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NORAD诱导的自噬促进食管胃结合部腺癌细胞对奥沙利铂耐药的研究
1
作者 李守淼 刘志强 +3 位作者 曹恒 聂志勇 李慧 李保中 《中华消化杂志》 CAS CSCD 北大核心 2024年第4期266-273,共8页
目的探讨DNA损伤激活的非编码RNA(NORAD)诱导细胞自噬对食管胃结合部腺癌(AEG)奥沙利铂耐药的影响及分子机制。方法收集2023年1月至6月安阳市肿瘤医院诊治的进展期AEG患者AEG及其癌旁正常组织手术标本4对,应用长链非编码RNA微阵列芯片分... 目的探讨DNA损伤激活的非编码RNA(NORAD)诱导细胞自噬对食管胃结合部腺癌(AEG)奥沙利铂耐药的影响及分子机制。方法收集2023年1月至6月安阳市肿瘤医院诊治的进展期AEG患者AEG及其癌旁正常组织手术标本4对,应用长链非编码RNA微阵列芯片分析AEG及其癌旁组织中NORAD的表达情况。使用新鲜AEG组织标本制备肿瘤组织来源的AEG细胞系(PDC),构建PDC和AEG细胞系OE19的奥沙利铂耐药细胞系(PDC-R、OE19-R),并通过转染shNORAD制备敲减NORAD的PDC-R和OE19细胞系(shNORAD PDC-R、shNORAD OE19-R)。应用生物信息学工具Starbase v3.0和DIANA-lncBase v3.0预测NORAD潜在靶点及其与微RNA-433-3p(miR-433-3p)的相互作用。PDC、PDC-R,OE19、OE19-R细胞分别共转染miR-144-3p和野生型NORAD(NORAD-WT)或突变型NORAD(NORAD-Mut)质粒,应用双萤光素酶报告实验验证NORAD与miR-433-3p的相关性。通过定量反转录聚合酶链反应(qRT-PCR)检测胃正常黏膜细胞系GES-1及AEG细胞系PDC、PDC-R、shNORAD PDC-R、OE19、OE19-R、shNORAD OE19-R中NORAD和miR-433-3p表达水平,蛋白质印迹法检测上述细胞p62和微管相关蛋白1轻链3 B-Ⅱ(LC3B-Ⅱ)的表达。采用细胞计数试剂盒-8(CCK-8)测定奥沙利铂对PDC、PDC-R、shNORAD PDC-R、OE19、OE19-R和shNORAD OE19-R细胞的细胞半数抑制浓度(IC_(50))。统计学方法采用独立样本t检验。结果微阵列芯片分析发现与癌旁正常组织相比,AEG中NORAD表达显著上调(差异表达倍数≥2.0,P<0.05)。生物信息学研究发现miR-433-3p是NORAD的潜在靶点。双萤光素酶报告实验结果显示,在PDC和PDC-R细胞中,NORAD-WT组的相对萤光素酶活性低于NORAD-Mut组(0.441±0.104比0.928±0.204、0.449±0.112比0.947±0.201),差异均有统计学意义(t=-14.74、-14.94,均P<0.001);OE19和OE19-R细胞中双萤光素酶报告实验结果与PDC细胞系相同。qRT-PCR检测结果显示,NORAD在GES-1细胞中的相对表达量(1.016±0.213)低于PDC细胞(2.194±0.322)和PDC-R细 展开更多
关键词 食管胃结合部腺癌 长链非编码RNA NORAD 微RNA-433-3p 奥沙利铂 耐药性 自噬活性
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miR-433-3p靶向HP1BP3抑制胃癌细胞的增殖、迁移和侵袭能力
2
作者 陈虹 崔婧 +1 位作者 罗晨 李峰 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2023年第11期1964-1972,共9页
目的:探究微小RNA-433-3p(miR-433-3p)对胃癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响,以及miR-433-3p靶向异染色质蛋白1结合蛋白3(HP1BP3)对胃癌细胞的调控作用。方法:将人胃癌细胞系HGC-27和AGS分为阴性对照(NC)mimic组、miR-433-3p mimic组、NC s... 目的:探究微小RNA-433-3p(miR-433-3p)对胃癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响,以及miR-433-3p靶向异染色质蛋白1结合蛋白3(HP1BP3)对胃癌细胞的调控作用。方法:将人胃癌细胞系HGC-27和AGS分为阴性对照(NC)mimic组、miR-433-3p mimic组、NC siRNA(si-NC)组和HP1BP3 siRNA(si-HP1BP3)组,分别转染NC mimic、miR-433-3p mimic、si-NC和si-HP1BP3。RT-qPCR检测miR-433-3p在HGC-27和AGS细胞中的表达;CCK-8法和细胞集落形成实验检测细胞增殖;划痕愈合实验检测细胞迁移;Traswell实验检测细胞侵袭;Western blot检测HP1BP3蛋白表达。结果:与NC mimic组相比,miR-433-3p mimic组HGC-27和AGS细胞中miR-433-3p表达升高。过表达miR-433-3p抑制HGC-27和AGS细胞的增殖、迁移和侵袭,抑制HP1BP3蛋白表达;敲减HP1BP3抑制HGC-27和AGS细胞的增殖和迁移。结论:miR-433-3p靶向调控HP1BP3进而抑制胃癌细胞的增殖、迁移和侵袭。 展开更多
