏爱的密码子设计并合成人唾液抗菌肽P113基因,采用PCR技术构建P113基因的自融合多拷贝串联重组体polyP113,BamHⅠ和HindⅢ双酶切表达载体pET-28a和polyP113基因,将两者连接后转化大肠杆菌DH5α,氨苄青霉素筛选阳性菌落,PCR、酶切、测序鉴定重组质粒。结果:所构建的含有十拷贝P113基因的重组体正确克隆到表达载体pET-28a上,无突变。结论:成功构建含十拷贝唾液抗菌肽P113基因表达框的大肠杆菌表达载体。 展开更多
关键词 抗菌肽 p113 多拷贝 表达载体
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基质金属蛋白酶-2C端片段pex的克隆、测序及真核表达载体的构建 被引量:2
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作者 许传杰 李玉林 +1 位作者 李一雷 高洪文 《吉林大学学报(医学版)》 CAS CSCD 北大核心 2003年第5期591-593,共3页
目的 :克隆小鼠基质金属蛋白酶 - 2 ( MMP- 2 ) C端片断 pex编码区的 c DNA序列 ,并构建其真核表达载体 ,为进一步研究其抑制肿瘤作用奠定基础。方法 :根据基因 Gen Bank中 MMP- 2基因的碱基序列 ,利用 RT- PCR的方法从 NIH3T3细胞中分... 目的 :克隆小鼠基质金属蛋白酶 - 2 ( MMP- 2 ) C端片断 pex编码区的 c DNA序列 ,并构建其真核表达载体 ,为进一步研究其抑制肿瘤作用奠定基础。方法 :根据基因 Gen Bank中 MMP- 2基因的碱基序列 ,利用 RT- PCR的方法从 NIH3T3细胞中分别扩增信号肽及目的基因 pex,然后用多重 PCR的方法将两个片段拼接起来 ,再将拼接起来的目的片段 sig- pex与 p MD1 8T载体连接作全自动测序 ,利用亚克隆的方法将 sig- pex c DNA片段克隆到 pc DNA3.1载体中。结果 :DNA测序证实该片断序列与文献报道完全一致。结论 :成功构建出 pc DNA3.1 - sig- 展开更多
关键词 PEX 多重PCR 克隆 分子 真核表达载体 明胶酶A 基质金属蛋白酶-2C端片段
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成簇pri-miRNAs表达载体的构建及表达验证
6
作者 曲妍佳 李晓宁 +4 位作者 张萌萌 范雅婷 肖君华 李凯 周宇荀 《现代生物医学进展》 CAS 2018年第20期3805-3811,3823,共8页
目的:旨在建立一个多重表达任意miRNA的方案,实现多个pri-miRNA表达阅读框的串联,用于miRNA簇或者miRNA家族的功能研究。方法:通过改造CRISPR/Cas9系统共表达载体42230,插入EGFP编码序列以及单个pri-miRNA序列,实现单个pri-miRNA表达载... 目的:旨在建立一个多重表达任意miRNA的方案,实现多个pri-miRNA表达阅读框的串联,用于miRNA簇或者miRNA家族的功能研究。方法:通过改造CRISPR/Cas9系统共表达载体42230,插入EGFP编码序列以及单个pri-miRNA序列,实现单个pri-miRNA表达载体可视化的构建。在单个pri-miRNA表达载体的基础上,通过同源重组的方式,插入下一个pri-miRNA序列,实现多个pri-miRNA表达阅读框的串联表达。结果:以miR29家族的三个miRNA为例,验证了在pri-miRNA表达阅读框串联方面的可行性;在多重的pri-miRNA表达载体中,miRNA成熟体验证结果表明,pri-miR29a和pri-miR29b能够在哺乳动物细胞中被加工成熟,其成熟体明显地过表达。在转染的293A细胞中,miR29家族的靶基因PTEN的表达水平显著降低。结论:所构建的pri-miRNA多重表达方案,能够实现多个外源miRNA在同一细胞中的共表达,对于探索miRNA家族和miRNA簇的拮抗或协同调控功能起到重要的推进作用。 展开更多
关键词 pri-miRNA miR29家族 多重表达载体 PTEN
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Experimental study enhancing the chemosensitivity of multiple myeloma to melphalan by using atissue-specific APE1-siencing RNA expression vector
7
作者 CHEN Xing-Hua ZHANG Xi YANG Zhen-Zhou LI zhong-Jun WANG Ji-Gang WANG Qing-Yu 《中国实用内科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2007年第S1期145-146,共2页
Introduction:Multiple myeloma(MM)is a geriatric dis-ease with onset at an average age of approximately 61years.With the aging of the population,the incidence rate ofMM is climbing.In the United States,the annual incid... Introduction:Multiple myeloma(MM)is a geriatric dis-ease with onset at an average age of approximately 61years.With the aging of the population,the incidence rate ofMM is climbing.In the United States,the annual incidence 展开更多
