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微小RNA-520e对非小细胞肺癌细胞侵袭迁移和JAK1/STAT3信号通路的影响 被引量：4
1
作者 言成一 杨继承 袁跃西 《临床肿瘤学杂志》 CAS 北大核心 2019年第11期978-983,共6页
目的探讨微小RNA-520e(miR-520e)对非小细胞肺癌(NSCLC)细胞侵袭迁移和Janus激酶1(JAK1)/信号转导和转录激活因子3(STAT3)信号通路的影响。方法采用实时定量PCR(QPCR)检测人肺上皮细胞BEAS-2B和NSCLC细胞株H1299、H1975、H1650、A549的m... 目的探讨微小RNA-520e(miR-520e)对非小细胞肺癌(NSCLC)细胞侵袭迁移和Janus激酶1(JAK1)/信号转导和转录激活因子3(STAT3)信号通路的影响。方法采用实时定量PCR(QPCR)检测人肺上皮细胞BEAS-2B和NSCLC细胞株H1299、H1975、H1650、A549的miR-520e水平;体外常规培养A549细胞并采用脂质体分别转染模拟物(过表达组)和阴性对照序列(NC组),以仅经脂质体处理的细胞为对照组。采用QPCR、活细胞计数CCK-8、划痕实验和Transwell实验检测miR-520e和含锌指和BTB结构域7A(ZBTB7A)水平、增殖活力、划痕愈合率和穿膜细胞数,Western blotting检测基质金属蛋白酶(MMP)-9、磷酸化JAK1(p-JAK1)和磷酸化STAT3(p-STAT3)水平;双荧光素酶报告基因系统联合荧光素酶报告质粒psiCHECK-2验证miR-520e与ZBTB7A的靶向关系。结果与正常细胞相比,NSCLC细胞的miR-520e水平降低,其中A549细胞最低,差异有统计学意义(P<0.05)。过表达组的miR-520e水平为19.562±1.448,高于对照组的1.002±0.057和NC组的1.053±0.082,ZBTB7A水平为0.173±0.026,低于对照组的1.109±0.091和NC组的1.076±0.136,差异均有统计学意义(P<0.05)。与对照组和NC组相比,过表达组转染36、48 h后的增殖活力及转染48 h后的MMP-9、p-JAK1和p-STAT3水平均降低(P<0.05)。过表达组的划痕愈合率和穿膜细胞数分别为(23.618±3.684)%和(51.644±7.069)个,低于对照组的(57.089±4.569)%和(152.269±12.833)个及NC组的(59.267±5.671)%和(149.075±11.239)个(P<0.05)。MiR-520e模拟物与携带野生型ZBTB7A 3’端非翻译区的psiCHECK-2载体共转染细胞的相对荧光强度降低(P<0.05)。结论 miR-520e在NSCLC细胞中表达下调且可能通过靶向ZBTB7A降低JAK1/STAT3信号通路活性来抑制NSCLC细胞的增殖、侵袭和迁移。 展开更多
关键词 非小细胞肺癌 微小RNA-520e 侵袭迁移 含锌指和BTB结构域7A
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氧化苦参碱靶向miR-520e调控AEG-1介导的结肠癌细胞的转移、侵袭活性 被引量：2
2
作者 易默 吴友伟 +4 位作者 张健 何瑜 刘倩 史丽萍 吕飒美 《吉林中医药》 2022年第3期328-333,共6页
