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骨髓间充质干细胞诱导分化表达角蛋白的信号机制 被引量:7
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作者 白晓东 付小兵 +1 位作者 张奇 孙同柱 《中华医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2006年第18期1269-1273,共5页
目的探讨大鼠骨髓间充质干细胞(mesenchymalstemcells,MSC)分化为表皮样细胞过程中,相关P38、ERK、Rho等信号机制。方法(1)采用Ficoll Paque淋巴细胞分离液分离扩增大鼠骨髓MSC,免疫细胞化学及流式细胞仪进行表面标志的检测。(2)定向诱... 目的探讨大鼠骨髓间充质干细胞(mesenchymalstemcells,MSC)分化为表皮样细胞过程中,相关P38、ERK、Rho等信号机制。方法(1)采用Ficoll Paque淋巴细胞分离液分离扩增大鼠骨髓MSC,免疫细胞化学及流式细胞仪进行表面标志的检测。(2)定向诱导中磷酸化P38和ERK表达:分为正常对照组、单纯诱导组、Rho阻断组;培养1、3、5、7d后,流式细胞检测磷酸化P38和ERK。(3)SB203580和PD98059对MSC诱导为表皮样细胞的影响:分为对照组、单纯诱导组、p38阻断组(在诱导液基础上加入SB203580),ERK阻断组(在诱导液基础上加入PD98059),诱导7d后分别采用免疫细胞化学和流式细胞仪检测各组细胞细胞角蛋白CK5/8、CK19的阳性表达率。(4)Rho阻断剂HA1077对CK5/8、CK19的影响:设正常对照组、单纯诱导组、RHO阻断组。取培养7d的细胞,流式细胞检测CK5/8、CK19表达。结果(1)大鼠骨髓MSC在体外扩增后,免疫细胞化学及流式细胞仪检测结果显示CD29、CD44表达阳性,CD34、CD45表达阴性。(2)磷酸化P38正常对照水平为0.02%。在诱导组1d(0.01%)、3d(0.01%)变化不大,诱导5d为0.04%,明显升高,7d时(0.01%)复接近诱导前水平;磷酸化ERK对照水平为4.23%,诱导后3d(0.39%)、5d(0.40%)均呈下降趋势,7d时(5.10%)恢复至诱导前水平。RHO阻断组:磷酸化P38水平在1、3、5和7d,分别为1.11%、71.19%、0.25%、6.86%,均升高;ERK磷酸化在1、3、5和7d,分别为6.17%、4.13%、3.97%和0.41%,其中7d低于对照水平。(3)SB203580和PD98059对MSC诱导为表皮样细胞的影响:流式细胞显示诱导7d后CK5/8、CK19阳性率分别为3.01%、6.47%;p38阻断组CK5/8、CK19阳性表达率分别为1.43%、5.41%,低于诱导组。ERK阻断组CK5/8、CK19阳性表达率分别为5.54%、7.56%。(4)HA1077对CK5/8、CK19的影响:单纯诱导组CK5/8阳性率为1.81%,CK19为10.19%;加入HA1077后,CK5/8为21.65%,CK19为39.41%,升高显著。结论P38途径在促进MSC分化为表皮样细胞过程中可能起积极� 展开更多
关键词 干细胞 表皮 信号传递
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骨髓间充质干细胞诱导成骨细胞模拟造血龛支持造血干/祖细胞增殖 被引量:9
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作者 黄晓兵 刘霆 +3 位作者 孟文彤 邓力 智伟 朱焕玲 《中华血液学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2006年第12期795-800,共6页