关键词 胃癌 微小RNA-433-3p 异染色质蛋白1结合蛋白3
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微小RNA-433-3p靶向滑蛋白调控胰腺癌PANC-1细胞恶性生物学行为的研究
3
作者 丛鹏 苏祥杰 李永 《实用临床医药杂志》 2023年第14期19-25,共7页
目的探讨微小RNA-433-3p(miR-433-3p)对胰腺癌细胞增殖、侵袭、迁移的影响及其与滑蛋白(SMO)的靶向关系。方法培养胰腺癌PANC-1细胞、人正常胰腺上皮细胞HPNE。将miR-NC、miR-433-3p mimics、si-NC、si-miR-433-3p、敲低空载Scramble、s... 目的探讨微小RNA-433-3p(miR-433-3p)对胰腺癌细胞增殖、侵袭、迁移的影响及其与滑蛋白(SMO)的靶向关系。方法培养胰腺癌PANC-1细胞、人正常胰腺上皮细胞HPNE。将miR-NC、miR-433-3p mimics、si-NC、si-miR-433-3p、敲低空载Scramble、si-SMO、Vector、SMO过表达(OE-SMO)质粒分别转染至PANC-1细胞,设为miR-NC组、miR-433-3p组、si-NC组、si-miR-433-3p组、Scramble组、si-SMO组、Vector组及SMO组。将Vector、OE-SMO质粒分别转染至miR-433-3p组细胞,设为si-miR-433-3p+Scramble组、si-miR-433-3p+si-SMO组。采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)检测细胞增殖能力,Transwell实验检测细胞侵袭、迁移能力,荧光定量聚合酶链反应(RT-PCR)检测细胞SMO基因mRNA及miR-433-3p表达水平,Western blot检测细胞SMO蛋白表达水平,TargetScan在线网站预测miR-433-3p与SMO结合位点,双荧光素酶报告基因实验验证miR-433-3p与SMO的靶向关系。结果PANC-1细胞SMO基因mRNA及其蛋白表达水平高于HPNE细胞,差异有统计学意义(P<0.05);PANC-1细胞miR-433-3p表达水平低于HPNE细胞,差异有统计学意义(P<0.05)。下调miR-433-3p、上调SMO可促进细胞的增殖、侵袭及迁移,上调miR-433-3p、沉默SMO可抑制细胞的增殖、侵袭及迁移。下调SMO逆转了miR-433-3p低表达对细胞增殖、侵袭及迁移的促进作用。miR-433-3p可负性调控SMO表达。结论miR-433-3p负性调控SMO抑制胰腺癌细胞的增殖、侵袭及迁移。 展开更多
关键词 微小RNA-433-3p SMO基因 胰腺癌 侵袭 增殖 迁移
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微小RNA-433-3p靶向同源异形盒基因A1抑制胃癌MGC-803细胞增殖、侵袭的研究
4
作者 赵轶峰 李明霞 +3 位作者 张超 胡晓敏 王雄 赵铁军 《消化肿瘤杂志（电子版）》 2023年第1期58-61,66,共5页
目的探讨微小RNA-433-3p(miR-433-3p)靶向同源异形盒基因A1(HOXA1)对胃癌MGC-803细胞增殖、侵袭的影响。方法体外培养人胃癌MGC-803细胞,分为对照组(正常培养,不进行任何处理)、si-NC组(转染miR-433-3p siRNA阴性对照)、si-miR-433-3p组... 目的探讨微小RNA-433-3p(miR-433-3p)靶向同源异形盒基因A1(HOXA1)对胃癌MGC-803细胞增殖、侵袭的影响。方法体外培养人胃癌MGC-803细胞,分为对照组(正常培养,不进行任何处理)、si-NC组(转染miR-433-3p siRNA阴性对照)、si-miR-433-3p组(转染miR-433-3p siRNA)、mimic-NC组(转染miR-433-3p mimic阴性对照)和miR-433-3p mimic组(转染miR-433-3p mimic)。荧光定量聚合酶链反应(PCR)法检测MGC-803细胞中miR-433-3p及HOXA1 mRNA表达;细胞计数法、Transwell法分别检测MGC-803细胞增殖、侵袭;双荧光素酶报告基因试验检测miR-433-3p与HOXA1的靶向关系。结果与对照组和si-NC组相比,si-miR-433-3p组MGC-803细胞中miR-433-3p表达降低(P<0.05),HOXA1 mRNA表达、细胞增殖率、侵袭细胞数升高(P<0.05)。与对照组和mimic-NC组相比,miR-433-3p mimic组MGC-803细胞中miR-433-3p表达升高(P<0.05),HOXA1 mRNA表达、细胞增殖率、侵袭细胞数降低(P<0.05)。TargetScan网站预测及双荧光素酶报告基因试验结果显示,miR-433-3p与HOXA1在MGC-803细胞中存在靶向关系。结论miR-433-3p能靶向调控HOXA1抑制胃癌MGC-803细胞的增殖、侵袭过程。 展开更多
