微小RNA-148a-3p在寻常型银屑病患者外周血CD4^+T淋巴细胞中的表达及临床意义 被引量：11

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作者 曾菁莘 田歆 +5 位作者 朱慧兰 张锡宝 林玲 张丽丹 刘炜钰 罗权 《中华皮肤科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2019年第4期231-235,共5页

目的检测微小RNA(miRNA)-148a-3p在寻常型银屑病患者外周血CD4^+T淋巴细胞中的表达,探讨其在寻常型银屑病发病中的作用。方法2017年7月至2018年4月在广州市皮肤病防治所收集寻常型银屑病患者20例,健康对照20例。抽取受试者外周静脉血,... 目的检测微小RNA(miRNA)-148a-3p在寻常型银屑病患者外周血CD4^+T淋巴细胞中的表达,探讨其在寻常型银屑病发病中的作用。方法2017年7月至2018年4月在广州市皮肤病防治所收集寻常型银屑病患者20例,健康对照20例。抽取受试者外周静脉血,采用免疫磁珠法分选CD4^+T细胞,实时定量PCR检测外周血CD4^+T细胞中miRNA-148a-3p的表达;利用生物信息学软件预测miRNA-148a-3p的潜在靶基因,并通过双萤光素酶报告系统进行验证;采用Western印迹法检测受试者CD4^+T细胞中miRNA-148a-3p潜在靶基因Bim蛋白表达水平。采用SPSS20软件,对于符合正态分布的资料,两个独立样本均数比较采用t检验,对双变量资料计算Pearson相关系数;对不符合正态分布的资料,两样本均数比较采用非参数Mann WhitneyU检验,对双变量资料计算Spearman相关系数。结果寻常型银屑病组18例患者CD4+T细胞中miRNA-148a-3p的表达水平为5.61±1.66,健康对照组12例为1.00±0.26,两组比较,U=12,P<0.05。银屑病患者miRNA-148a-3p表达量与银屑病皮损面积和严重程度指数(PASI)呈正相关(r=0.93,P<0.001)。生物信息学软件预测B淋巴细胞瘤2相互作用的细胞死亡调节因子(Bim)是miRNA-148a的潜在靶基因之一,并通过双萤荧光素酶报告系统得到验证。患者组(11例)CD4^+T细胞Bim表达水平为0.69±0.07,健康对照组8例为0.93±0.06,两组比较,t=4.38,P<0.01。银屑病患者Bim表达量与PASI评分呈负相关(r=-0.774,P<0.01)。结论miRNA-148a-3p在寻常型银屑病患者外周血CD4+T细胞中过度表达,并可能通过调控Bim蛋白的表达,导致CD4+T细胞异常活化,进而参与银屑病的发生、发展。 展开更多

关键词 银屑病 微小RNAS CD4阳性T淋巴细胞 微小RNA-148a-3p BIM蛋白

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当归多糖通过调控miR-148a-3p抑制高糖诱导的视网膜神经节细胞氧化应激损伤及凋亡研究 被引量：4

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作者 曹朗 王艳新 贾冠美 《吉林中医药》 2023年第1期73-78,共6页

目的观察当归多糖对高糖诱导的视网膜神经节细胞(RGC)氧化应激损伤及凋亡的影响,并探讨可能机制。方法取对数期RGC-5细胞,分为对照组(常规培养基培养)、高糖组(含葡萄糖30 mmol/L的培养基培养)及高糖+低、中、高剂量组(分别用含葡萄糖30... 目的观察当归多糖对高糖诱导的视网膜神经节细胞(RGC)氧化应激损伤及凋亡的影响,并探讨可能机制。方法取对数期RGC-5细胞,分为对照组(常规培养基培养)、高糖组(含葡萄糖30 mmol/L的培养基培养)及高糖+低、中、高剂量组(分别用含葡萄糖30 mmol/L与当归多糖100、200、400 mg/L的培养基培养)。另取对数期RGC-5细胞,将细胞分为高糖+mi R-NC组、高糖+mi R-148a-3p mimics组、高糖+mi R-148a-3p inhibitor组、高糖+当归多糖+mi R-148a-3p mimics组、高糖+当归多糖+mi R-148a-3p inhibitor组。ELISA法检测细胞超氧化物歧化酶(SOD)活性及丙二醛(MDA)水平;Annexin V/PITC双染法检测细胞凋亡率;Western blot法检测细胞Bcl-2相关X蛋白(Bax)、B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2)蛋白表达量。结果与对照组比较,高糖组SOD活性、Bcl-2蛋白表达量降低,MDA水平、凋亡率、Bax蛋白表达量升高(P<0.05);与高糖组比较,高糖+低剂量组SOD活性、Bcl-2蛋白表达量升高,MDA水平、凋亡率、Bax蛋白表达量降低(P<0.05);与高糖+低剂量组比较,高糖+中剂量组SOD活性、Bcl-2蛋白表达量升高,MDA水平、凋亡率、Bax蛋白表达量降低(P<0.05);与高糖+中剂量组比较,高糖+高剂量组SOD活性、Bcl-2蛋白表达量升高,MDA水平、凋亡率、Bax蛋白表达量降低(P<0.05)。与高糖+mi R-NC组比较,高糖+mi R-148a-3p mimics组mi R-148a-3p表达量及SOD活性、Bcl-2蛋白表达量升高,MDA水平、凋亡率、Bax蛋白表达量降低(P<0.05),高糖+mi R-148a-3p inhibitor组mi R-148a-3p表达量及SOD活性、Bcl-2蛋白表达量降低,MDA水平、凋亡率、Bax蛋白表达量升高(P<0.05);与高糖+mi R-148a-3p mimics组比较,高糖+当归多糖+mi R-148a-3p mimics组mi R-148a-3p表达量及SOD活性、Bcl-2蛋白表达量升高,MDA水平、凋亡率、Bax蛋白表达量降低(P<0.05);与高糖+mi R-148a-3p inhibitor组比较,高糖+当归多糖+mi R-148a-3p inhibitor组mi R-148a-3p表达量及SOD活性、Bcl-2蛋白表达量升高,M 展开更多

关键词 当归多糖 微小RNA-148a-3p 高糖诱导 视网膜神经节细胞 氧化应激 凋亡

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艾司氯胺酮通过调控miR-148a-3p/KLF4通路减轻脊髓损伤大鼠的炎症反应 被引量：6

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作者 徐乾 梁威 +2 位作者 李鹏 彭晓红 余丹 《临床麻醉学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2022年第9期965-970,共6页