关键词 APE RNA Experimental study enhancing the chemosensitivity of multiple myeloma to melphalan by using atissue-specific APE1-siencing RNA expression vector
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获得多价转基因作物的策略 被引量:20
8
作者 刘志 袁小玲 张天真 《遗传》 CAS CSCD 北大核心 2001年第2期182-186,共5页
本文探讨了在利用植物基因工程技术的基础上,通过构建多基因或者多个表达载体,进行一次、多次基因转化或共转化方法获得转多价基因作物的一些策略,并进行了展望。
关键词 多价基因 表达载体 基因转化 转基因作物
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盐角草甜菜碱合成相关基因的共表达提高转基因烟草的耐盐性 被引量:5
9
作者 胡艳梅 苏乔 +1 位作者 祖勇 刘纪文 《中国农学通报》 CSCD 北大核心 2010年第9期55-59,共5页
植物在逆境下能合成甜菜碱,其中磷酸乙醇胺N-甲基转移酶(PEAMT)和胆碱单加氧酶(CMO)是甜菜碱合成过程中的关键酶。将盐角草SePEAMT基因、SeCMO基因以及烟草的核基质结合区序列(Mar)利用Cre/loxP重组系统构建到同一表达载体上,得到植物... 植物在逆境下能合成甜菜碱,其中磷酸乙醇胺N-甲基转移酶(PEAMT)和胆碱单加氧酶(CMO)是甜菜碱合成过程中的关键酶。将盐角草SePEAMT基因、SeCMO基因以及烟草的核基质结合区序列(Mar)利用Cre/loxP重组系统构建到同一表达载体上,得到植物表达载体pYLTAC747N-Mar-SePEAMT-SeCMO-Mar。该载体用电击转化法转入农杆菌EHA105中,通过农杆菌介导法转化烟草,经PCR检测确定转基因植株。在含250mM NaCl的MS培养基上培养35天后,转基因植株生根而野生型植株不能生根;转基因烟草植株甜菜碱积累量显著高于野生型植株,约是野生型植株的5.6~7.7倍;转基因植株与野生型相比,相对电导率显著降低,叶绿素含量明显升高。以上结果表明共表达SePEAMT和SeCMO能有效提高烟草甜菜碱表达量从而提高烟草的耐盐性。 展开更多
关键词 甜菜碱 耐盐 SePEAMT SeCMO 多基因表达载体
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p10 genes of Bombyx mori nuclear polyhedrosis virus and Autographa californica multiple nuclear polyhedrosis virus 被引量:2
10
作者 张耀洲 吴祥甫 李载平 《Science China Chemistry》 SCIE EI CAS 1995年第1期50-59,共10页
EcoR I-P fragment has been cloned from Autographa californica multiple nuclear polyhedrosis virus (AcMNPV) genomic DNA and used as a probe. 0.5-kb and 1.1-kb fragments including p10 gene from Bombyx mori nuclear polyh... EcoR I-P fragment has been cloned from Autographa californica multiple nuclear polyhedrosis virus (AcMNPV) genomic DNA and used as a probe. 0.5-kb and 1.1-kb fragments including p10 gene from Bombyx mori nuclear polyhedrosis virus (BmNPV) have been hybridized. The p10 ORF was located in the EcoR I-R fragment. Initiation codon ATG of p 10 from BmNPV has been mutated by PCR, and the ATG region became a Bgl II site. A novel transfer vector pBmAcPV-1 has been constructed using both the p10 5’-flanking region whose initiation codon ATG has been mutated with BmNPV and the p 10 3’-flanking region of AcMNPV. The vector can recombine with not only AcMNPV DNA to express foreign gene in Sf cells, but also BmNPV DNA to express foreign gene in Bm cells. CAT gene was expressed at high level in Bm cells under the control of the mutated p10 promoter of BmNPV. 展开更多
关键词 Bombyx mori NUCLEAR polyhedrosis VIRUS Autogmpha californica multiple NUCLEAR polyhedrosis VIRUS nudeotide sequence of p10 p10 transfer vector CAT gene expression.
