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微小RNA-422a通过影响糖代谢途径抑制人乳腺癌细胞的增殖和迁移 被引量：6
1
作者 王巧云 庄志祥 《中华实验外科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2020年第7期1197-1200,共4页
目的观察微小RNA(miRNA,miR)-422a在乳腺癌中的差异表达对人乳腺癌细胞MDA-MB-231增殖和迁移的影响,并探讨其作用机制。方法 2019年7月至2020年3月,细胞来源于中国科学院上海细胞库,实验分为过表达miR-422a (miR-422a mimic)和对照(Cont... 目的观察微小RNA(miRNA,miR)-422a在乳腺癌中的差异表达对人乳腺癌细胞MDA-MB-231增殖和迁移的影响,并探讨其作用机制。方法 2019年7月至2020年3月,细胞来源于中国科学院上海细胞库,实验分为过表达miR-422a (miR-422a mimic)和对照(Control mimic)两组。通过细胞活性检测试剂盒(CCK-8)和细胞划痕实验检测miR-422a对细胞增殖和迁移的影响。酶耦联法检测miR-422a模拟物(mimic)转染MDA-MB-231细胞24 h和48 h后细胞内的葡萄糖吸收率和乳酸生成率。使用实时定量聚合酶链反应(Real-time PCR)检测转染后细胞中的人乳酸脱氢酶A(LDHA)、丙酮酸激酶(PKM)、己糖激酶2(HK2)和单羧酸转运体1(MCT1)基因表达,蛋白质印迹法(Western blot)检测转染后细胞中的LDHA蛋白表达,组间采用t检验。结果 miR-422a在乳腺癌细胞和组织中呈低表达;对比Control mimic,miR-422a过表达后乳腺癌细胞的增殖明显受到抑制,24 h为0.299±0.040(t=8.485,P<0.01),48 h为0.345±0.046(t=12.390,P<0.01),72 h为0.462±0.055(t=15.510,P<0.01),9 h为0.933±0.050(t=26.680,P<0.01);细胞的迁移减慢24 h划痕间距离值为(523±31) μm(t=3.448,P<0.05),48 h为(523±31) μm (t=6.084,P<0.01)。对比Control mimic,miR-422a过表达后细胞内的葡萄糖吸收率下降(24 h:t=7.228,P<0.05;48 h:t=12.260,P<0.01);乳酸生存率下降24 h(t=5.398,P<0.05),48 h(t=21.020,P<0.01),且两组均48 h下降更明显。miR-422a过表达后乳腺癌细胞的代谢相关基因LDHA(t=3.772,P<0.05),HK2(t=5.011,P<0.01),PKM(t=11.260,P<0.01)明显下调,LDHA蛋白表达明显下调(t=6.928,P<0.01)。结论 miR-422a可能影响代谢基因抑制人乳腺癌细胞MDA-MB-231的有氧糖酵解,抑制增殖和迁移。 展开更多
关键词 微小RNA-422a 乳腺癌 糖代谢 增殖 迁移
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miR-422a通过调控SOX6抑制H2O2对PC12细胞的损伤 被引量：5
2
作者 张广华 铁婷婷 +3 位作者 巨虎 许常林 肖宗宇 苑乐 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2019年第12期2235-2240,共6页