目的通过构建脊髓损伤大鼠模型,探讨艾司氯胺酮对脊髓损伤和微小RNA-148a-3p(miR-148a-3p)/Kruppel样因子4(KLF4)通路的影响。方法选择SPF级成年雌性SD大鼠48只,7~9周龄,体重215~255 g。将大鼠随机分为四组:假手术组(S组)、脊髓损伤组(... 目的通过构建脊髓损伤大鼠模型,探讨艾司氯胺酮对脊髓损伤和微小RNA-148a-3p(miR-148a-3p)/Kruppel样因子4(KLF4)通路的影响。方法选择SPF级成年雌性SD大鼠48只,7~9周龄,体重215~255 g。将大鼠随机分为四组:假手术组(S组)、脊髓损伤组(SCI组)、艾司氯胺酮50 mg/kg组(E组)和艾司氯胺酮50 mg/kg+miR-148a-3p抑制剂5 mg/kg组(EI组),每组12只。S组予去除椎板处理,SCI组仅建立脊髓损伤大鼠模型,E组和EI组分别于建模后每日腹腔注射艾司氯胺酮50 mg/kg和艾司氯胺酮50 mg/kg+miR-148a-3p抑制剂5 mg/kg,连续注射7 d。于建模后1、4、7、10 d采用斜板实验计算最大倾斜角度、行为学实验计算运动功能BBB评分评估大鼠脊髓神经功能。建模后10 d BBB评分后处死大鼠,采用ELISA法检测脊髓白细胞介素-1β(IL-1β)、丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)浓度,qPCR法检测脊髓miR-148a-3p、KLF4 mRNA表达量,Western blot法检测脊髓神经元核抗原(NeuN)、神经胶质纤维酸性蛋白(GFAP)、KLF4蛋白含量,HE染色法观察损伤处脊髓病理情况。结果与S组比较,SCI组、E组和EI组建模后1、4、7、10 d最大倾斜角度明显减小、BBB评分明显降低,脊髓IL-1β和MDA浓度、miR-148a-3p和KLF4 mRNA表达量、GFAP和KLF4蛋白含量明显升高,脊髓SOD浓度、NeuN蛋白含量明显降低(P<0.05)。与SCI组比较,E组和EI组建模后4、7、10 d最大倾斜角度明显增大、BBB评分明显升高,脊髓IL-1β和MDA浓度、GFAP蛋白含量明显降低,脊髓SOD浓度、miR-148a-3p和KLF4 mRNA表达量、NeuN和KLF4蛋白含量明显升高(P<0.05)。与E组比较,EI组建模后4、7、10 d最大倾斜角度明显减小、BBB评分明显降低,脊髓IL-1β和MDA浓度、GFAP蛋白含量明显升高,脊髓SOD浓度、miR-148a-3p和KLF4 mRNA表达量明显降低(P<0.05)。S组脊髓结构完整,细胞间排列紧密;SCI组脊髓结构被破坏,产生多个空洞;E组脊髓结构逐渐恢复,细胞排列较为整齐,空洞数量明显� 展开更多

关键词 脊髓损伤 艾司氯胺酮 微小RNA-148a-3p Kruppel样因子4 神经功能

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微小RNA-148a-3p靶向调控MAP3K9表达及对胃癌细胞增殖和凋亡的影响 被引量：6

4

作者 牛虹 田同德 +4 位作者 唐静雯 岳光星 李华华 范伊晓 周浩本 《临床肿瘤学杂志》 CAS 北大核心 2019年第2期108-112,共5页

目的探讨微小RNA-148a-3p(miR-148a-3p)对丝裂原活化蛋白激酶激酶激酶9(MAP3K9)的靶向调控作用及对胃癌细胞增殖和凋亡的影响。方法向对数生长期胃癌细胞株MGC-803转染miR-148a-3p模拟物(mimics组)和阴性对照(NC组),以未转染的MGC-803... 目的探讨微小RNA-148a-3p(miR-148a-3p)对丝裂原活化蛋白激酶激酶激酶9(MAP3K9)的靶向调控作用及对胃癌细胞增殖和凋亡的影响。方法向对数生长期胃癌细胞株MGC-803转染miR-148a-3p模拟物(mimics组)和阴性对照(NC组),以未转染的MGC-803细胞为对照组;采用实时定量PCR(QPCR)检测各组miR-148a-3p水平以评价转染效率,MTT法检测各组细胞增殖能力,流式细胞术检测各组细胞凋亡情况,分别采用QPCR和Western blotting检测Bcl-2、Bax、caspase-3及MAP3K9 mRNA和蛋白水平,同时采用双荧光素酶报告实验验证miR-148a-3p与MAP3K9的靶向作用关系。结果QPCR结果显示,对照组、NC组和mimics组的miR-148a-3p水平分别为1. 021±0. 123、1. 087±0. 196和2. 854±0. 368,与对照组和NC组比较,mimics组的miR-148a-3p水平升高(P<0. 05)。mimics组MGC-803细胞的增殖活力较其余两组减弱(P<0. 05)。mimics组MGC-803细胞凋亡率为(15. 2±1. 6)%,高于对照组的(3. 5±0. 9%)%和NC组的(4. 5±1. 1)%,差异具有统计学意义(P<0. 05)。与对照组和NC组比较,mimics组的MAP3K9和Bcl-2的mRNA和蛋白水平均下调,而Bax和caspase-3的mRNA和蛋白水平均上调(P<0. 05);双荧光素酶报告实验证实MAP3K9是miR-148a-3p的直接作用靶点。结论 MiR-148a-3p可抑制胃癌细胞MGC-803的增殖并诱导其凋亡,可能通过靶向MAP3K9来发挥抑癌作用,调控miR-148a-3p/MAP3K9轴在胃癌防治中有一定应用前景。 展开更多

关键词 胃癌 微小RNA-148a-3p 丝裂原活化蛋白激酶激酶激酶9 增殖 凋亡

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微小RNA-148a-3p对强直性脊柱炎患者T细胞自噬及炎症应答的影响及其机制 被引量：6

