骨髓间充质干细胞抑制异体T淋巴细胞反应的实验研究 被引量：4

1

作者 陈健琳 冯凯 +6 位作者 郭子宽 乌仁娜 徐晨 李欲航 刘晓丹 毛宁 陈虎 《中华血液学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2005年第12期740-742,共3页

目的了解骨髓间充质干细胞(MSC)能否诱导异体T淋巴细胞反应性下降,探讨防治异基因造血干细胞移植中移植物抗宿主病的途径。方法骨髓来源的MSC经60Co照射后与异体T淋巴细胞共培养,用3H-TdR掺入的方法测定共培养前后T淋巴细胞增殖状态及... 目的了解骨髓间充质干细胞(MSC)能否诱导异体T淋巴细胞反应性下降,探讨防治异基因造血干细胞移植中移植物抗宿主病的途径。方法骨髓来源的MSC经60Co照射后与异体T淋巴细胞共培养,用3H-TdR掺入的方法测定共培养前后T淋巴细胞增殖状态及对异体细胞和非特异性分裂原刀豆素A(ConA)的反应性变化。结果MSC与异体T淋巴细胞共培养后,并不刺激T淋巴细胞的增殖;MSC作为刺激细胞与异体T淋巴细胞的首次及二次接触均不引起T淋巴细胞活化。单独T淋巴细胞的放射性核素每分钟闪烁计数(CPM)值为27529±969,首次接触与二次接触的CPM值分别为9126±654及13260±874。混合淋巴细胞反应结果表明,与MSC共孵育后的异体T淋巴细胞对MSC同源淋巴细胞反应性下降,共孵育前的CPM值为45876±5285,共孵育后的CPM值为9850±1618,ConA刺激的细胞增殖活性也显著减低。结论骨髓MSC在体外可使异体T淋巴细胞对异体抗原的反应性减低,这种作用与其低免疫原性有关。 展开更多

关键词 多能干细胞 T淋巴细胞 免疫活性

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CXCR4基因转染对大鼠真皮多能干细胞生物学性状的影响 被引量：2

2

作者 宗兆文 程天民 +4 位作者 冉新泽 粟永萍 李楠 董世武 史春梦 《实用医学杂志》 CAS 北大核心 2009年第1期22-24,共3页

目的:观察CXCR4基因转染对大鼠真皮多能干细胞(dermal multipotent stem cells,dMSCs)分化、增殖、迁移等生物学性状的影响。方法:分别采用荧光激活细胞分类法、绘制细胞生长曲线法、细胞培养分化诱导法和Transwell小室培养体系中化学... 目的:观察CXCR4基因转染对大鼠真皮多能干细胞(dermal multipotent stem cells,dMSCs)分化、增殖、迁移等生物学性状的影响。方法:分别采用荧光激活细胞分类法、绘制细胞生长曲线法、细胞培养分化诱导法和Transwell小室培养体系中化学趋化法,观察CXCR4基因转染后,CXCR4阳性细胞数目以及dMSCs增殖、分化和迁移能力的变化情况。结果:CXCR4基因转染后,CXCR4阳性dMSCs数目明显高于对照组(P<0.05),dMSCs增殖能力略高于对照组,但差异无统计学意义(P>0.05);从Transwell小室上层迁移到下层的dMSCs明显高于对照组(P<0.05)。同时,转染CXCR4基因的dMSCs可向成脂、成骨、成肌细胞方向分化。结论:CXCR4基因转染后,dMSCs中CXCR4表达增加,并有效地增强其迁移能力,且未影响dMSCs的增殖和分化能力。 展开更多

关键词 多能干细胞 真皮 CXCR4 基因转染

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人皮肤成纤维细胞来源诱导性多潜能干细胞的建立和鉴定 被引量：2