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戊型肝炎病毒多拷贝分泌表达载体的构建及在毕赤酵母中的表达 被引量:1
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作者 郭敏 雷清 +1 位作者 刘晓 蒋琳 《中国新药杂志》 CAS CSCD 北大核心 2015年第3期271-275,302,共6页
目的:将胞内表达载体p AO815改建成分泌型表达载体,并体外构建戊型肝炎病毒ORF2128-660多拷贝重组表达质粒,进一步比较不同转化子在毕赤酵母中的表达水平,以得到高表达重组菌株。方法:利用重叠PCR技术将α-factor信号肽基因与目的基因OR... 目的:将胞内表达载体p AO815改建成分泌型表达载体,并体外构建戊型肝炎病毒ORF2128-660多拷贝重组表达质粒,进一步比较不同转化子在毕赤酵母中的表达水平,以得到高表达重组菌株。方法:利用重叠PCR技术将α-factor信号肽基因与目的基因ORF2128-660拼接后插入去磷酸化的p AO815载体,得到分泌型表达重组质粒α-ORF2128-660/p AO815(单拷贝),然后将Bam HⅠ和BglⅡ双酶切获得的目的基因表达盒(AOX-α-ORF2128-660)插入到去磷酸化的重组质粒α-ORF2128-660/p AO815中,得到2(AOX-α-ORF2128-660)/p AO815(2拷贝),电转化毕赤酵母GS115,甲醇诱导,SDS-PAGE分析不同拷贝数转化子的表达产量,ELISA检测表达产物的生物活性。结果:α-factor信号肽基因与目的基因ORF2128-660已克隆入表达载体中,目的蛋白分泌至诱导液上清中,相对分子质量约为59 000,与阴性对照比,单拷贝、2拷贝转化子表达的产物均有生物活性但表达水平无区别。结论:成功改建成分泌型表达载体,构建了多拷贝重组表达质粒,并且成功表达了目的蛋白,为利用改造的p AO815载体表达其他蛋白奠定了基础。 展开更多
关键词 戊型肝炎病毒 重叠PCR 多拷贝表达盒 毕赤酵母 pAO815载体 胞内表达载体 分泌型表 达载体
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戊型肝炎病毒多拷贝重组质粒的构建及在毕赤酵母中的表达 被引量:2
12
作者 郭敏 雷清 +1 位作者 刘晓 蒋琳 《微生物学免疫学进展》 2014年第6期31-35,共5页
目的体外构建戊型肝炎病毒(HEV)ORF2128-660多拷贝重组表达质粒,以提高HEVORF2128-660在毕赤酵母中的表达水平。方法采用PCR技术扩增目的基因ORF2128-660(E),然后将ORF2128-660(E)同义点突变为ORF2128-660,构建重组表达质粒ORF212 8-660... 目的体外构建戊型肝炎病毒(HEV)ORF2128-660多拷贝重组表达质粒,以提高HEVORF2128-660在毕赤酵母中的表达水平。方法采用PCR技术扩增目的基因ORF2128-660(E),然后将ORF2128-660(E)同义点突变为ORF2128-660,构建重组表达质粒ORF212 8-660/p AO815(单拷贝),Bam HⅠ和BglⅡ双酶切获得的目的基因表达盒(AOX-ORF2128-660)插入去磷酸化的质粒ORF2128-660/p AO815,得到2(AOX-ORF2128-660)/p AO815(2拷贝)质粒。重复上述方法依次构建3(AOX-ORF2128-660)/p AO815(3拷贝)、4(AOX-ORF2128-660)/p AO815(4拷贝)等多拷贝重组质粒。得到的多拷贝重组质粒电转化毕赤酵母菌GS115,甲醇诱导表达,SDS-PAGE分析比较不同拷贝数转化子的表达产量,ELISA检测表达产物的生物活性。结果构建了戊型肝炎病毒(HEV)ORF2128-660多拷贝重组表达质粒,表达的目的蛋白相对分子质量约为59 000,4拷贝重组质粒表达水平高于其他拷贝数重组质粒表达水平。结论成功构建了HEVORF2128-660多拷贝表达质粒,提高了其在毕赤酵母中的表达水平。 展开更多
关键词 戊型肝炎病毒 多拷贝表达盒 同义点突变 毕赤酵母 pAO815载体
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四个脂肪酸合成酶基因在哺乳动物细胞中的超表达提高长链多不饱和脂肪酸生物合成效率 被引量:2
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作者 朱贵明 Abdulmomen Ali Mohammed Saleh +5 位作者 Said Ahmed Bahwal 汪坤福 王明富 王迪迪 葛堂栋 孙洁 《生物工程学报》 CAS CSCD 北大核心 2014年第9期1464-1472,共9页