5

作者 王亚寒 罗建平 +2 位作者 王小刚 杨彬 崔力扬 《中华实验外科杂志》 CSCD 北大核心 2017年第12期2265-2268,共4页

目的探讨微小RNA（miRNA，miR）-148a-3p对强直性脊柱炎患者T细胞自噬及炎症应答的影响及其作用机制。方法采用实时定量反转录聚合酶链反应（RT-qPCR）检测强直性脊柱炎（AS）患者T细胞中miR-148a-3p和DNA甲基转移酶1（DNMT1）的表达水... 目的探讨微小RNA（miRNA，miR）-148a-3p对强直性脊柱炎患者T细胞自噬及炎症应答的影响及其作用机制。方法采用实时定量反转录聚合酶链反应（RT-qPCR）检测强直性脊柱炎（AS）患者T细胞中miR-148a-3p和DNA甲基转移酶1（DNMT1）的表达水平。利用Western blot检测自噬标志分子[微管相关蛋白1轻链3（LC3）、Beclin-1和自噬相关基因5（ATG5）]的蛋白表达量。利用双荧光素酶报告系统、RT-qPCR及Western blot法验证miR-148a-3p与DNMT1的靶向作用关系。结果与正常对照组比较，AS患者T细胞中miR-148a-3高表达，而DNMT1表达水平较低。miR-148a-3p过表达显著增加了炎性因子白细胞介素（IL）-6、IL-17和IL-23的表达水平（4.23±0.34比1.06±0.15，P＝0.000；2.87±0.29比1.02±0.17，P＝0.000；3.12±0.32比1.07±0.21，P＝0.000）；反之，抑制miR-148a-3p的表达，细胞因子表达水平则明显降低（0.41±0.14比0.97±0.13，0.52±0.10比0.95±0.14，0.45±0.12比0.98±0.18；P＝0.008）。此外，过表达miR-148a-3p明显降低自噬标志基因LC3Ⅱ/LC3Ⅰ、ATG5和Beclin-1的表达水平（0.44±0.13比1.06±0.16，P＝0.003；0.38±0.11比1.07±0.16，P＝0.002；0.42±0.12比1.03±0.14，P＝0.003）；相反，下调miR-148a-3p则增加自噬水平（2.89±0.28比1.03±0.17，P＝0.000；3.31±0.29比0.98±0.18，P＝0.000；3.68±0.31比1.02±0.15，P＝0.000）。双荧光素酶报告基因检测结果显示，miR-148a-3p与DNMT1存在直接的靶标关系（0.44±0.07比1.00±0.12，P＝0.002；1.68±0.17比1.00±0.11，P＝0.004）；且miR-148a-3p过表达抑制DNMT1的mRNA（0.38±0.17比0.98±0.23，P＝0.011）和蛋白（0.41±0.17比0.97±0.25，P＝0.014）表达水平，反之则促进DNMT1的mRNA（3.83±0.29比1.04±0.21，P＝0.000）和蛋白（3.46±0.28比1.02±0.20，P＝0.000）表达。结论miR-148a-3p其可以通过靶向调控DNMT1的表达来调节成T细胞自噬及炎症应答。 展开更多

关键词 强制性脊柱炎 微小RNA-148a-3p 自噬 炎性因子

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微小RNA-148a-3p靶向核心1β13-半乳糖基转移酶1增强肺腺癌细胞的放疗敏感性的研究

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作者 申霖 任粤 +2 位作者 邓一洲 殷旭东 陈勇 《实用临床医药杂志》 CAS 2024年第6期1-8,共8页

目的探讨微小RNA-148a-3p(miR-148a-3p)在肺腺癌中的表达及临床意义,分析miR-148a-3p靶向蛋白核心1β13-半乳糖基转移酶1(C1GALT1)对肺腺癌细胞放疗敏感性的影响及机制。方法选取肺腺癌组织芯片中76例患者肿瘤组织及肺腺癌A549细胞株为... 目的探讨微小RNA-148a-3p(miR-148a-3p)在肺腺癌中的表达及临床意义,分析miR-148a-3p靶向蛋白核心1β13-半乳糖基转移酶1(C1GALT1)对肺腺癌细胞放疗敏感性的影响及机制。方法选取肺腺癌组织芯片中76例患者肿瘤组织及肺腺癌A549细胞株为研究对象。对组织芯片分别进行miR-148a-3p原位杂交(ISH)染色和C1GALT1免疫组织化学染色,分析76例肺腺癌患者肿瘤组织中miR-148a-3p的表达与临床病理、预后及C1GALT1表达的关系。采用细胞转染技术对A549细胞进行miR-148a-3p过表达质粒的转染;转染细胞接受2 Gy放疗后采用克隆形成实验检测细胞的放疗敏感性;采用蛋白质印迹法检测细胞C1GALT1蛋白表达水平;采用双荧光素酶报告基因实验验证miR-148a-3p与C1GALT1的靶向调控关系;采用共转染技术分析miR-148a-3p调控A549细胞放疗敏感性的机制。结果76例肺腺癌组织中低表达miR-148a-3p与患者淋巴结转移显著相关(P=0.012);miR-148a-3p高表达者预后显著优于miR-148a-3p低表达者(P=0.005);肺腺癌组织中miR-148a-3p与C1GALT1的表达呈显著负相关(P=0.023)。多因素分析显示,miR-148a-3p低表达、T分期及淋巴结转移是预后的独立危险因素。克隆形成实验显示,过表达miR-148a-3p组克隆形成数显著低于对照组(P<0.001);Western Blot结果显示,miR-148a-3p过表达可以显著下调细胞中C1GALT1蛋白水平(P<0.001)。双荧光素酶报告基因实验显示miR-148a-3p通过结合C1GALT1的3′UTR来调控C1GALT1的表达。功能拯救试验显示C1GALT1能够部分抵消miR-148a-3p的放疗增敏效应。结论肺腺癌中miR-148a-3p低表达与淋巴结转移、C1GALT1高表达及预后不良显著相关,miR-148a-3p通过负调控C1GALT1的表达增强肺腺癌细胞的放疗敏感性。 展开更多

关键词 微小RNA-148a-3p 核心1β13-半乳糖基转移酶1 肺腺癌 放疗敏感性 预后

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补阳还五汤通过miR-148a-3p抑制大鼠星形胶质细胞凋亡而减轻脑缺血再灌注损伤 被引量：2

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作者 田甜 蔡国英 +4 位作者 叶佳蓓 单玉栋 周晓红 郭书翰 高维娟 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2023年第8期1431-1439,共9页