3

作者 蒋知新 张清华 +3 位作者 艾民 沙杭 高毅 卢海 《中国医师杂志》 CAS 2011年第8期1026-1029,1032,共5页

目的建立和鉴定人皮肤成纤维细胞（HSF）来源的诱导性多潜能干细胞（iPS）。方法利用逆转录病毒将Sox2、Klf4、Oct4、c-Myc基因导入原代HSF细胞，将其编程为iPS细胞。检测细胞内源、外源基因表达量，鉴定外源基因是否插入iPS细胞，分析... 目的建立和鉴定人皮肤成纤维细胞（HSF）来源的诱导性多潜能干细胞（iPS）。方法利用逆转录病毒将Sox2、Klf4、Oct4、c-Myc基因导入原代HSF细胞，将其编程为iPS细胞。检测细胞内源、外源基因表达量，鉴定外源基因是否插入iPS细胞，分析细胞核型，细胞碱性磷酸酶染色和免疫荧光染色，体内分化畸胎瘤，体外分化拟胚体实验，对建立的iPS细胞进行鉴定。结果（1）iPS细胞形态类似于胚胎干细胞（ES）。（2）iPS细胞内源多能基因（Nanog、Oct4、Rexl、Sox2）表达量增高，外源编程基因（Sox2、Klf4、Oct4、c-Myc）表达量降低。（3）琼脂糖凝胶电泳实验证实外源基因插入iPS细胞核内。（4）iPS细胞核型正常，碱性磷酸酶活性增高，表达ES细胞特异性蛋白。（5）iPS细胞在体内能分化为畸胎瘤，在体外能分化为拟胚体。结论新建立的iPS细胞类似于ES细胞具有多向分化潜能。 展开更多

关键词 皮肤/细胞学 成纤维细胞 多能干细胞 细胞培养技术

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间充质干细胞干性维持的研究进展 被引量：1

4

作者 郑力铭 宋凯 蒋青 《中华实验外科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2018年第11期2165-2169,共5页

随着组织工程学的发展，间充质干细胞作为最常用的种子细胞，在组织损伤后修复中有着较好的应用前景。但在干细胞体外培养扩增及移植人体内参与组织修复的过程中，干细胞自身的干性下降，难以较好分化成为特定的组织类型始终是一个难题... 随着组织工程学的发展，间充质干细胞作为最常用的种子细胞，在组织损伤后修复中有着较好的应用前景。但在干细胞体外培养扩增及移植人体内参与组织修复的过程中，干细胞自身的干性下降，难以较好分化成为特定的组织类型始终是一个难题。因此本文对间充质干细胞干性的影响因素、评估方法以及干性维持的机制和方法进行综述。 展开更多

关键词 间质干细胞 组织工程 细胞分化 细胞衰老 多能干细胞

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胚胎干细胞和诱导多能干细胞源性肝细胞样细胞研究进展

5

作者 陈银银 薛志刚 +1 位作者 谢渭芬 范国平 《胃肠病学》 2011年第1期48-50,共3页

肝硬化、原发性肝癌、代谢性肝病等终末期肝病的治疗正成为全球棘手的医疗问题。肝细胞移植(HT)有望成为终末期肝病的替代疗法,但肝细胞来源紧缺、体外增殖困难等限制了HT的临床应用。干细胞的发现为解决上述问题提供了新的思路。胚胎... 肝硬化、原发性肝癌、代谢性肝病等终末期肝病的治疗正成为全球棘手的医疗问题。肝细胞移植(HT)有望成为终末期肝病的替代疗法,但肝细胞来源紧缺、体外增殖困难等限制了HT的临床应用。干细胞的发现为解决上述问题提供了新的思路。胚胎干细胞(ESCs)和诱导多能干细胞(iPSCs)分化为肝细胞样细胞(HLCs)的研究,可为临床细胞替代治疗提供合适的细胞来源,亦在药物评估和肝脏发生等基础研究方面起重要作用。本文就近年ESCs和iPSCs体外定向分化为HLCs的研究进展作一综述。 展开更多

关键词 胚胎干细胞 多能干细胞 肝细胞 干细胞移植 分化

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脐带间充质细胞来源诱导性多潜能干细胞的建立和鉴定 被引量：1