DHA(22:6n-3)、EPA(20:5n-3)和ARA(20:4n-6)三种长链多不饱和脂肪酸在生物体内活性最强,它们在促进大脑发育和功能维持以及在预防和治疗心血管疾病、炎症、癌症等多种疾病方面有着重要作用。然而,尽管哺乳动物体内有完整的长链多不饱和... DHA(22:6n-3)、EPA(20:5n-3)和ARA(20:4n-6)三种长链多不饱和脂肪酸在生物体内活性最强,它们在促进大脑发育和功能维持以及在预防和治疗心血管疾病、炎症、癌症等多种疾病方面有着重要作用。然而,尽管哺乳动物体内有完整的长链多不饱和脂肪酸合成酶系,但哺乳动物合成这些长链多不饱和脂肪酸的效率很低而主要依赖于食物获取。本研究应用转基因方法,将哺乳动物来源的Δ6和Δ5脂肪酸去饱和酶以及Δ6和Δ5脂肪酸延长酶这4种酶的编码基因构建成为一个多基因表达载体,然后转染哺乳动物细胞HEK293T,实现了4个目的基因的超表达,再通过气质联用(GC-MS)分析证实了DHA、EPA和ARA等长链多不饱和脂肪酸的合成效率及水平显著增加,DHA的水平更是提高了2.5倍。由此可见,哺乳动物具有某种抑制长链多不饱和脂肪酸高水平合成的机制,但通过Δ6和Δ5脂肪酸去饱和酶以及Δ6和Δ5脂肪酸延长酶的超表达,能够打破哺乳动物这种抑制机制,从而显著提高DHA、EPA、ARA等的合成水平。同时,本研究的思路也为在转基因动物中生产长链多不饱和脂肪酸提供了重要的启示。 展开更多
关键词 多不饱和脂肪酸 脂肪酸去饱和酶 脂肪酸延长酶 多基因表达载体
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哺乳动物细胞多不饱和脂肪酸合成酶系的重建将亚油酸代谢转变为二十二碳六烯酸 被引量:1
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作者 朱贵明 Abdulmomen Ali Mohammed Saleh +6 位作者 Said Ahmed Bahwal 邱立红 孙洁 商宇 江旭东 葛堂栋 张涛 《生物工程学报》 CAS CSCD 北大核心 2015年第2期281-290,共10页
二十二碳六烯酸(DHA,22:6n-3)是一种长度为22个碳原子且含有6个双键的ω-3系多不饱和脂肪酸,在人体中具有重要生物学功能。人体及其他哺乳动物体内只能合成少量的DHA,更多的需求必须从食物中获取。然而,DHA的天然资源(主要是深海鱼类等... 二十二碳六烯酸(DHA,22:6n-3)是一种长度为22个碳原子且含有6个双键的ω-3系多不饱和脂肪酸,在人体中具有重要生物学功能。人体及其他哺乳动物体内只能合成少量的DHA,更多的需求必须从食物中获取。然而,DHA的天然资源(主要是深海鱼类等海洋产品)日趋枯竭,开发新型资源以满足不断扩大的市场需求势在必行。本研究利用转基因技术,在哺乳动物细胞中使Δ6和Δ5脂肪酸去饱和酶以及Δ6和Δ5脂肪酸延长酶超表达,同时表达来源于秀丽隐杆线虫Caenorhabditis elegans的Δ15去饱和酶和小眼虫Euglena gracilis的Δ4去饱和酶,结果表明,这6种酶的表达或超表达能将ω-6系的亚油酸(LA,18:2n-6)有效地转化为DHA(22:6n-3),后者的含量从对照组的16.74%提高到实验组的25.3%。本研究的策略及技术路线为将来利用遗传改造的哺乳动物生产珍稀的DHA(22:6n-3)等长链多不饱和脂肪酸产品提供了重要的启示。 展开更多
关键词 多不饱和脂肪酸 脂肪酸去饱和酶 脂肪酸延长酶 多基因表达载体 转基因
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利用TAC系统构建多个光合同化物运输蛋白基因转化载体和水稻的遗传转化
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作者 苏军 林美坤 +2 位作者 杜琳 洪海强 王锋 《福建农业学报》 CAS 2010年第1期1-7,共7页
采用人工染色体(TAC)多基因组装载体系统,将一组与水稻光合同化物运输转化有关基因构建在同一载体上,这些基因分别是蔗糖转运蛋白基因(OsSUT5),单糖转运蛋白(OsMST4)、细胞壁转化酶(OsCIN3)和ATP/ADP转运蛋白(OAAT),获得了包含这4个基... 采用人工染色体(TAC)多基因组装载体系统,将一组与水稻光合同化物运输转化有关基因构建在同一载体上,这些基因分别是蔗糖转运蛋白基因(OsSUT5),单糖转运蛋白(OsMST4)、细胞壁转化酶(OsCIN3)和ATP/ADP转运蛋白(OAAT),获得了包含这4个基因的植物表达载体pTAC747H-OAAT-SUT5-CIN3-MST4,质粒大小近30 kb。通过农杆菌转化法,将基因导入水稻,以探讨这些基因对水稻光合同化物运输和转化的调控作用。 展开更多
关键词 水稻 多基因表达载体 遗传转化
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