目的:探究补阳还五汤是否通过激活微小RNA-148a-3p(miR-148a-3p)靶向调控胶质细胞原纤维酸性蛋白(GFAP)而抑制大鼠氧糖剥夺/复氧复糖(OGD/R)星形胶质细胞凋亡。方法:取对数生长期的大鼠星形胶质细胞系CTX TNA2,随机分为5组:空白对照组(... 目的:探究补阳还五汤是否通过激活微小RNA-148a-3p(miR-148a-3p)靶向调控胶质细胞原纤维酸性蛋白(GFAP)而抑制大鼠氧糖剥夺/复氧复糖(OGD/R)星形胶质细胞凋亡。方法:取对数生长期的大鼠星形胶质细胞系CTX TNA2,随机分为5组:空白对照组(CON组)、模型组(OGD/R组)、补阳还五汤含药血清(BYHWDS)组、miR-148a-3p抑制物组(inhibitor组)和BYHWDS+inhibitor组,每组每种检测重复3次。除CON组外,其余各组氧糖剥夺6 h后复氧复糖24 h,并于复氧复糖的同时给予相应药物处理(但转染于造模前操作)。采用倒置相差显微镜观察细胞形态变化;MTS法检测各组细胞活力变化;qRT-PCR检测miR-148a-3p、GFAP mRNA和caspase-3 mRNA的表达水平;Western blot检测GFAP、Bax、Bcl-2、caspase-3、cleaved caspase-3、caspase-9和cleaved caspase-9蛋白水平;annexin V-FITC/PI染色检测CTX TNA2细胞的凋亡情况;免疫荧光双染观察GFAP、caspase-3、Bcl-2和Bax的表达情况。结果:与CON组相比,OGD/R组和inhibitor组的细胞皱缩,突起严重萎缩、变形,细胞碎片增多,细胞活力显著降低(P<0.01),miR-148a-3p表达水平降低(P<0.01),GFAP和caspase-3的mRNA表达水平均显著升高(P<0.01),GFAP蛋白表达水平,cleaved caspase-3/caspase-3、Bax/Bcl-2和cleaved caspase-9/caspase-9比值,以及细胞凋亡水平均显著升高(P<0.05)。与OGD/R组和inhibitor组相比,BYHWDS组和BYHWDS+inhibitor组细胞形态较损伤后有所恢复,突起萎缩减轻,连接有所增加,细胞活力显著升高(P<0.01),miR-148a-3p表达水平升高(P<0.01),GFAP和caspase-3的mRNA表达水平均显著降低(P<0.01),GFAP蛋白表达水平,cleaved caspase-3/caspase-3、Bax/Bcl-2和cleaved caspase-9/caspase-9比值,以及细胞凋亡水平均显著降低(P<0.05)。结论:补阳还五汤能上调miR-148a-3p表达而调低靶基因GFAP,从而抑制OGD/R大鼠CTX TNA2细胞凋亡,减轻脑缺血再灌注损伤,发挥神经保护作用。 展开更多

关键词 补阳还五汤 微小RNA-148a-3p 胶质细胞原纤维酸性蛋白 星形胶质细胞 细胞凋亡 脑缺血再灌注损伤

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基于miR-148a-3p/SMAD2轴探讨当归多糖对高糖诱导RGC凋亡的影响

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作者 王江涛 王艳新 +1 位作者 贾冠美 曹朗 《中国中医眼科杂志》 2024年第7期601-609,共9页

目的探究当归多糖(APS)对高糖诱导视网膜神经节细胞(RGC)凋亡的影响,及其基于微小RNA-148a-3p/Smad家族成员2(miR-148a-3p/SMAD2)轴的作用机制。方法将分别转染miR-148a-3p模拟物(mimics)、miR-148a-3p抑制剂(inhibitor)及其对照品mimic... 目的探究当归多糖(APS)对高糖诱导视网膜神经节细胞(RGC)凋亡的影响,及其基于微小RNA-148a-3p/Smad家族成员2(miR-148a-3p/SMAD2)轴的作用机制。方法将分别转染miR-148a-3p模拟物(mimics)、miR-148a-3p抑制剂(inhibitor)及其对照品mimics-NC、miR-NC的RGC,分为对照组(CG)、模型组(MG)、APS低剂量(APS-L)组、APS高剂量(APS-H)组、APS-H+miR-148a-3p对照品组(APS+miR-NC)、APS-H+miR-148a-3p抑制剂组(miR-148a-3p inhibitor),分别以相应的高糖和APS处理,采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测miR-148a-3p和SMAD2 mRNA表达水平,检测细胞活力、凋亡情况和氧化应激指标水平,Western Blot法检测SMAD2蛋白表达水平,双荧光素酶实验检测miR-148a-3p和SMAD2的靶向关系。结果(1)miR-148a-3p/SMAD2表达:APS-L组、APS-H组、APS-H+miR-NC组中miR-148a-3p表达水平均高于MG组(t_(APS-L)=6.564、t_(APS-H)=10.542、t_(APS-H+miR-NC)=9.945,均P=0.000),SMAD2 mRNA表达水平低于MG组(t_(APS-L)=4.147,P=0.004;t_(APS-H)=6.464、t_(APS-H+miR-NC)=6.586,均P=0.000);APS-H+miR-148a-3p inhibitor组miR-148a-3p表达水平低于APS-H+miRNC组(t=7.558,P=0.000),SMAD2 mRNA表达高于APS-H+miR-NC组(t=4.513,P=0.001),差异均有统计学意义。(2)细胞活力和凋亡率:APS-L组、APS-H组、APS-H+miR-NC组细胞活力高于MG组(t_(APS-L)=8.105、t_(APS-H)=11.509、t_(APS-H+miR-NC)=11.996,均P=0.000),细胞凋亡率低于MG组(t_(APS-L)=8.729、t_(APS-H)=15.690、t_(APS-H+miR-NC)=14.709,均P=0.000);APS-H+miR-148a-3p inhibitor组细胞活力低于APS-H+miR-NC组(t=10.212,P=0.000),细胞凋亡率高于APS-H+miR-NC组(t=12.247,P=0.000),差异均有统计学意义。(3)氧化应激:APS-L组、APS-H组、APS-H+miR-NC组乳酸脱氢酶(LDH)和丙二醛(MDA)均低于MG组(LDH:t_(APS-L)=11.257、t_(APS-H)=18.770、t_(APS-H+miR-NC)=18.364,均P=0.000;MDA:t_(APS-L)=11.121、t_(APS-H)=17.139、t_(APS-H+miR-NC)=17.768,均P=0.000),超氧化物歧化酶(SOD)和谷胱甘肽(GSH)均高于MG组(SOD:t_(APS-L)=9.408、t_(APS-H)=14.833、t_(APS-H+miR-NC)= 展开更多

关键词 当归多糖 视网膜神经节细胞 微小RNA-148a-3p SMAD家族成员2

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miR-148a-3p对银屑病患者Th细胞活化调控的影响 被引量：6

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作者 林玲 曾菁莘 +1 位作者 张锡宝 罗权 《中国皮肤性病学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2020年第7期743-747,共5页