目的探讨骨髓间充质干细胞(MSC)诱导的成骨细胞复合人源生物衍生骨,构建三维培养体系,观察模拟的造血龛(hematopietic niche)对脐血CD34+造血干/祖细胞(HSPC)增殖的支持作用。方法分选人骨髓MSC及胎儿颅骨成骨细胞,将培养3代的MSC定向... 目的探讨骨髓间充质干细胞(MSC)诱导的成骨细胞复合人源生物衍生骨,构建三维培养体系,观察模拟的造血龛(hematopietic niche)对脐血CD34+造血干/祖细胞(HSPC)增殖的支持作用。方法分选人骨髓MSC及胎儿颅骨成骨细胞,将培养3代的MSC定向诱导为成骨细胞,分别将①MSC、②颅骨成骨细胞、③MSC与成骨细胞混合物(比例为1:2)及④MSC诱导的成骨细胞作为饲养细胞复合在人源生物衍生骨上,构建三维培养体系,同时用相应的饲养细胞层构建对应的二维培养体系。免疫磁珠分选脐血CD34+细胞,接种于各培养体系,无外源性细胞因子条件下进行培养。显微镜下观察各饲养细胞与人源生物衍生骨复合情况,通过流式细胞术、半固体细胞集落培养观察比较各培养体系支持HSPC的增殖能力。结果倒置相差显微镜、扫描电子显微镜以及免疫荧光标记观察结果显示,已成功地将MSC、颅骨成骨细胞、MSC和成骨细胞混合物及MSC诱导的成骨细胞复合在人源生物衍生骨上,构建了造血干细胞三维培养体系。在无外源细胞因子作用下,脐血HSPC培养2周造血祖细胞集落(CFU-C)与长期培养起始细胞(LTC-IC)分析,三维培养体系各组(①~④)CFU-C明显多于相应二维培养体系各组(①681.00±44.43比438.20±64.24;②729.80±37.72比536.60±35.31;③697.80±54.09比464.80±41.53;④740.20±47.66比513.40±65.56),P<0.05,但三维培养体系各组间差异无统计学意义(P>0.05)。三维培养体系各组LTC-IC也明显高于相应二维培养体系(分别为①68.00±5.11比26.00±3.73;②93.00±6.12比38.60±4.93;③83.40±5.85比36.20±4.52;④126.00±11.89比59.40±4.25),P<0.05,且三维培养体系中MSC诱导的成骨细胞组(④)LTC-IC明显多于其他各组。脐血HSPC培养5周,二维培养体系中饲养细胞层已逐渐崩解、脱落、死亡;而三维培养体系中饲养细胞层生 展开更多
关键词 成骨细胞 造血龛 骨髓间充质干细胞 生物衍生骨
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犬脱钙骨基质复合骨髓间充质干细胞的体外培养 被引量:7
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作者 陈立强 李宁毅 +3 位作者 袁荣涛 孙健 金晓明 刘斌钰 《上海口腔医学》 CAS CSCD 2007年第3期255-258,共4页
目的:制备犬脱钙骨基质(demineralized bone matrix,DBM),研究DBM作为骨组织工程支架材料的可行性。方法:杂种犬的股骨行脱脂、脱钙、脱非胶原蛋白、冷冻干燥、灭菌制成DBM,与骨髓间充质干细胞(mesenchymal stemcells,MSCs)复合,应用倒... 目的:制备犬脱钙骨基质(demineralized bone matrix,DBM),研究DBM作为骨组织工程支架材料的可行性。方法:杂种犬的股骨行脱脂、脱钙、脱非胶原蛋白、冷冻干燥、灭菌制成DBM,与骨髓间充质干细胞(mesenchymal stemcells,MSCs)复合,应用倒置相差显微镜、扫描电镜观察脱钙骨基质的结构及细胞在材料表面的生长情况。结果:犬脱钙骨基质具有三维立体网孔结构,平均孔隙直径为(254.39±88.71)μm,孔隙率约为70%。与MSCs复合培养后,细胞黏附其上,上架率高,生长状态良好,增殖迅速,并分泌大量细胞外基质。结论:DBM具有良好的生物相容性。 展开更多
关键词 骨髓间充质干细胞 脱钙骨基质 组织工程
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BMP/Smad信号途径相关基因在5-HMF诱导骨髓间充质干细胞成骨分化中表达 被引量:6
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作者 张贤 朱丽华 +4 位作者 程盛 雍坤 胡国鹏 钱晓伟 谭湘陵 《江苏医药》 CAS 2016年第1期1-3,共3页