目的:研究微小RNA-422a(miR-422a)靶向调控人性别决定区Y框6(SOX6)对过氧化氢(H 2O 2)刺激下大鼠肾上腺嗜铬细胞瘤细胞株PC12(具有神经细胞特性)损伤的作用。方法:采用real-time PCR检测H 2O 2处理后PC12细胞中miR-422a表达的变化,在PC1... 目的:研究微小RNA-422a(miR-422a)靶向调控人性别决定区Y框6(SOX6)对过氧化氢(H 2O 2)刺激下大鼠肾上腺嗜铬细胞瘤细胞株PC12(具有神经细胞特性)损伤的作用。方法:采用real-time PCR检测H 2O 2处理后PC12细胞中miR-422a表达的变化,在PC12细胞中转染miR-422a mimics,MTT法测定细胞活力,试剂盒检测乳酸脱氢酶(LDH)漏出率,流式细胞术测定细胞凋亡水平。靶基因预测软件预测SOX6可能是miR-422a的靶基因,萤光素酶报告基因实验鉴定靶向关系。在PC12细胞中共转染miR-422a mimics和SOX6过表达载体,检测过表达SOX6对miR-422a mimics调控H 2O 2条件下PC12细胞活力、LDH漏出率和凋亡的影响。结果:H 2O 2处理后PC12细胞中miR-422a表达水平降低(P<0.05)。H 2O 2处理后的PC12细胞的活力降低,LDH漏出率和细胞凋亡率升高(P<0.05)。miR-422a mimics能够提高H 2O 2条件下PC12细胞活力,降低LDH漏出率和凋亡率(P<0.05)。miR-422a靶向负调控SOX6表达。SOX6过表达载体可以逆转miR-422a对PC12细胞活力提高和LDH漏出率、细胞凋亡率降低的作用(P<0.05)。结论:miR-422a通过靶向抑制SOX6可降低H 2O 2对PC12细胞的损伤作用。 展开更多
关键词 微小RNA-422a PC12细胞 SOX6基因 细胞凋亡 细胞活力
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微小RNA-422a靶向叉头框蛋白Q1抑制人结直肠癌生长和侵袭能力的研究 被引量：2
3
作者 徐世荣 胡炜 +8 位作者 王慧 倪慧鹏 姜毅楠 王伟 钟京 万志红 束琳 潘雪凯 李炫飞 《中华实验外科杂志》 CAS 北大核心 2022年第10期1907-1910,共4页
目的研究人结直肠癌中微小RNA(miR)-422a的异常表达与肿瘤生物学特征之间的关系,探讨miR-422a对人结直肠癌细胞系HCT15生长和侵袭能力的调控机制。方法收集2017年8月至2018年1月在武汉大学中南医院实施结直肠癌手术切除标本65例,收取结... 目的研究人结直肠癌中微小RNA(miR)-422a的异常表达与肿瘤生物学特征之间的关系,探讨miR-422a对人结直肠癌细胞系HCT15生长和侵袭能力的调控机制。方法收集2017年8月至2018年1月在武汉大学中南医院实施结直肠癌手术切除标本65例,收取结直肠癌组织及癌旁组织。采用实时定量反转录聚合酶链反应法(RT-qPCR)检测组织中miR-422a及叉头框蛋白Q1(FoxQ1)的mRNA表达水平,蛋白质印迹法(Western blot)分析检测组织中FoxQ1的蛋白表达强度。分析miR-422a与结直肠癌肿瘤生物学特征和FoxQ1 mRNA表达水平的相关性。RT-qPCR检测miR-422a在结直肠癌细胞中的表达,并使用miR-422a模拟物转染人结直肠癌HCT15细胞。采用双荧光素酶活性实验验证miR-422a对FoxQ1的靶向作用。细胞计数试剂盒(CCK-8)检测细胞增殖情况,Transwell小室法检测细胞侵袭,Western blot法检测FoxQ1、E-钙黏蛋白(E-cadherin)和波形蛋白(Vimentin)蛋白表达。结果结直肠癌组织miR-422a的表达水平低于癌旁组织,差异有统计学意义(1.015±0.123比3.910±0.078,P<0.01);结直肠癌组织FoxQ1的表达水平高于癌旁组织,差异有统计学意义(2.398±0.195比1.583±0.174,P<0.01);相关分析显示,FoxQ1表达强度与miR-422a表达水平呈负相关(r=-0.664,P<0.01)。miR-422a的表达水平与肿瘤大小(P<0.05)、局部浸润(P<0.05)、淋巴结转移(P<0.01)、远处转移(P<0.01)和TNM分期(P<0.01)有关。miR-422a在HCT15细胞中表达较低,上调HCT15细胞中miR-422a表达水平后,细胞增殖和侵袭能力均受到抑制,差异有统计学意义(P<0.01);FoxQ1及Vimentin蛋白表达水平降低,E-cadherin蛋白表达增高。双荧光素酶报告基因结果提示FoxQ1是miR-422a的靶基因。结论miR-422a的表达与结直肠癌的恶性程度相关。上调miR-422a的表达靶向FoxQ1抑制结直肠癌细胞的上皮-间充质转化,从而抑制其增殖和侵袭能力。 展开更多