目的 在前期研究的基础上进一步验证miR-148a-3p通过促凋亡蛋白Bim对银屑病发病机制中T细胞亚群分化的影响及相关免疫应答机制的调控。方法 培养人T淋巴白血病(Jurkat)细胞;Bim siRNA、miR-148a-3p mimics、miR-148a-3p inhibitor,分别... 目的 在前期研究的基础上进一步验证miR-148a-3p通过促凋亡蛋白Bim对银屑病发病机制中T细胞亚群分化的影响及相关免疫应答机制的调控。方法 培养人T淋巴白血病(Jurkat)细胞;Bim siRNA、miR-148a-3p mimics、miR-148a-3p inhibitor,分别电转CD4+T细胞,RT-qPCR检测miR-148a-3p和Bim mRNA,Western blot检测 Bim 蛋白;通过ELISA检测培养上清中细胞因子含量。结果 Bim siRNA、miR-148a-3p mimics、miR-148a-3p inhibitor分别电转CD4+T细胞(Jurkat细胞),电转效率可达84.5%。与空白组相比,过表达的miR-148a-3p可有效抑制靶基因Bim mRNA及其蛋白的表达,ELISA检测培养上清中IFN-γ及IL-17均明显升高,IL-4及IL-10均明显降低(P均<0.05);而抑制miR-148a-3p时Bim mRNA及其蛋白的表达升高,IFN-γ明显减少(P均<0.05),而IL-17表达(P>0.05)下降不明显,IL-4及IL-10均明显升高(P均<0.05)。在正常CD4+T细胞中沉默Bim的表达,IFN-γ及IL-17亦显著升高(P均<0.05)。结论 在银屑病患者中高表达的miR-148a-3p靶向调控Bim的表达可导致Th1、Th17细胞异常活化,Th2细胞数量减少及Treg细胞免疫抑制功能减弱,这提示miR-148a-3p参与寻常性银屑病病情的发生发展,为后续miR-148a-3p靶向干预寻常性银屑病病情提供了依据。 展开更多

关键词 寻常性银屑病 miR-148a-3p CD4%pLUS%T细胞 BIM蛋白

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微小RNA-148a-3p靶向调控MRAS表达及其对胃癌HGC-27细胞侵袭迁移的影响 被引量：4

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作者 王建国 孙沛达 +1 位作者 刘海燕 陈林 《临床肿瘤学杂志》 CAS 2017年第10期874-879,共6页

目的探讨微小RNA-148a-3p(miR-148a-3p)对胃癌HGC-27细胞侵袭迁移及肌RAS癌基因同源基因(MRAS)表达的影响。方法将冻存的胃癌细胞株HGC-27复苏并常规培养至对数生长期,将miR-148a-3p模拟物及其阴性对照(miR-NC)分别转染HGC-27细胞(miR-1... 目的探讨微小RNA-148a-3p(miR-148a-3p)对胃癌HGC-27细胞侵袭迁移及肌RAS癌基因同源基因(MRAS)表达的影响。方法将冻存的胃癌细胞株HGC-27复苏并常规培养至对数生长期,将miR-148a-3p模拟物及其阴性对照(miR-NC)分别转染HGC-27细胞(miR-148a-3p转染组和miR-NC组),以未行转染的HGC-27细胞为空白对照(未转染组),采用实时定量PCR(QPCR)检测各组转染48 h后的miR-148a-3p水平,划痕实验和Transwell侵袭实验分别比较各组HGC-27细胞转染48 h后的迁移相对距离和穿膜细胞数目以评价迁移和侵袭情况,QPCR和Western blotting分别检测各组转染48 h后MRAS的mRNA和蛋白水平,双荧光素酶报告基因实验验证miR-148a-3p与MRAS之间的靶向调节作用。结果QPCR检测显示转染48 h后miR-148a-3p转染组的miR-148a-3p水平为2.612±0.213,高于未转染组的0.954±0.098和miRNC组的0.983±0.196,差异有统计学意义(P<0.05);划痕实验结果显示,miR-148a-3p转染组的相对迁移距离为0.615±0.019,低于未转染组的1.021±0.019和miR-NC组的0.948±0.022,Transwell侵袭实验显示miR-148a-3p转染组的穿膜细胞数目为(83±17)个,少于未转染组的(124±17)个和miR-NC组的(136±26)个,差异有统计学意义(P<0.05)。QPCR和Western blotting结果显示,miR-148a-3p转染组MRAS mRNA和蛋白水平分别为0.614±0.057和0.553±0.049,均低于未转染组的1.106±0.024和0.824±0.091及miR-NC组的1.095±0.031和0.784±0.121,差异有统计学意义(P<0.05)。miR-148a-3p显著降低野生型MRAS-3'非翻译区质粒转染细胞的荧光素酶活性,但对突变型质粒转染细胞的荧光素酶活性无明显影响。结论 MiR-148a-3p可能通过靶向调控MRAS来抑制胃癌HGC-27细胞的侵袭和迁移。 展开更多

关键词 胃癌 侵袭和转移 微小RNA-148a-3p 肌RAS癌基因同源基因

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miR-148a-3p靶向Wnt1基因对人牙髓干细胞增殖活力及成骨分化的影响

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作者 吴东 朱青青 高振杰 《口腔颌面修复学杂志》 2023年第5期335-341,共7页

目的:观察微小RNA(miRNA)-148a-3p对人牙髓干细胞(DPSCs)增殖活力及成骨分化的影响,并探讨可能机制。方法:取对数期DPSCs,分为空白组、NC组、inhibitor组、inhibitor+XAV939[无翅型MMTV整合位点家族蛋白(Wnt)/β-连环蛋白(β-catenin)... 目的:观察微小RNA(miRNA)-148a-3p对人牙髓干细胞(DPSCs)增殖活力及成骨分化的影响,并探讨可能机制。方法:取对数期DPSCs,分为空白组、NC组、inhibitor组、inhibitor+XAV939[无翅型MMTV整合位点家族蛋白(Wnt)/β-连环蛋白(β-catenin)信号通路抑制剂]组。空白组不处理,NC组转染阴性对照质粒miR-148a-3p NC,inhibitor组转染miR-148a-3p inhibitor,inhibitor+XAV939组转染miR-148a-3p inhibitor并加入XAV939(40μmol/L)。转染48 h后qRT-PCR法检测miR-148a-3p表达量;MTT法检测增殖活力;ELISA法检测碱性磷酸酶(ALP)活性;茜素红染色法检测矿化能力;双荧光素酶实验验证miR-148a-3p靶向基因;Western blot法检测糖原合成酶激酶3β(GSK-3β)、β-catenin、Runt相关转录因子2(Runx2)、牙本质涎磷蛋白(DSPP)、牙本质基质蛋白1(DMP-1)以及Wnt1蛋白相对表达量。结果:与空白组、NC组比较,inhibitor组24 h、48 h、72 h吸光度值,GSK-3β蛋白表达量降低,ALP活性值,矿化结节面积占比,β-catenin、Runx2、DSPP、DMP-1以及Wnt1蛋白表达量升高(P<0.05);与inhibitor组比较,inhibitor+XAV939组24 h、48 h、72 h吸光度值,GSK-3β蛋白表达量升高,ALP活性值,矿化结节面积占比,β-catenin、Runx2、DSPP、DMP-1以及Wnt1蛋白表达量降低(P<0.05)。结论:抑制miR-148a-3p表达可提升DPSCs增殖活力并促进其成骨分化,推测其作用机制与负向调控下游的靶基因Wnt1有关。 展开更多