关键词 微小RNA-433-3p 同源异形盒基因A1 胃癌MGC-803细胞 增殖 侵袭
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微小RNA-433-3p靶向调控RAP1A对结直肠癌细胞生物学行为的影响 被引量：3
5
作者 白雨微 黄小齐 +1 位作者 刘航 刘攀 《临床肿瘤学杂志》 CAS 2022年第12期1092-1098,共7页
目的 探讨微小RNA-433-3p(miR-433-3p)靶向Ras相关蛋白1A(RAP1A)调控结直肠癌细胞增殖、凋亡、迁移与侵袭的作用及机制。方法 采用实时荧光定量PCR(qPCR)检测结直肠癌细胞的miR-433-3p水平。向SW480细胞转染miR-433-3p模拟物mimics(miR-... 目的 探讨微小RNA-433-3p(miR-433-3p)靶向Ras相关蛋白1A(RAP1A)调控结直肠癌细胞增殖、凋亡、迁移与侵袭的作用及机制。方法 采用实时荧光定量PCR(qPCR)检测结直肠癌细胞的miR-433-3p水平。向SW480细胞转染miR-433-3p模拟物mimics(miR-433-3p mimics组)或无义序列(NC组),另将miR-433-3p mimics和RAP1A过表达质粒共转染SW480细胞(miR-433-3p mimics+RAP1A组),采用CCK-8法、流式细胞术、划痕实验和Transwell小室实验评估SW480细胞的增殖、凋亡、迁移和侵袭情况。双荧光素酶报告基因实验分析miR-433-3p和RAP1A间的靶向关系。qPCR和Western blotting法检测RAP1A、Bax、Bcl-2和基质金属蛋白酶(MMP)-2的mRNA和蛋白水平。结果 SW480、HCT116和LoVo细胞的中miR-433-3p水平低于Caco-2细胞(P<0.05)。RAP1A是miR-433-3p的作用靶点且miR-433-3p能够抑制SW480细胞中RAP1A的表达。与NC组相比,miR-433-3p mimics组SW480细胞增殖、迁移和侵袭能力减弱且凋亡增加并伴有Bcl-2和MMP-2水平降低和Bax水平升高(P<0.05)。相较于miR-433-3p mimics组,miR-433-3p mimics+RAP1A组SW480细胞增殖、迁移和侵袭能力增强且细胞凋亡降低并伴有Bcl-2和MMP-2水平升高和Bax水平降低。结论 结直肠癌中miR-433-3p表达下调且发挥抑癌基因的作用,miR-433-3p/RAP1A轴有望成为结直肠癌的潜在治疗靶点。 展开更多
关键词 结直肠癌 miR-433-3p Ras相关蛋白1A 生物学行为
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LncRNA DSCAM-AS1调控miR-433-3p对胃癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响
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作者 赵轶峰 李明霞 +3 位作者 张超 胡小敏 王雄 赵铁军 《肿瘤预防与治疗》 2023年第5期361-372,共12页
目的:探讨长链非编码RNA唐氏综合征细胞黏附分子反义1(long non-coding RNA Down syndrome cell adhesion molecule antisense 1,lncRNA DSCAM-AS1)靶向微小RNA-433-3p(micro RNA-433-3p,miR-433-3p)对胃癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响... 目的:探讨长链非编码RNA唐氏综合征细胞黏附分子反义1(long non-coding RNA Down syndrome cell adhesion molecule antisense 1,lncRNA DSCAM-AS1)靶向微小RNA-433-3p(micro RNA-433-3p,miR-433-3p)对胃癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响。方法:收集2019年至2021年期间河北北方学院附属第一医院胃肠肿瘤外科收治的56例胃癌组织样本及邻近正常组织样本,体外培养人胃癌细胞系BGC-823、MGC-803、AGS、SGC-7901和人正常胃上皮细胞系GES-1,实时荧光定量PCR法检测胃癌组织和邻近正常组织以及胃癌细胞中lncRNA DSCAMAS1、miR-433-3p表达水平,并通过Pearson相关性分析胃癌组织中lncRNA DSCAM-AS1和miR-433-3p之间的相关性。