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scBsAb1/17双特异性抗体对小鼠类风湿性关节炎模型的治疗效果 被引量：5
1
作者 齐剑英 郭茉 +7 位作者 叶贤龙 阚方明 张宇 郝智超 徐黎明 任桂萍 王文飞 李德山 《中国药理学通报》 CAS CSCD 北大核心 2013年第3期366-371,共6页
目的比较不同剂量scBsAb1/17对Ⅱ型胶原(CII)诱导类风湿性关节炎(CIA)模型小鼠的治疗效果,及scBsAb1/17双特异性抗体与单价抗体(anti-IL-1βscFv和anti-IL-17scFv)在CIA模型小鼠中的治疗效果。方法利用CII建立小鼠类风湿性关节炎模型,... 目的比较不同剂量scBsAb1/17对Ⅱ型胶原(CII)诱导类风湿性关节炎(CIA)模型小鼠的治疗效果,及scBsAb1/17双特异性抗体与单价抗体(anti-IL-1βscFv和anti-IL-17scFv)在CIA模型小鼠中的治疗效果。方法利用CII建立小鼠类风湿性关节炎模型,小鼠成模后开始治疗,每2 d给药1次,治疗29 d。治疗结束后对小鼠关节炎指数进行临床评分,检测各组小鼠血清中CII抗体、CII特异性刺激的脾细胞增殖指数和脾脏中IL-2、IL-1β、IFN-γ、IL-6和TNF-α等细胞因子的表达水平。结果与CIA模型对照组相比,所有治疗组都能明显减轻CIA小鼠的临床症状,并明显降低血清中CII抗体水平、脾细胞增殖指数及脾脏中TNF-α、IL-6、IL-2、IL-1β和IFN-γ的表达量。相同剂量下scBsAb1/17治疗组的脾细胞增殖指数明显低于anti-IL-1βscFv治疗组(P<0.05);并且scBsAb1/17治疗组小鼠脾脏中IL-6、IL-2、IL-1β和IFN-γ的表达量明显低于anti-IL-1βscFv和anti-IL-17AscFv单独治疗组(P<0.01或P<0.05)。结论 scBsAb1/17及单价抗体对CIA模型小鼠都有治疗效果;不同剂量scBsAb1/17对CIA模型鼠的治疗效果呈剂量依赖性;相同剂量条件下,scBsAb1/17的治疗效果要优于单价抗体。 展开更多
关键词 双特异抗体 单价抗体 类风湿性关节炎(RA) Ⅱ型胶原(CII) IL-1Β IL-17A
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抗人层粘连蛋白Fab＇的制备 被引量：4
2
作者 陈金国 柴明胜 +1 位作者 叶仲贤 朱炳钗 《免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 1996年第1期53-55,共3页
用ＤＥＡＥ纤维素ＤＥ－５２反相吸附纯化抗人层粘连蛋白（ＬＮ）ＩｇＧ，ＩｇＧ回收率达１１．６ｍｇ／ｍｌ血清。胃蛋白酶消化ＩｇＧ成Ｆ（ａｂ＇）２，再用１０ｍｍｏｌ／Ｌ２－巯基乙醇３７℃反应９０ｍｉｎ还原成Ｆａｂ＇，回收率... 用ＤＥＡＥ纤维素ＤＥ－５２反相吸附纯化抗人层粘连蛋白（ＬＮ）ＩｇＧ，ＩｇＧ回收率达１１．６ｍｇ／ｍｌ血清。胃蛋白酶消化ＩｇＧ成Ｆ（ａｂ＇）２，再用１０ｍｍｏｌ／Ｌ２－巯基乙醇３７℃反应９０ｍｉｎ还原成Ｆａｂ＇，回收率约８１％，放免效价为１：３５００．测得纯化的ＩｇＧ、Ｆ（ａｂ＇）２及Ｆａｂ＇分子量分别为１５００００、９００００、４５０００，与理论值相近。放免检测中用Ｆａｂ＇取代抗血清可纠正对血清ＬＮ测定的误差，从而建立检测ＬＮ的准确、灵敏方法。 展开更多
关键词 Fab'片段 单价抗体 层粘连蛋白 放射免疫分析
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抗间质上皮转化因子(c-Met)单价抗体的制备及生物学活性检测
3
作者 郭佳 蒋明 +5 位作者 靳令经 尹衍新 孙慧 于丽华 毛玉婷 房健民 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2016年第11期1544-1548,1553,共6页