关键词 微小RNA-148a-3p 无翅型MMTV整合位点家族蛋白1 β-连环蛋白 牙髓干细胞 增殖 成骨分化

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胃癌组织中microRNA-148a-3p的表达及临床意义 被引量：3

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作者 张波 徐皓 池堂春 《中国微生态学杂志》 CAS CSCD 2019年第1期86-89,93,共5页

目的探究胃癌组织中microRNA-148a-3p的表达水平及其临床意义。方法随机选取行手术治疗的胃癌患者60例,采用qRT-PCR检测胃癌与癌旁组织中miR-148a-3p的表达水平,采用免疫组化检测胃癌组织中LC3与Beclin 1的表达,统计分析胃癌组织中miR-1... 目的探究胃癌组织中microRNA-148a-3p的表达水平及其临床意义。方法随机选取行手术治疗的胃癌患者60例,采用qRT-PCR检测胃癌与癌旁组织中miR-148a-3p的表达水平,采用免疫组化检测胃癌组织中LC3与Beclin 1的表达,统计分析胃癌组织中miR-148a-3p表达水平与临床病理特征及LC3、Beclin 1表达的相关性。采用脂质体法在SGC-7901细胞中转染miR-148a-3p并使用免疫荧光实验检测LC3的定位,Western blot检测LC3及Beclin1的表达量。结果胃癌组织中miR-148a-3p表达水平显著低于癌旁组织,并且与胃癌肿瘤大小、肿瘤淋巴结转移情况、临床分期具有相关性,且与LC3及Beclin 1的表达呈负相关。过表达miR-148a-3p后SGC-7901细胞中LC3荧光斑点的数量显著减少,并且LC3Ⅱ与LC3Ⅰ表达量的比值及Beclin1表达量均显著降低。结论 miR-148a-3p的低表达可能参与了胃癌的恶性演进,并且miR-148a-3p可能通过抑制细胞自噬发挥抗肿瘤作用。 展开更多

关键词 胃细胞癌 microrna-148a-3p 自噬 BECLIN1

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miR-148a-3p靶向调控PTEN基因表达对黑色素瘤细胞生物学特性的影响 被引量：2

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作者 黄辉云 沈二栋 +1 位作者 唐四清 粟钰淇 《肿瘤药学》 CAS 2019年第2期219-225,237,共8页

目的探讨miR-148a-3p靶向PTEN在黑色素瘤中的表达及其对黑色素瘤增殖、迁移及凋亡的影响。方法收集90例黑色素瘤癌组织及距肿瘤边缘5 cm的正常组织标本,记录患者临床病理资料,检测黑色素瘤组织及癌旁组织中miR-148a-3p、PTEN的表达水平;... 目的探讨miR-148a-3p靶向PTEN在黑色素瘤中的表达及其对黑色素瘤增殖、迁移及凋亡的影响。方法收集90例黑色素瘤癌组织及距肿瘤边缘5 cm的正常组织标本,记录患者临床病理资料,检测黑色素瘤组织及癌旁组织中miR-148a-3p、PTEN的表达水平;将miR-148a-3p、PTEN的siRNA转染人黑色素瘤SK-MEL-3细胞系,分别采用CCK8法、Transwell法和流式细胞术检测转染后细胞增殖水平、迁移能力、侵袭能力和凋亡情况。结果与癌旁正常组织相比,黑色素瘤组织中miR-148a-3p表达明显上调,PTEN表达明显下调(P<0.05)。miR-148a-3p表达水平与黑色素瘤淋巴结转移及TNM分期有关(P<0.05),PTEN表达与黑色素瘤淋巴结转移、肿瘤分化程度、TNM分期显著相关(P<0.05)。miR-148a-3p siRNA组PTEN基因的表达水平显著上调,细胞生长和迁移能力明显受到抑制,凋亡水平显著增加(P<0.05);miR-148a-3p siRNA+PTEN siRNA组细胞生长和迁移能力明显增强,细胞凋亡受到抑制(P<0.05)。结论 miR-148a-3p能负向调控PTEN的表达,从而促进黑色素瘤细胞的生长和迁移,并抑制其凋亡。 展开更多

关键词 黑色素瘤 miR-148a-3p pTEN 增殖 凋亡

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微小RNA-148a-3p调控Cullin-5表达对脑胶质瘤细胞生物学功能的作用 被引量：1

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作者 李逢佳 张守庆 +3 位作者 宋纯玉 高勇 潘强 王益华 《中华实验外科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2020年第5期881-883,共3页

目的:探讨微小RNA(miRNA,miR)-148a-3p调控Cullin-5(CUL5)表达对脑胶质瘤细胞生物学功能的作用。方法:实时荧光定量-聚合酶链反应(Real-time PCR)检测胶质瘤细胞(U87、U251、T98G)及正常星形胶质细胞HA1880中miR-148a-3p及CUL5 mRNA表... 目的:探讨微小RNA(miRNA,miR)-148a-3p调控Cullin-5(CUL5)表达对脑胶质瘤细胞生物学功能的作用。方法:实时荧光定量-聚合酶链反应(Real-time PCR)检测胶质瘤细胞(U87、U251、T98G)及正常星形胶质细胞HA1880中miR-148a-3p及CUL5 mRNA表达。胶质瘤细胞U251随机分为miR-148a-3p inhibitor组和miR-148a-3p NC组,脂质体Lipofectamine?3000将miR-148a-3p inhibitor和miR-148a-3p NC转入胶质瘤细胞中,Real-time PCR检测miR-148a-3p表达,水溶性四唑蓝(WST)法检测细胞活力,Tanswell实验检测细胞迁移及侵袭能力,Real-time PCR法及蛋白质印迹法(Western blot)检测细胞中CUL5蛋白及mRNA表达,并进行荧光素酶报告基因分析。组间比较采用 t检验进行分析。 结果:miR-148a-3p inhibitor组(0.31±0.03)中miR-148a-3p表达量低于miR-148a-3p NC组(1.00±0.10, t=5.479, P<0.05)。miR-148a-3p inhibitor组(0.375±0.037)细胞活力低于miR-148a-3p NC组(0.525±0.051, t=4.587, P<0.05);miR-148a-3p inhibitor组细胞克隆数目[(43.52±4.25)个]少于miR-148a-3p NC组[(148.79±14.88)个]( t=5.147, P<0.05)。miR-148a-3p inhibitor组[(38.47±3.85)个]细胞迁移数目少于miR-148a-3p NC组[(185.59±18.56)个]( t=5.589, P<0.05)。miR-148a-3p inhibitor组[(41.79±4.18)个]细胞侵袭数目少于miR-148a-3p NC组[(195.69±19.58)个]( t=6.482, P<0.05)。miR-148a-3p inhibitor+ CUL野生型质粒的荧光强度(0.55±0.05)低于miR-148a-3p inhibitor+CUL5突变型(1.01±0.10)、miR-148a-3p NC+CUL5野生型(1.02±0.10)/突变型(1.03±0.10)。miR-148a-3p inhibitor组(1.89±0.18)中CUL5 mRNA表达量高于miR-148a-3p NC组(1.00±0.10, t=5.579, P<0.05)。miR-148a-3p inhibitor组(0.42±0.04)中CUL5蛋白表达量高于miR-148a-3p NC组(1.43±0.14, t=5.894, P<0.05)。 结论:下调miR-148a-3p表达进而促进CUL5表达,最终抑制U251胶质瘤细胞增殖与侵袭。 展开更多