6

作者 艾民 张清华 +3 位作者 蒋知新 沙杭 高毅 卢海 《中国医师杂志》 CAS 2012年第3期289-293,共5页

目的建立和鉴定脐带间充质细胞（UMC）来源的诱导性多潜能干细胞（iPS）。方法以逆转录病毒作为Sox2、KIf4、Oct4、c—Myc基因转移载体，将UMC细胞编程为iPS细胞。应用RT-PCR检测细胞基因表达量，鉴定外源编程基因是否整合到iPS细胞核... 目的建立和鉴定脐带间充质细胞（UMC）来源的诱导性多潜能干细胞（iPS）。方法以逆转录病毒作为Sox2、KIf4、Oct4、c—Myc基因转移载体，将UMC细胞编程为iPS细胞。应用RT-PCR检测细胞基因表达量，鉴定外源编程基因是否整合到iPS细胞核内，分析细胞核型，对细胞进行碱性磷酸酶染色和免疫荧光染色，体内分化畸胎瘤和体外分化拟胚体实验，对建立的iPS细胞进行鉴定。结果（1）iPS细胞形态学上类似于胚胎干细胞（ES）。（2）iPS与ES细胞内源多能基因（Nanog、Oct-4、Rexl、Sox-2）表达谱相类似，外源编程基因（Sox-2、KIf4、Oct-4、c—Myc）表达发生沉默。（3）外源编程基因已被插入到iPS细胞核内。（4）iPS细胞核型正常，碱性磷酸酶活性增高，表达Es细胞特异性膜蛋白（SSEA3、SSEA4），质蛋白（TRA-1-60、TRA-1—81），核蛋白（Nanog）。（5）iPS细胞在体内能分化为畸胎瘤，在体外能分化为拟胚体。结论iPS细胞类似于Es细胞具有多向分化潜能。 展开更多

关键词 脐带/细胞学 间质细胞/细胞学 多能干细胞

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脑衍生神经营养因子对胚胎神经干细胞神经细胞黏附分子的表达

7

作者 宣爱国 龙大宏 +1 位作者 陈艳 曾凡表 《广州医学院学报》 2008年第6期1-4,共4页

目的:探讨脑源性神经营养因子(BDNF)对胚胎神经干细胞神经细胞黏附分子(NCAM)表达的影响。方法:体外培养和鉴定SD大鼠海马胚胎神经干细胞,从而获得神经干细胞系。实验分为BDNF组和对照组,分别在培养后12 h和24 h对神经干细胞NCAM的表达... 目的:探讨脑源性神经营养因子(BDNF)对胚胎神经干细胞神经细胞黏附分子(NCAM)表达的影响。方法:体外培养和鉴定SD大鼠海马胚胎神经干细胞,从而获得神经干细胞系。实验分为BDNF组和对照组,分别在培养后12 h和24 h对神经干细胞NCAM的表达进行免疫细胞组织化学检测,图象分析NCAM阳性个数、胞体面积、细胞周长。结果:来源于胚胎的神经干细胞增殖能力较强且Nestin阳性,神经干细胞能够表达NCAM,且BDNF组高于对照组,进一步观察发现BDNF组NCAM的各项参数值在24 h明显高于12 h(P<0.05)。结论:BDNF能促进NCAM在神经干细胞中的表达。 展开更多

关键词 脑源性神经营养因子 神经细胞黏附分子 多能干细胞 NESTIN 胚胎鼠

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hBD_2修饰真皮多能干细胞促进感染创面修复的初步实验研究 被引量：4

8

作者 李楠 肖桃元 +6 位作者 粟永萍 徐辉 王军平 宗兆文 董世武 冉新泽 刘志君 《第三军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2006年第5期425-427,共3页