关键词 结直肠癌 微小RNA-422a 细胞增殖/侵袭 上皮-间充质转化 叉头框蛋白Q1
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微小RNA-422a在胃癌组织中的表达及参与多柔比星耐药的机制研究
4
作者 屈涛 张弘刚 +1 位作者 张昕 王海燕 《中国药师》 CAS 2019年第10期1790-1794,共5页
目的:研究微小RNA-422a(miR-422a)在胃癌组织中的表达及参与多柔比星耐药的机制研究。方法:检测46例胃癌及癌旁组织中miR-422a的表达水平,分析其与胃癌临床特征和预后的相关性。将miR-422a转染到SGC-7901/多柔比星细胞中,检测不同浓度... 目的:研究微小RNA-422a(miR-422a)在胃癌组织中的表达及参与多柔比星耐药的机制研究。方法:检测46例胃癌及癌旁组织中miR-422a的表达水平,分析其与胃癌临床特征和预后的相关性。将miR-422a转染到SGC-7901/多柔比星细胞中,检测不同浓度多柔比星对SGC-7901细胞增殖的影响,计算耐药指数(RI),同时检测miR-422a和肌细胞增强因子2D(MEF2D)的表达以及细胞凋亡情况。结果:miR-422a在胃癌组织的表达水平显著低于癌旁组织(P<0.05);根据miR-422a的表达水平将患者分为高表达组和低表达组,发现miR-422a的表达水平在分化程度、淋巴结转移和TNM分期有显著差异(P<0.05或P<0.01);与预后良好组患者相比,预后不良组患者miR-422a表达显著降低(P<0.05);SGC-7901的半抑制浓度(IC50)为0.33μg·ml-1,SGC-7901/多柔比星的IC50为12.08μg·ml-1,RI为36.61;miR-422a mimic组的IC50为4.01μg·ml-1,RI为2.74;通过转染miR-422a mimic,miR-422a显著上调,同时抑制MEF2D,SGC-790/多柔比星细胞在多柔比星诱导的情况下细胞凋亡率显著升高(P<0.01)。结论:miR-422a在胃癌组织中低表达,并与胃癌患者预后不良密切相关,上调miR-422a水平可以增加SGC-7901对多柔比星的敏感性,这一发现可能为逆转肿瘤耐药性提供新的治疗靶点。 展开更多
关键词 微小RNA-422a 胃癌 多柔比星耐药
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微小RNA-422a对骨肉瘤细胞增殖的影响
5
作者 孙新志 廖鹰 +2 位作者 寇红伟 郭俊杰 刘宏建 《中华实验外科杂志》 CSCD 北大核心 2017年第7期1185-1187,共3页
目的观察微小RNA（miRNA，miR）-422a表达水平对骨肉瘤细胞增殖抑制的影响。方法选择健康雄性SD大鼠40只，分别制备骨肉瘤MG63与U2OS细胞株荷瘤鼠模型，采用膜联蛋白V（Annexin V）/碘化丙锭（PI）双染色法转染miR-422a模拟物和抑制物调... 目的观察微小RNA（miRNA，miR）-422a表达水平对骨肉瘤细胞增殖抑制的影响。方法选择健康雄性SD大鼠40只，分别制备骨肉瘤MG63与U2OS细胞株荷瘤鼠模型，采用膜联蛋白V（Annexin V）/碘化丙锭（PI）双染色法转染miR-422a模拟物和抑制物调节miR-422a的表达，分析miR-422a高表达和低表达环境下骨肉瘤细胞的增殖、凋亡，并分析miR-422a表达对不同细胞周期骨肉瘤细胞的抑制作用。