关键词 胶质瘤 微小RNA-148a-3p Cullin-5 增殖 侵袭

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LINC00052靶向miR-148b-3p影响高糖诱导的肾小管上皮细胞增殖、凋亡及EMT的分子机制 被引量：1

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作者 庞紫蕊 张林波 刘宋芳 《国际泌尿系统杂志》 2023年第2期317-321,共5页

目的 探讨LINC00052通过靶向miR-148b-3p影响高糖诱导的肾小管上皮细胞增殖、凋亡及上皮间质转化(EMT)的分子机制.方法 将肾小管上皮细胞HK-2分为对照组(NC 组)、高糖组(HG 组)、pcDNA-LINC00052+HG 组、pcDNA-NC+HG 组、anti-miR-148b-... 目的 探讨LINC00052通过靶向miR-148b-3p影响高糖诱导的肾小管上皮细胞增殖、凋亡及上皮间质转化(EMT)的分子机制.方法 将肾小管上皮细胞HK-2分为对照组(NC 组)、高糖组(HG 组)、pcDNA-LINC00052+HG 组、pcDNA-NC+HG 组、anti-miR-148b-3p+HG 组、anti-miR-NC+HG 组、miR-148b-3p+pcDNA-LINC00052+HG 组、miR-NC+pcDNA-LINC00052+HG组;采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测LINC00052和miR-148b-3p的表达水平;蛋白质印迹法(Western blot)检测E钙黏蛋白(E-Cadherin)、神经钙黏蛋白(N-Cadherin)、波形蛋白(vimentin)蛋白表达;CCK-8检测细胞活性;流式细胞术检测细胞凋亡;双荧光素酶报告实验分为:miR-NC+LINC00052-WT 组、miR-148b-3p+LINC00052-WT 组、miR-NC+LINC00052-MUT 组、miR-148b-3p+LINC00052-MUT 组;将 LINC00052 过表达载体、抑制表达载体及其阴性对照转染至HK-2细胞中,分为:pcDNA-NC组、pcDNA-LINC00052组、si-NC组、si-LINC00052组,检测LINC00052和miR-148b-3p的靶向关系.结果 与NC组比较,HG组的细胞活性、E-Cadherin 和 LINC00052 表达水平降低(均 P<0.001),miR-148b-3p、N-Cadherin 和 vimentin表达水平、细胞凋亡率升高(均P<0.001).与pcDNA-NC+HG组比较,pcDNA-LINC00052+HG组的miR-148b-3p、N-Cadherin和vimentin表达水平以及细胞凋亡率降低,E-Cadherin表达水平和细胞活性升高(均P<0.001).与 anti-miR-NC+HG 组比较,anti-miR-148b-3p+HG 组的 miR-148b-3p、N-Cadherin和vimentin表达水平以及细胞凋亡率降低,E-Cadherin表达水平和细胞活性升高(均P<0.001).与pcDNA-NC组比较,pcDNA-LINC00052组的LINC00052表达水平升高,miR-148b-3p表达水平降低(均P<0.001);与si-NC组比较,si-LINC00052组的LINC00052表达水平降低,miR-148b-3p 表达水平升高(均P<0.001).与 miR-NC+pcDNA-LINC00052+HG 组比较,miR-148b-3p+pcDNA-LINC00052+HG 组 miR-148b-3p、N-Cadherin 和 vimentin 表达水平以及细胞凋亡率升高,E-Cadherin表达水平以及细胞活性降低(均P<0.001).结论 LINC00052通过靶向miR-148b-3p抑制高糖诱� 展开更多

关键词 上皮细胞 肾小管 LINC00052 微小RNA-148b-3p 细胞增殖

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MiR-148b-3p通过调控CDKN1B表达影响心肌细胞增殖及凋亡的分子机制 被引量：3

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作者 王嘉明 郭丽敏 +1 位作者 郭艳娟 程国良 《中国循证心血管医学杂志》 2020年第7期846-850,854,共6页