目的观察人β防御素2(humanβdefensin2,hBD2)修饰的大鼠真皮多能干细胞(dermalmultipotentstemcells,dMSCs)移植后对细菌感染创面修复的影响。方法制作大鼠全层皮肤切割伤伴感染模型,点状注射的方法将hBD2腺病毒载体转染修饰的dMSCs移... 目的观察人β防御素2(humanβdefensin2,hBD2)修饰的大鼠真皮多能干细胞(dermalmultipotentstemcells,dMSCs)移植后对细菌感染创面修复的影响。方法制作大鼠全层皮肤切割伤伴感染模型,点状注射的方法将hBD2腺病毒载体转染修饰的dMSCs移植到伤口,通过测定痂下菌量及创面愈合面积百分率和创面愈合时间等评价hBD2修饰的dMSCs局部移植的促愈效果。结果和局部单纯移植dMSCs组和单纯损伤组相比,hBD2修饰的dMSCs移植组痂下菌含量低(P<0.05),且创面愈合时间明显缩短(P<0.05)。结论hBD2修饰的dMSCs可有效地促进大鼠感染创面的修复。 展开更多

关键词 人Β防御素2 真皮多能干细胞 创面修复 感染

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人β防御素2腺病毒表达载体的构建及其在大鼠真皮多能干细胞中的表达 被引量：3

9

作者 李楠 肖桃元 +5 位作者 粟永萍 宗兆文 徐辉 王军平 冉新泽 刘志君 《创伤外科杂志》 2006年第1期69-72,共4页

目的构建和鉴定人β防御素2(HBD2)的重组腺病毒表达载体,并观察其转染大鼠真皮多能干细胞(dMSCs)后的表达。方法反转录聚合酶链反应(RT-PCR)扩增HBD2全长cDNA,亚克隆至穿梭质粒(pAdTrack-CMV)中,然后转化含骨架质粒(pAdEasy-1)的大肠杆... 目的构建和鉴定人β防御素2(HBD2)的重组腺病毒表达载体,并观察其转染大鼠真皮多能干细胞(dMSCs)后的表达。方法反转录聚合酶链反应(RT-PCR)扩增HBD2全长cDNA,亚克隆至穿梭质粒(pAdTrack-CMV)中,然后转化含骨架质粒(pAdEasy-1)的大肠杆菌B J5183,通过同源重组产生腺病毒载体质粒。PacⅠ酶切阳性的重组质粒后转染293细胞,包装出重组病毒载体。用所得重组腺病毒感染dMSCs细胞,并采用RT-PCR和荧光免疫组织化学检测其在dMSCs中的表达情况。结果经测序、酶切及聚合酶链反应(PCR)鉴定,表明已成功地扩增到HBD2全长cDNA,并将其顺序克隆到穿梭质粒和骨架质粒中,进而组装出腺病毒表达载体。经RT-PCR和免疫组织化学证实构建的病毒载体可感染dMSCs,并有效表达HBD2。结论本实验成功地构建了含HBD2基因的腺病毒表达载体,并证实其可在dMSCs中表达。 展开更多

关键词 人Β防御素2 腺病毒载体 真皮多能干细胞

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与脐血多能干细胞共培养的小鼠淋巴细胞对AD小鼠的免疫调节作用 被引量：2