目的探讨氧化苦参碱(OMT)通过微小RNA(miR)-520e调控星形胶质细胞瘤上调基因1(AEG-1)介导的结肠癌细胞的增殖、侵袭和迁移的影响。方法不同浓度OMT处理结肠癌细胞,MTT法检测细胞增殖抑制率;对数生长期的结肠癌细胞随机分为Control组、OM... 目的探讨氧化苦参碱(OMT)通过微小RNA(miR)-520e调控星形胶质细胞瘤上调基因1(AEG-1)介导的结肠癌细胞的增殖、侵袭和迁移的影响。方法不同浓度OMT处理结肠癌细胞,MTT法检测细胞增殖抑制率;对数生长期的结肠癌细胞随机分为Control组、OMT组(含70μmol/L OMT的培养基培养24 h)、NC组(转染阴性对照片段24 h)、miR-520e inhibitor组(转染miR-520e抑制物24 h)和OMT+miR-520e inhibitor组(转染miR-520e抑制物24 h后,70μmol/L OMT处理24 h),MTT法检测细胞存活率,PCR检测miR-520e表达水平,划痕实验检测细胞迁移能力,Transwell实验检测细胞侵袭能力,双荧光素酶报告实验检测miR-520e与AEG-1靶向关系,蛋白印迹法检测AEG-1、白介素6(IL-6)和磷酸化信号转导子与激活子3(STAT3)蛋白相对表达量。结果随着OMT浓度的增加,结肠癌细胞增殖抑制率升高(P<0.05);与Control组比较,OMT组细胞存活率、侵袭细胞数以及AEG-1、IL-6和p-STAT3蛋白相对表达量降低,miR-520e表达水平以及划痕愈合率升高(P<0.05);与OMT组比较,OMT+miR-520e inhibitor组细胞存活率、侵袭细胞数以及AEG-1、IL-6和p-STAT3蛋白相对表达量升高,miR-520e表达水平以及划痕愈合率降低(P<0.05);与NC组比较,miR-520e inhibitor组侵袭细胞数以及AEG-1、IL-6和p-STAT3蛋白相对表达量升高,miR-520e表达水平以及划痕愈合率降低(P<0.05);与miR-520e inhibitor组比较,OMT+miR-520e inhibitor组细胞存活率、侵袭细胞数以及AEG-1、IL-6和p-STAT3蛋白相对表达量降低,miR-520e表达水平以及划痕愈合率升高(P<0.05)。结论OMT通过上调miR-520e抑制AEG-1表达,降低结肠癌细胞增殖、侵袭和迁移能力。 展开更多
关键词 结肠癌 氧化苦参碱 miR-520e AeG-1
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微小RNA-520e通过下调自噬调控肝癌细胞失巢凋亡抵抗 被引量：2
3
作者 汪佳兵 王石健 +3 位作者 魏静 陈丽君 毛娟娟 金茜 《江苏医药》 CAS 2022年第11期1081-1084,1089,F0002,共6页
目的探讨微小RNA-520e(miR-520e)是否通过下调自噬调控肝癌细胞失巢凋亡抵抗。方法选择具有高迁移潜能的人肝癌细胞株HCCLM3,使用Lipofectamine 2000将miR-520e类似物(miR-520e-mimic)和阴性对照序列(mimic NC)转染HCCLM3细胞分为miR-52... 目的探讨微小RNA-520e(miR-520e)是否通过下调自噬调控肝癌细胞失巢凋亡抵抗。方法选择具有高迁移潜能的人肝癌细胞株HCCLM3,使用Lipofectamine 2000将miR-520e类似物(miR-520e-mimic)和阴性对照序列(mimic NC)转染HCCLM3细胞分为miR-520e mimic组和mimic NC组。在失巢状态下,采用MTT法检测细胞生存率,采用细胞划痕实验和Transwell实验分别检测细胞迁移和侵袭情况,采用免疫荧光检测细胞自噬水平,采用Western blot检测细胞人微管相关蛋白轻链3-Ⅰ(LC3-Ⅰ)和LC3-Ⅱ蛋白表达。结果在失巢状态下,与mimic NC组比较,miR-520e-mimic组细胞生存率降低,细胞迁移下降,细胞侵袭数量减少,自噬现象被抑制,LC3-Ⅱ/Ⅰ比值降低,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论miR-520e通过下调自噬介导失巢凋亡,抑制HCCLM3细胞生长、迁移和侵袭。 展开更多
关键词 微小核糖核酸520e 自噬 失巢凋亡 肝癌
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微小RNA-520e通过调控锌指蛋白367抑制肺癌A549细胞的迁移和侵袭 被引量：2
4