目的探讨微小RNA-148b-3p(miR-148b-3p)是否通过调控细胞周期蛋白依赖性激酶抑制剂1B(CDKN1B)表达影响心肌细胞增殖及凋亡。方法通过Lipofectamine2000将anti-miR-NC、anti-miR-148b-3p、pcDNA、pcDNA-CDKN1B、anti-miR-NC与si-NC、anti... 目的探讨微小RNA-148b-3p(miR-148b-3p)是否通过调控细胞周期蛋白依赖性激酶抑制剂1B(CDKN1B)表达影响心肌细胞增殖及凋亡。方法通过Lipofectamine2000将anti-miR-NC、anti-miR-148b-3p、pcDNA、pcDNA-CDKN1B、anti-miR-NC与si-NC、anti-miR-148b-3p与si-CDKN1B转染至心肌细胞,给予10μg/ml的脂多糖(LPS)刺激24 h,分别记作LPS+anti-miR-NC组、LPS+anti-miR-148b-3p组、LPS+pcDNA组、LPS+pcDNA-CDKN1B组、LPS+anti-miR-NC+si-NC组、LPS+anti-miR-148b-3p+si-CDKN1B组。使用含有10μg/mL的LPS处理H9c2细胞24 h,记作LPS组。同时将正常培养的心肌细胞作为Con组。实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)与蛋白免疫印迹法(Western blot)分别检测miR-148b-3p、CDKN1B的表达量;甲基噻唑基四唑(MTT)检测细胞增殖;流式细胞术检测细胞凋亡率;双荧光素酶报告实验验证miR-148b-3p与CDKN1B的靶向作用;Western blot检测细胞周期蛋白1(CyclinD1)、P21、B淋巴细胞瘤-2相关蛋白(Bax)、B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2)的表达量。结果与Con组比较,LPS组miR-148b-3p的表达水平显著升高(P<0.05),CDKN1B mRNA及蛋白水平显著降低(P<0.05),细胞存活率显著降低(P<0.05),细胞凋亡率显著升高(P<0.05),CyclinD1、Bcl-2蛋白水平显著降低(P<0.05),P21、Bax蛋白水平显著升高(P<0.05);与LPS+anti-miR-NC组比较,LPS+anti-miR-148b-3p组心肌细胞存活率显著升高(P<0.05),细胞凋亡率显著降低(P<0.05),CyclinD1、Bcl-2蛋白水平显著升高(P<0.05),P21、Bax蛋白水平显著降低(P<0.05);与LPS+pcDNA组比较,LPS+pcDNACDKN1B组心肌细胞存活率显著升高(P<0.05),细胞凋亡率显著降低(P<0.05),CyclinD1、Bcl-2蛋白水平显著升高(P<0.05),P21、Bax蛋白水平显著降低(P<0.05);双荧光素酶报告实验证实miR-148b-3p可靶向结合CDKN1B;与LPS+anti-miR-NC+si-NC组比较,LPS+anti-miR-148b-3p+si-CDKN1B组细胞存活率显著降低(P<0.05),细胞凋亡率显著升高(P<0.05),CyclinD1、Bcl-2蛋白水平显著降低(P<0.05),P21、Bax蛋白水平显著升高(P<0.0 展开更多

关键词 微小RNA-148b-3p 细胞周期蛋白依赖性激酶抑制剂1B 心肌细胞 脂多糖 增殖 凋亡

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miR-148b-3p对施万细胞增殖的影响 被引量：1

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作者 钱天梅 王靖 +1 位作者 周松林 姚淳 《南通大学学报（医学版）》 2015年第6期498-501,共4页

目的 :探讨microRNA-148b-3p(miR-148b-3p)对施万(Schwann)细胞增殖的影响及作用的靶基因。方法 :采用Edu染色法检测miR-148b-3p对原代培养的施万细胞增殖能力的影响;基因芯片及生物信息学分析筛选miR-148b-3p可能作用的靶基因;实时定量... 目的 :探讨microRNA-148b-3p(miR-148b-3p)对施万(Schwann)细胞增殖的影响及作用的靶基因。方法 :采用Edu染色法检测miR-148b-3p对原代培养的施万细胞增殖能力的影响;基因芯片及生物信息学分析筛选miR-148b-3p可能作用的靶基因;实时定量PCR检测施万细胞中过表达miR-148b-3p模拟物后靶基因的表达变化。结果 :miR-148b-3p能明显促进原代培养的施万细胞的增殖,miR-148b-3p过表达可抑制其靶基因Alcam、Cpd、Dedd、Nptx2、Phf20、Ptpn14和Stard 13的表达。结论 :miR-148b-3p有可能通过对增殖相关靶基因的负调控来影响施万细胞的增殖能力,从而促进周围神经损伤修复。 展开更多

关键词 microrna-148b-3p 施万细胞 增殖 周围神经损伤修复

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人胶质瘤细胞中微小RNA-148b-3p对长链非编码RNA HOX转录反义RNA表达的调控作用

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作者 李朝晖 时景伟 +1 位作者 王冠 谭诚 《中华实验外科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2019年第11期2052-2054,共3页

目的观察在人胶质瘤细胞中微小RNA(miRNA,miR)-148b-3p对长链非编码RNA HOX转录反义RNA(HOTAIR)表达的调控作用。方法通过生物信息学可见miR-148b-3p与HOTAIR基因相互配对。生物合成miR-148b-3p mimics、miR-148b-3p inhibitor和阴性对... 目的观察在人胶质瘤细胞中微小RNA(miRNA,miR)-148b-3p对长链非编码RNA HOX转录反义RNA(HOTAIR)表达的调控作用。方法通过生物信息学可见miR-148b-3p与HOTAIR基因相互配对。生物合成miR-148b-3p mimics、miR-148b-3p inhibitor和阴性对照(NC),采用Lipofectamine 2000转染至胶质瘤细胞A172,通过实时定量反转录聚合酶链反应(RT-qPCR)分析miR-148b-3p在人胶质瘤细胞A172中对HOTAIR表达的调控作用。构建HOTAIR基因野生型(WT)和变异型(MUT)荧光素酶载体,利用双荧光素酶报告基因系统检测miR-148b-3p对HOTAIR调控的靶向性。结果RT-qPCR结果显示,NC组HOTAIR mRNA的表达量为1.06±0.15,miR-148b-3p mimics转染A172细胞24、48、72 h后,HOTAIR mRNA的表达量分别为0.79±0.12、0.63±0.18和0.39±0.06。miR-148b-3p inhibitor转染A172细胞24、48、72 h后,HOTAIR mRNA的表达量分别为1.24±0.09、2.70±0.24和3.56±0.18。与NC组比较,miR-148b-3p mimics下调HOTAIR基因的表达(t=2.824、3.102、3.648,P<0.05),miR-148b-3p inhibitor上调HOTAIR基因的表达(t=2.742、3.761、3.928,P<0.05)。双荧光素酶报告基因系统显示,胶质瘤A172细胞中,共转染NC+pmirGLO-WT-HOTAIR、NC+pmirGLO-MUT-HOTAIR、miR-148b-3p mimics+pmirGLO-WT-HOTAIR和miR-148b-3p mimics+pmirGLO-MUT-HOTAIR的荧光素酶活性分别为1.18±0.03、1.23±0.09、0.64±0.02和1.12±0.01。共转染miR-148b-3p mimics+pmirGLO-MUT-HOTAIR的A172细胞与共转染NC和重组载体的A172细胞之间荧光素酶活性差异无统计学意义(t=0.459、0.427,P>0.05)。而共转染miR-148b-3p mimics+pmirGLO-WT-HOTAIR的A172细胞与共转染miR-148b-3p mimics+pmirGLO-MUT-HOTAIR的A172细胞比较,荧光素酶活性明显受到抑制(t=3.362,P<0.05)。结论在胶质瘤细胞中,miR-148b-3p对HOTAIR基因具有直接靶向调控作用,HOTAIR为miR-148b-3p的靶基因。 展开更多

关键词 胶质瘤 长链非编码RNA HOX转录反义RNA 微小RNA-148b-3p

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