目的用抗人间质上皮转化因子(c-Met)阻断型嵌合抗体ch3E1D7表达质粒构建单价抗体慢病毒穿梭质粒,利用慢病毒表达系统实现其在HEK293T细胞中快速表达,并对纯化后抗体的亲和力及中和活性进行检测。方法设计抗c-Met的单价抗体,命名为mono3E... 目的用抗人间质上皮转化因子(c-Met)阻断型嵌合抗体ch3E1D7表达质粒构建单价抗体慢病毒穿梭质粒,利用慢病毒表达系统实现其在HEK293T细胞中快速表达,并对纯化后抗体的亲和力及中和活性进行检测。方法设计抗c-Met的单价抗体,命名为mono3E1D7,利用基因工程技术构建单价抗体三条链的慢病毒表达载体,磷酸钙法转染HEK293T细胞,表达的单价抗体经蛋白A琼脂糖4B亲和层析柱纯化,SDS-PAGE检测抗体完整性,ELISA检测单价抗体在体外阻断c-Met与其配体HGF结合的生物学活性。结果感染单价抗体慢病毒的HEK293T细胞上清纯化后,SDS-PAGE分析可见55 ku的重链、25 ku的轻链以及30 ku的杵状结构链(Knob)三条带。且纯化后的单价抗体能与c-Met抗原结合,同时还具有阻断c-Met与HGF结合的中和活性。结论成功获得抗人c-Met阻断型单价抗体。 展开更多
关键词 C-MET 嵌合抗体 单价抗体 慢病毒表达
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HIV-1特异性单抗2G12单价抗体的构建及活性分析
4
作者 冯一帆 刘雪 +3 位作者 徐柯 冯霞 曾毅 余双庆 《中国病毒病杂志》 CAS 2015年第3期171-175,共5页
目的构建单价抗体并与IgG比较结合活性及中和活性的差异。方法对IgG1抗体重链恒定区基因进行改造,分别构建N端截短型的IgG1重链恒定区基因IgG1-tH和去除绞链区二硫键及CH2、CH3区的稳定非共价键的2G12重链基因2G12-HM。将IgG1-tH与2G12... 目的构建单价抗体并与IgG比较结合活性及中和活性的差异。方法对IgG1抗体重链恒定区基因进行改造,分别构建N端截短型的IgG1重链恒定区基因IgG1-tH和去除绞链区二硫键及CH2、CH3区的稳定非共价键的2G12重链基因2G12-HM。将IgG1-tH与2G12抗体重链和轻链基因表达质粒共转染293T细胞,表达含有完整Fc的单价抗体;将2G12-HM和轻链基因表达质粒共转染293T细胞,表达半分子型的单价抗体。通过非还原SDS-PAGE对表达抗体的大小进行鉴定,并用ELISA和微量中和实验比较原型2G12抗体和单价抗体的结合活性及中和活性。结果以HIV-1中和抗体2G12为模型通过基因改造成功表达了两种单价抗体,一种为完整的重链、轻链以及N端截短型的重链分子组成的包含1个Fab和1个Fc的单价抗体2G12-tH;另一种为1条重链和1条轻链组成的半分子型单价抗体2G12-HM。两种抗体均可与抗原有效结合,且与IgG分子相比差异无统计学意义。中和实验结果发现IgG抗体能中和的,病毒两种单价抗体也均能中和。结论成功构建了两种单价抗体,与IgG相比其结合活性和中和活性无明显变化。 展开更多
关键词 人类免疫缺陷病毒 单价抗体 中和活性
原文传递
重症肌无力治疗性单价IgG抗体基因的构建
5
作者 李钟燮 孟繁平 +6 位作者 孙昌元 李芳芳 金权鑫 李红花 李英信 M.Stassen M.de Baets 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2009年第11期1003-1005,共3页
目的:构建一株对重症肌无力(MG)具有特异性免疫治疗作用的单价IgG类抗体基因。方法:应用定点突变技术,将致病性抗乙酰胆碱受体(AChR)抗体IgG637的重(H)链第322位氨基酸进行K322A突变,获得的突变型抗体IgG637/K322A基因再进行H链互补决定... 目的:构建一株对重症肌无力(MG)具有特异性免疫治疗作用的单价IgG类抗体基因。方法:应用定点突变技术,将致病性抗乙酰胆碱受体(AChR)抗体IgG637的重(H)链第322位氨基酸进行K322A突变,获得的突变型抗体IgG637/K322A基因再进行H链互补决定区3(CDR3)缺失突变,获得突变型抗体IgG637/K322A/CDR3ΔPLKP基因。经转化大肠杆菌XL1-Blue进行增殖后,转染哺乳类细胞CHO-k1进行表达,表达产物经ELIAS检测与补体C3的结合活性,经RIA检测与特异性抗原人AChR的结合活性。突变抗体H链再经杵(T366Y)臼(Y407T)突变,以利于异源H链的配对。结果:突变型抗体IgG637/K322A丧失了与补体C3结合的能力,突变型抗体IgG637/K322A/CDR3ΔPLKP丧失了与人AChR结合的能力。测序证实已经获得了预想的杵臼突变序列。结论:已经成功的制备了无补体激活能力的单价IgG类抗AChR抗体基因。 展开更多
关键词 重症肌无力 单价抗体 定点突变 免疫球蛋白G
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