10

作者 贺毅 李恒 +3 位作者 张凤 唐小三 张贵涛 李晓红 《基础医学与临床》 CSCD 2017年第8期1072-1076,共5页

目的探讨与脐血多能干细胞(CB-SCs)共培养的淋巴细胞对阿尔兹海默病(AD)小鼠的免疫调节作用及治疗潜能。方法从人脐血中分离培养CB-SCs;从小鼠脾脏分离淋巴细胞;淋巴细胞与CB-SCs共同培养72 h或淋巴细胞单独培养;将AD小鼠随机分为实验... 目的探讨与脐血多能干细胞(CB-SCs)共培养的淋巴细胞对阿尔兹海默病(AD)小鼠的免疫调节作用及治疗潜能。方法从人脐血中分离培养CB-SCs;从小鼠脾脏分离淋巴细胞;淋巴细胞与CB-SCs共同培养72 h或淋巴细胞单独培养;将AD小鼠随机分为实验组与对照组,实验组尾静脉注射与CB-SCs共培养的淋巴细胞,对照组尾静脉注射单独培养的淋巴细胞。注射结束后进行行为学实验,流式细胞学检测外周血淋巴细胞中调节性T细胞(Tregs)比例,ELISA检测小鼠外周血血浆中TNF-α和IL-10的表达,PCR检测AD小鼠脑内炎性因子的表达,免疫荧光染色检测AD小鼠脑内淀粉样斑块(β-amyloid,Aβ)含量。结果 1)实验组小鼠的空间学习记忆能力得到改善;2)实验组小鼠脑内的Aβ沉积量低于对照组;3)实验组外周血淋巴细胞中Tregs百分比及血浆中的抗炎因子IL-10浓度高于对照组(P<0.05),而血浆中的促炎因子TNF-α浓度低于对照组(P<0.001);4)实验组小鼠脑内IL-10的mRNA表达量高于对照组(P<0.05),而TNF-α的mRNA表达量低于对照组(P<0.05)。结论与脐血多能干细胞共培养的淋巴细胞对AD小鼠具有免疫治疗作用,主要通过增加Tregs细胞的比例并增强其抗炎功能来发挥作用。 展开更多

关键词 阿尔兹海默病 脐血多能干细胞 淋巴细胞 免疫调节

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miR-1908过表达的人脂源性多能干细胞基因表达谱分析 被引量：1

11

作者 黄芳延 杨蕾 +6 位作者 尤梁慧 季晨博 史春梅 陈玲 庞玲霞 倪毓辉 郭锡熔 《中华实用儿科临床杂志》 CSCD 北大核心 2016年第7期496-498,共3页

目的研究miR-1908对脂源性多能干细胞基因表达谱的影响，并探讨其在肥胖发生过程中的可能作用。方法构建miR-1908过表达的脂源性多能干细胞，利用基因表达谱芯片技术筛选得到与阴性对照组差异表达的基因。挑选3个差异表达基因，利用Real... 目的研究miR-1908对脂源性多能干细胞基因表达谱的影响，并探讨其在肥胖发生过程中的可能作用。方法构建miR-1908过表达的脂源性多能干细胞，利用基因表达谱芯片技术筛选得到与阴性对照组差异表达的基因。挑选3个差异表达基因，利用Real—timePCR技术验证miRNA芯片检测结果。结果基因表达谱芯片结果显示，差异表达的123个基因中，2倍以上上调的基因有69个，下调的有54个，差异均有统计学意义（P均〈0．05）。将这些基因按照功能分类，分为15组：高分子配合物亚基基因（18／123，14．63％），RNA结合相关基因（16／123，13．01％），凋亡相关基因（14／123，11．38％），细胞程序性死亡相关基因（14／123，11．38％），磷酸酶活性相关基因（9／123，7．32％），蛋白结构域结合相关基因（10／123，8．13％），蛋白磷酸酶活性相关基因（8／123，6．50％），分子成分分解相关基因（5／123，4．07％），肾脏发育相关基因（6／123，4．88％），RNA聚合酶Ⅱ转录启动子基因（9／123，7．32％），泌尿生殖系统发育相关基因（6／123，4．88％），依赖DNA的转录基因（9／123，7．32％），RNA合成相关基因（9／123，7．32％），I型干扰素合成过程相关基因（2／123，1．63％）及I型干扰素合成产物相关基因（2／123，1．63％）。结论miR-1908可能在肥胖发生的过程中发挥调控作用。在下调表达的基因中验证了miR-1908可能直接作用的靶基因，为研究miR-1908在肥胖发生中的作用奠定了基础，同时也为miRNA的生物学功能及其作用机制的研究提供了参考。 展开更多

关键词 miR-1908 脂源性多能干细胞 基因芯片 肥胖

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