作者 徐本玲 秦鹏 +5 位作者 陈广玉 袁鹏 王振雷 润增慈 赵鹏 袁龙 《中华实验外科杂志》 CSCD 北大核心 2017年第7期1163-1165,共3页
目的探讨微小RNA-520e（miR-520e）对肺癌细胞株A549细胞迁移和侵袭的影响及其分子机制。方法采用反转录-聚合酶链反应（RT-PCR）检测肺癌细胞A549和正常肺上皮细胞BEAS-2B中miR-520e的表达差异，转染miR-520e模拟物（miR-520e mimics... 目的探讨微小RNA-520e（miR-520e）对肺癌细胞株A549细胞迁移和侵袭的影响及其分子机制。方法采用反转录-聚合酶链反应（RT-PCR）检测肺癌细胞A549和正常肺上皮细胞BEAS-2B中miR-520e的表达差异，转染miR-520e模拟物（miR-520e mimics）获得miR-520e过表达细胞株，迁移实验及Transwell实验检测miR-520e对A549细胞迁移和侵袭的影响。生物信息学预测miR-520e靶向锌指蛋白367（ZNF367）基因，通过双荧光素酶报告体系进行验证。Western blot检测miR-520e过表达对ZNF367蛋白表达的影响，采用小干扰RNA（siRNA）研究ZNF367对A549细胞迁移和侵袭的影响。结果RT-PCR结果显示，相对于BEAS-2B细胞（1.000±0.135），A549细胞中miR-520e表达量为0.342±0.214（P=0.000）。转染miR-520e mimic后，相对空白对照（NC）组（1.000±0.273），mimic组miR-520e过表达（2.617±0.124，P=0.000）。划痕培养24 h后，与NC组[（100.000±12.347）%]相比，mimic组细胞迁移率为[（43.727±16.746）%]，scramble组细胞迁移率为[（91.722±7.631）%]，过表达miR-520e抑制肺癌细胞迁移（P=0.000）。侵袭实验结果显示，mimic组发生侵袭的细胞数[（36.458±21.301）%]与miR-520e scramble组[（93.783±9.125）%]和NC组[（100.000±15.114）%]比较减少（P=0.000）。荧光素酶报告基因结果显示，转染miR-520e mimics抑制荧光素酶的活性（0.374±0.241，P=0.000）。RT-PCR和Western blot发现miR-520e mimics下调ZNF367的表达（0.426±0.153, P=0.000；0.368 ±0.127，P=0.000）。进一步实验发现，miR-520e靶向ZNF367基因调控肺癌细胞的迁移和侵袭。结论miR-520e通过调控ZNF367抑制肺癌A549细胞的迁移和侵袭。 展开更多
关键词 微小RNA-520e 锌指蛋白367 肺癌 迁移 侵袭
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MicroRNA-520e通过靶向抑制AEG-1发挥抗结直肠癌特性
5
作者 吕飒美 张健 +2 位作者 吴友伟 刘倩 易默 《现代生物医学进展》 CAS 2022年第17期3229-3237,共9页
目的:探究MicroRNA-520e(miR-520e)在结直肠癌中的表达模式及其对细胞功能的影响。方法:采用qRT-PCR方法检测47例结直肠癌患者的癌组织和癌旁组织中miR-520e和星形胶质细胞上调基因-1(AEG-1)的mRNA表达水平。将SW480细胞分为对照组、miR... 目的:探究MicroRNA-520e(miR-520e)在结直肠癌中的表达模式及其对细胞功能的影响。方法:采用qRT-PCR方法检测47例结直肠癌患者的癌组织和癌旁组织中miR-520e和星形胶质细胞上调基因-1(AEG-1)的mRNA表达水平。将SW480细胞分为对照组、miR-520e-mimic组、NC-mimic组、miR-520e-inhibitor组、NC-inhibitor组、miR-520e-mimic+AEG-1-pcDNA3.1组和miR-520e-mimic+NC-pcDNA3.1组。