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携带恶性疟原虫ama1基因的重组MVA构建及免疫性分析 被引量：2
1
作者 李珣 缪军 +3 位作者 薛采芳 刘忠湘 雷俊川 王宪锋 《中华微生物学和免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2003年第10期792-795,共4页
目的　构建稳定表达恶性疟原虫 (Pf)顶端膜抗原 1(AMA1)的重组改良安卡拉痘苗病毒 (MVA) ,对其诱导小鼠免疫应答的特性进行分析。方法　构建包含PfAMA1编码基因的重组载体pⅢdHR .ssp E ,转染MVA感染的BHK2 1细胞 ,经同源重组插入MVA基... 目的　构建稳定表达恶性疟原虫 (Pf)顶端膜抗原 1(AMA1)的重组改良安卡拉痘苗病毒 (MVA) ,对其诱导小鼠免疫应答的特性进行分析。方法　构建包含PfAMA1编码基因的重组载体pⅢdHR .ssp E ,转染MVA感染的BHK2 1细胞 ,经同源重组插入MVA基因组的deletionⅢ位点 ,利用宿主范围基因k1l在RK13细胞中对rMVA进行瞬时筛选 ,用获得的rMVA E(K1L)感染BHK2 1并进行传代 ,经内部同源重组去除k1l后获得rMVA E。采用PCR、IFA和Westernblot对rMVA E的基因组序列和重组抗原的表达情况进行鉴定。用不同剂量的rMVA E经腹腔接种免疫BALB c小鼠 ,ELISA检测特异性抗体应答的水平并分析IgG亚类 (IgG1和IgG2a) ,取脾细胞用重组抗原在体外进行刺激增殖。结果　获得了可稳定表达PfAMA1的重组MVA ,经 3次腹腔接种不同剂量 (10 7～ 10 8TCID50 )后的rM VA E诱导BALB c小鼠产生了水平相当 (P >0 .1)的抗AMA1抗体 ,其IgG亚类以IgG2a为主 ,各免疫组脾细胞在体外对AMA1抗原的再刺激均产生了明显的回忆应答。结论　成功构建了携带Pfama1基因的重组MVA。rMVA E可诱导小鼠产生AMA1特异的免疫应答。 展开更多
关键词 恶性疟原虫 ama1 基因重组 mva构建 免疫性 顶端膜抗原1 安卡拉痘苗病毒
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插入结核抗原基因的重组痘苗病毒对结核分枝杆菌感染恒河猴模型的免疫保护性 被引量：2
2
作者 朱琳 张群 +2 位作者 唐志佼 张晶 楼觉人 《中国生物制品学杂志》 CAS CSCD 2015年第12期1245-1252,共8页
目的重组亚牛痘病毒载体疫苗作为卡介苗的加强疫苗对结核病的免疫预防效果。方法将18只雌性中国恒河猴随机分为3组：BCG、BCG＋A和BCG＋AE组,每组6只,BCG＋A和BCG＋AE组用4×10^5 CFU的BCG经皮内初免后9周,分别用重组亚牛痘病毒MVA-... 目的重组亚牛痘病毒载体疫苗作为卡介苗的加强疫苗对结核病的免疫预防效果。方法将18只雌性中国恒河猴随机分为3组：BCG、BCG＋A和BCG＋AE组,每组6只,BCG＋A和BCG＋AE组用4×10^5 CFU的BCG经皮内初免后9周,分别用重组亚牛痘病毒MVA-Ag85a（A）或MVA-Ag85a-ESAT6（AE）,按1×10^9 PFU/只的剂量通过皮内加强免疫,BCG组仅用BCG免疫,另设未免疫组（Non-V组）：3只雄性中国恒河猴。加强免疫后9周,用结核分枝杆菌H37Rv株通过纤维支气管镜感染所有实验猴右肺下叶,攻毒剂量为41 CFU/只。经24周定期观察记录实验动物的临床表现,并采血进行血清学和免疫学检测。实验猴死亡或第24周处死后,全部尸检并进行病理学组织评分、组织细菌载量计数等检测。结果在实验终点,Non-V组仅存活1只实验猴,而免疫组3组的存活率均为100%。体外免疫试验中,经重组痘苗病毒免疫的试验组表现出抗原特异性IFNγ明显升高（P〈0.05）;组织病理总评分和细菌载量测定显示,BCG＋A组优于BCG组,而BCG＋AE与BCG组比较,未表现出优势。结论重组痘苗病毒MVA-Ag85a和MVA-Ag85a-ESAT6均能诱导抗原特异性IFNγ分泌,BCG＋A组较BCG单次免疫组有更好的免疫保护趋势;BCG＋AE组未表现出较BCG组更好的免疫保护效果。 展开更多
关键词 结核 AG85A ESAT6 痘苗病毒 亚牛痘病毒ankara株 恒河猴
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带有标记基因自删除系统的穿梭载体的构建与功能鉴定
3
作者 李莉莉 王湛 +4 位作者 周玉柏 张芳 沈思嗣 李泽琳 曾毅 《病毒学报》 CAS CSCD 北大核心 2015年第5期507-514,共8页
构建一个具有标记基因自动删除功能的穿梭质粒载体pZL-EGFP,用于快速准确地筛选符合临床试验要求的携带有外源目标基因的重组痘苗病毒MVA(rMVA)。为构建pZL-EGFP,将原有穿梭质粒pSC11的标记基因由LacZ置换成EGFP基因,并在EGFP基因的两... 构建一个具有标记基因自动删除功能的穿梭质粒载体pZL-EGFP,用于快速准确地筛选符合临床试验要求的携带有外源目标基因的重组痘苗病毒MVA(rMVA)。为构建pZL-EGFP,将原有穿梭质粒pSC11的标记基因由LacZ置换成EGFP基因,并在EGFP基因的两侧插入TKL的同源序列。pZL-EGFP与MVA病毒共转染BHK-21细胞后经10代传代,一次噬斑筛选以获得携带有外源基因且EGFP已被删除的rMVA。最终获得的rMVA通过PCR和Western Blot方法对pZL-EGFP的功能进行鉴定。成功构建出具有标记基因自动删除功能的穿梭质粒载体pZL-EGFP,包装获得的重组痘苗病毒可在传代过程中自动删除标记基因EGFP。基因删除未影响重组病毒的活力,外源蛋白的表达具有良好的稳定性。pZL-EGFP能与MVA病毒在BHK-21细胞内发生同源重组并包装出rMVA,其携带的标记基因可在病毒传代过程中通过分子内同源重组被自动删除,基因删除不影响重组病毒的活力及外源基因的表达,这为进一步的研究奠定了坚实的基础。 展开更多
关键词 穿梭质粒 mva 标记基因 同源重组 HPV 疫苗
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