将胃癌BGC-823细胞分为对照组(仅添加新鲜培养基)、lncRNA DSCAM-AS1小干扰RNA(small interfering RNA,siRNA)阴性对照组(转染lncRNA DSCAM-AS1 siRNA阴性对照)、lncRNA DSCAM-AS1 siRNA组(转染lncRNA DSCAM-AS1 siRNA)、miR-433-3p阴性对照组(转染miR-433-3p阴性对照)、miR-433-3p组(转染miR-433-3p)、lncRNA DSCAM-AS1 siRNA+miR-433-3p阴性对照组(转染lncRNA DSCAM-AS1 siRNA和miR-433-3p阴性对照)、lncRNA DSCAM-AS1 siRNA+miR-433-3p siRNA组(转染lncRNA DSCAM-AS1 siRNA和miR-433-3p siRNA)。实时荧光定量PCR法检测各组BGC-823细胞中lncRNA DSCAM-AS1、miR-433-3p的表达情况;CCK-8法检测各组BGC-823细胞活性;Transwell法检测各组BGC-823细胞侵袭和迁移能力;双荧光素酶报告实验和RNA结合蛋白免疫沉淀(RNA-binding protein immunoprecipitation,RIP)检测lncRNA DSCAM-AS1与miR-433-3p的靶向关系;蛋白免疫印迹法检测各组BGC-823细胞增殖细胞核抗原(proliferating cell nuclear antigen,PCNA)、基质金属蛋白酶(matrix metalloproteinase,MMP)-2、MMP-9的表达。结果:胃癌组织中lncRNA DSCAM-AS1表达水平升高,miR-433-3p水平降低(P<0.01);Pearson相关分析显示,癌组织中lncRNA DSCAM-AS1的表达水平与miR-433-3p水平呈负相关(r=-0.766,P<0.01)。与对照组和miR-433-3p阴性对照组比 展开更多
关键词 长链非编码RNA唐氏综合征细胞黏附分子反义1 微小RNA-433-3p 胃癌 生长 发展
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miR-433-3p通过靶向SMC4抑制IL-17对肺癌细胞增殖、迁移、侵袭的促进作用
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作者 井洪家 刘建伟 +2 位作者 马建欣 李晓峰 齐迎松 《现代免疫学》 CAS 北大核心 2022年第6期489-498,共10页
为探讨IL-17对肺癌细胞增殖、迁移和侵袭的作用机制,用IL-17(20 ng/mL)处理肺癌细胞A549和HCC827 48 h,采用Western blotting、qRT-PCR、Transwell试验、MTT试验和双荧光素酶报告基因试验分别检测A549和HCC827细胞中细胞周期素D1(Cyclin... 为探讨IL-17对肺癌细胞增殖、迁移和侵袭的作用机制,用IL-17(20 ng/mL)处理肺癌细胞A549和HCC827 48 h,采用Western blotting、qRT-PCR、Transwell试验、MTT试验和双荧光素酶报告基因试验分别检测A549和HCC827细胞中细胞周期素D1(Cyclin D1)、基质金属蛋白酶2(matrix metalloproteinase 2,MMP-2)、基质金属蛋白酶9(matrix metallopro-teinase 9,MMP-9)、细胞周期蛋白依赖性激酶抑制蛋白(cyclin-dependent kinase inhibitor protein, p21)、染色体结构维持蛋白4(structural maintenance of chromosome 4,SMC4)的蛋白表达,miR-433-3p、SMC4的mRNA表达,细胞的增殖、迁移和侵袭及细胞的荧光素酶活性。结果显示,与对照组比较,IL-17组A549和HCC827细胞的增殖、迁移和侵袭能力均显著升高(P<0.05),miR-433-3p表达水平显著下调(P<0.05),SMC4表达水平显著上调(P<0.05),同时Cyclin D1、MMP-2、MMP-9水平显著上调(P<0.05);miR-433-3p与SMC4存在结合位点;分别与anti-miR-NC组、pcDNA组比较,anti-miR-433-3p组、pcDNA-SMC4组A549和HCC827细胞的增殖、迁移和侵袭能力显著升高(P<0.05),同时Cyclin D1、MMP-2、MMP-9水平显著上调(P<0.05);miR-433-3p可抑制IL-17诱导的细胞增殖、迁移和侵袭的能力,并下调Cyclin D1、MMP-2、MMP-9水平。该研究提示,IL-17助力于肺癌细胞的增殖、迁移和侵袭,其机制可能与抑制miR-433-3p/SMC4通路的活性相关。 展开更多
关键词 白细胞介素17 微小RNA-433-3p 染色体结构维持蛋白4 肺癌 增殖 迁移 侵袭
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