通过MTT法检测SW480细胞的增殖,通过Annexin V-FITC/PI双染色试剂盒检测细胞凋亡,通过Transwell检测细胞迁移和侵袭,通过双荧光素酶报告基因实验验证miR-520e和AEG-1的靶向关系,通过qRT-PCR或Western blotting检测AEG-1、基质金属蛋白酶2(MMP2)、MMP9、NF-κB p65(p65)和磷酸化的NF-κB p65(p-p65)的表达。结果:与癌旁组织相比,结直肠癌组织中miR-520e的表达水平降低(t=9.353,P<0.001)。与对照组相比,miR-520e-mimic组的OD值降低,细胞凋亡率升高,细胞迁移和侵袭数量降低,MMP2、MMP9和p-p65蛋白表达水平降低(P<0.001)。与对照组相比,miR-520e-inhibitor组的OD值升高,细胞凋亡率降低,细胞迁移和侵袭数量升高,MMP2、MMP9和p-p65蛋白表达水平升高。与NC-mimic组相比,miR-520e-inhibitor组的相对荧光素酶活性降低(P<0.001)。与对照组相比,miR-520e-mimic组的AEG-1的mRNA和蛋白表达水平均降低,而miR-520e-inhibitor组均升高(P<0.001)。与miR-520e-mimic+NC-pcDNA3.1组相比,miR-520e-mimic+AEG-1-pcDNA3.1组的AEG-1的mRNA和蛋白表达水平升高,OD值升高,细胞凋亡率降低,迁移和侵袭细胞数增加,MMP2和MMP9的蛋白表达水平及p65的磷酸化水平均增加(P<0.001)。结论:miR-520e在结直肠癌中表达降低,可通过靶向抑制AEG-1来发挥抗结直肠癌特性,其抗癌机制可能通过NF-κB信号通路介导。 展开更多
关键词 结直肠癌 microrna-520e 星形胶质细胞上调基因-1 侵袭 NF-ΚB信号通路
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MiRNA-520e对HeLa细胞FOXL2基因的靶向调控作用及细胞迁移增殖的影响 被引量：1
6
作者 刘悦 王晓雨 +3 位作者 曲春安 胡飞 胡亚暖 唐胜建 《山东医药》 CAS 北大核心 2017年第29期8-11,共4页
目的探讨miRNA-520e对人宫颈癌HeLa细胞FOXL2基因的调控作用及对细胞迁移、增殖的影响。方法应用生物信息学分析软件(Target Scan Human 7.1)预测miRNA-520e可能结合于FOXL2 mRNA 3'UTR端,以HeLa细胞作为试验研究对象,将细胞随机分... 目的探讨miRNA-520e对人宫颈癌HeLa细胞FOXL2基因的调控作用及对细胞迁移、增殖的影响。方法应用生物信息学分析软件(Target Scan Human 7.1)预测miRNA-520e可能结合于FOXL2 mRNA 3'UTR端,以HeLa细胞作为试验研究对象,将细胞随机分为阴性对照组(加入无关序列NC Fam mimics)、正常对照组(不加任何干预)、miRNA-520e组(加入miRNA-520e mimics)。运用脂质体法通过Lipofectamine 3000 Reagent将各miRNA mimics转染各组HeLa细胞,48 h后通过实时荧光定量PCR及Western blotting法检测FOXL2 mRNA及蛋白表达;转染24 h后采用细胞划痕试验检测细胞迁移能力,使用ACEA xCELLigence RTCA DP细胞分析仪检测细胞增殖能力。结果 miRNA-520e组HeLa细胞FOXL2 mRNA和蛋白的表达量较正常对照组及阴性对照组降低,且miRNA-520e组细胞的迁移和增殖能力较正常对照组及阴性对照组增强(P均<0.05)。结论 miRNA-520e可抑制HeLa细胞FOXL2 mRNA和蛋白的表达,促进细胞迁移和增殖。 展开更多
关键词 宫颈癌 HeLA细胞 微小RNA-520e FOXL2基因 细胞迁移 细胞增殖
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