结果转染miR-422a模拟物后48 h，MG63和U2OS细胞的增殖出现明显抑制，在转染miR-422a抑制物48 h后，MG63和U2OS的细胞增殖被促进，差异均有统计学意义（P=0.068、0.035、0.016、0.004；0.072、0.028、0.019、0.003）；转染miR-422a模拟物后MG63细胞株对照组0、96 h的细胞凋亡率分别为（5.3±0.1）%、（5.2±0.1）%，模拟物组0、96 h的细胞凋亡率分别为（5.3±0.5）%、（5.4±0.4）%，U2OS细胞株对照组0、96 h的细胞凋亡率分别为（5.2±0.2）%、（5.3±0.2）%，模拟物组0、96 h的细胞凋亡率分别为（5.5±0.1）%、（5.2±0.1）%，转染miR-422a模拟物进行饥饿处理48 h后MG63细胞株对照组0、96 h的细胞凋亡率分别为（5.2±0.4）%、（28.6±0.7）%，模拟物组0、96 h的细胞凋亡率分别为（5.5±0.2）%、（48.5±2.4）%，U2OS细胞株对照组0、96 h的细胞凋亡率分别为（6.2±0.3）%、（18.7±3.1）%，模拟物组0、96 h的细胞凋亡率分别为（6.2±0.2）%、（39.8±3.2）%，与阴性对照组比较，转染miR-422a模拟物96 h后，骨肉瘤细胞的凋亡比例未出现显著改变，但在转染miR-422a模拟物进行诱导凋亡处理48 h后，与阴性对照组比较，骨肉瘤细胞凋亡数量明显增加，不同细胞生长周期细胞数量比较，转染miR-422a模拟物后G0/G1期细胞数明显增加，而S期和G2/M期细胞数明显降低。结论miR-422a高表达能够有效抑制骨肉瘤细胞的增殖，提高骨肉瘤细胞在恶劣环境中的凋亡比例。 展开更多
关键词 骨肉瘤 微小RNA-422a 细胞增殖 脱噬作用
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微小RNA-422b对胶质瘤细胞侵袭迁移和JAK1/STAT3通路的影响 被引量：2
6
作者 葛风 蒋云召 +1 位作者 王泳 陈东栋 《临床肿瘤学杂志》 CAS 北大核心 2019年第11期1004-1007,共4页
目的探讨微小RNA-422b(miR-422b)对人脑胶质瘤细胞迁移侵袭和Janus激酶1(JAK1)/信号转导和激活转录因子3(STAT3)通路的影响。方法采用实时定量PCR(QPCR)检测人星形胶质细胞HA1800和胶质瘤细胞U-87的miR-422b水平;脂质体介导miR-422抑制... 目的探讨微小RNA-422b(miR-422b)对人脑胶质瘤细胞迁移侵袭和Janus激酶1(JAK1)/信号转导和激活转录因子3(STAT3)通路的影响。方法采用实时定量PCR(QPCR)检测人星形胶质细胞HA1800和胶质瘤细胞U-87的miR-422b水平;脂质体介导miR-422抑制物(Inhibitor组)和阴性对照序列(NC组)转染U-87细胞并以未转染的细胞为对照组;QPCR、划痕实验和Transwell实验检测U-87细胞的miR-422b水平、划痕愈合率和穿膜细胞数以评价转染效率、迁移和侵袭能力,Western blotting检测磷酸化JAK1(p-JAK1)和磷酸化STAT3(p-STAT3)水平。结果与HA1800细胞(1.029±0.047)相比,U-87细胞的miR-422b水平升高至3.698±0.274(P<0.05)。Inhibitor组的miR-422b水平、划痕愈合率和穿膜细胞数分别为0.264±0.065、(25.327±5.320)%和(75.826±10.639)个,均低于对照组的1.169±0.354、(59.856±6.831)%和(183.742±15.736)个及NC组的1.175±0.262、(62.947±7.850)%和(175.981±12.560)个,差异有统计学意义(P<0.05)。与其余两组相比,Inhibitor组的p-JAK1和p-STAT3水平均降低(P<0.05)。对照组和NC组上述指标的差异无统计学意义(P>0.05)。结论miR-422b高表达可以促进胶质瘤细胞的迁移侵袭,可作为胶质瘤治疗的候选靶标。 展开更多
关键词 胶质瘤 微小RNA-422b 迁移 侵袭
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