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SIK2 shRNA重组腺病毒载体构建及其在3T3-L1脂肪细胞的表达 被引量：1
1
作者 杜静 杜玲 +3 位作者 宴耀明 周薇 陆红 邹德学 《中国实验诊断学》 北大核心 2011年第10期1614-1617,共4页
目的构建特异性小鼠盐诱导基因(Salt induced kinase2,SIK2)的shRNA腺病毒载体,干扰脂肪细胞中SIK2的表达。方法设计3对靶向SIK2的shRNA,插入穿梭质粒pENTR/U6载体,转染3T3-L1脂肪细胞,通过Real-timePCR方法筛选最佳沉默SIK2效果的穿梭... 目的构建特异性小鼠盐诱导基因(Salt induced kinase2,SIK2)的shRNA腺病毒载体,干扰脂肪细胞中SIK2的表达。方法设计3对靶向SIK2的shRNA,插入穿梭质粒pENTR/U6载体,转染3T3-L1脂肪细胞,通过Real-timePCR方法筛选最佳沉默SIK2效果的穿梭质粒,经腺病毒同源重组后,重组小鼠SIK2shRNA腺病毒载体经脂质体转染HEK293A细胞,在细胞内包装获得腺病毒颗粒AdV-SIK2-shRNA,并进行大量扩增和纯化。纯化的腺病毒感染成熟的3T3-L1脂肪细胞,通过Real-time PCR及免疫印迹法检测鼠SIK2在3T3-L1脂肪细胞中的表达水平。结果纯化后的Ad-shRNA-SIK2重组腺病毒载体可特异下调成熟3T3-L1脂肪细胞SIK2 mRNA和SIK2蛋白的表达。结论干扰3T3-L1脂肪细胞SIK2表达的短发夹RNA重组腺病毒载体构建成功。 展开更多
关键词 sik2 腺病毒载体 短发夹RNA 3T3-L1脂肪细胞
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小鼠SIK2重组腺病毒载体在3T3-L1脂肪细胞中的表达 被引量：1
2
作者 杜静 周钧 +3 位作者 周薇 陆红 宴耀明 邹德学 《中国实验诊断学》 2008年第11期1355-1358,共4页
目的利用小鼠盐诱导基因(Salt induced kinase2,SIK2)的重组腺病毒载体,研究脂肪细胞中SIK2的表达。方法重组小鼠SIK2基因腺病毒载体经脂质体转染293A细胞,在细胞内包装获得腺病毒颗粒AdV-SIK2,并进行大量扩增和纯化。纯化的腺病毒感染... 目的利用小鼠盐诱导基因(Salt induced kinase2,SIK2)的重组腺病毒载体,研究脂肪细胞中SIK2的表达。方法重组小鼠SIK2基因腺病毒载体经脂质体转染293A细胞,在细胞内包装获得腺病毒颗粒AdV-SIK2,并进行大量扩增和纯化。纯化的腺病毒感染成熟的3T3-L1脂肪细胞,通过real-time PCR及免疫印迹法检测鼠SIK2在3T3-L1脂肪细胞中的表达。结果纯化后的病毒滴度达0.5×1012病毒颗粒/ml。重组腺病毒载体能在成熟3T3-L1脂肪细胞中高表达鼠SIK2 mRNA和SIK2蛋白。结论重组腺病毒载体可介导外源小鼠SIK2基因在脂肪细胞的表达,建立了小鼠SIK2高表达脂肪细胞模型,为进一步研究SIK2的脂代谢功能奠定了基础。 展开更多
关键词 sik2 腺病毒载体 基因表达 3T3-L1脂肪细胞
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