目的研究5-羟甲基-2-糠醛(5-HMF)诱导大鼠骨髓间充质干细胞(BMSCs)成骨分化时骨形成蛋白(BMP)/Smads信号途径相关基因的表达变化。方法体外培养大鼠BMSCs,用5-HMF10μmol/L诱导BMSCs成骨分化0、10、24、48h(诱导早期)和7d(诱导晚期)。... 目的研究5-羟甲基-2-糠醛(5-HMF)诱导大鼠骨髓间充质干细胞(BMSCs)成骨分化时骨形成蛋白(BMP)/Smads信号途径相关基因的表达变化。方法体外培养大鼠BMSCs,用5-HMF10μmol/L诱导BMSCs成骨分化0、10、24、48h(诱导早期)和7d(诱导晚期)。采用荧光定量PCR检测BMP2、骨形成蛋白受体1A(BMPR1A)、BMPR1B、BMPR2、Smad1、Smad4、Smad5、Smad9、Osx和Runx2的表达。结果与0h组相比,诱导早期的BMPR1A、BMPR1B、Smad1、Smad4、Smad5表达均未发生明显变化(P>0.05),BMP2、Smad9和Runx2表达下降(P<0.01),BMPR2和Osx表达升高(P<0.05或P<0.01);而诱导晚期的BMP2、BMPR1A、Smad1、Smad4、Smad5、Smad9和Runx2均急剧升高(P<0.01),BMPR1B表达降低(P<0.01)。结论 BMP/Smad信号途径介导了5-HMF诱导BMSCs成骨分化的过程;其基因表达变化主要发生在诱导48h之后。 展开更多
关键词 5-羟甲基-2-糠醛 骨髓间充质干细胞 骨形成蛋白/Smad信号途径
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牙齿再生——梦想与现实 被引量:5
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作者 王松灵 王学玖 《华西口腔医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2008年第2期115-117,共3页
牙齿及牙列缺失在临床上很常见,目前的修复方法均为非生物性的,尚不能满足人们的要求。实现真牙再生一直是一个梦想。牙齿再生分为全牙再生和部分牙齿再生,前者目前尚存在相当大的困难,但后者已有可喜进展,已在小鼠及大型动物小型猪上... 牙齿及牙列缺失在临床上很常见,目前的修复方法均为非生物性的,尚不能满足人们的要求。实现真牙再生一直是一个梦想。牙齿再生分为全牙再生和部分牙齿再生,前者目前尚存在相当大的困难,但后者已有可喜进展,已在小鼠及大型动物小型猪上成功再生出生物牙根,有望成为全牙再生成功前良好的过渡。研究表明骨髓中部分细胞在一定条件下可以直接分化为成釉上皮样细胞及成牙本质细胞,有望成为牙齿再生的间充质来源的种子细胞。 展开更多
关键词 牙齿再生 牙根再生 骨髓间充质干细胞 成釉上皮细胞
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自体脑脊液定向诱导骨髓间充质干细胞分化为神经干细胞 被引量:3
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作者 颜连启 李小磊 +7 位作者 孙钰 王静成 高巨 王强 胡翰生 卢志华 卢耀甲 叶英 《江苏医药》 CAS 北大核心 2013年第6期645-647,共3页
目的探讨自体脑脊液定向诱导骨髓间充质干细胞分化为神经干细胞的可行性。方法采用自体脑脊液为诱导剂,体外诱导骨髓源性间充质干细胞。从形态学、免疫组化法、反转录聚合酶链反应(RT-PCR)方法对诱导后细胞进行鉴定。结果自体脑脊液诱... 目的探讨自体脑脊液定向诱导骨髓间充质干细胞分化为神经干细胞的可行性。方法采用自体脑脊液为诱导剂,体外诱导骨髓源性间充质干细胞。从形态学、免疫组化法、反转录聚合酶链反应(RT-PCR)方法对诱导后细胞进行鉴定。结果自体脑脊液诱导后的间充质干细胞呈现神经干细胞改变,可分化为神经元、星形胶质细胞和少突胶质细胞,并表现相应的特征结构和生物学特性。结论自体脑脊液能定向诱导骨髓间充质干细胞向神经样细胞转化。 展开更多
关键词 骨髓间充质干细胞 脑脊液
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不同形式运动对胰岛素抵抗小鼠骨髓间充质干细胞向成骨细胞分化能力的影响研究 被引量:3
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作者 吴伟 雷乐 +2 位作者 杨亚南 赵一龙 张玲莉 《中国糖尿病杂志》 CAS CSCD 北大核心 2018年第4期326-331,共6页
目的探讨在T2DM的发生发展中胰岛素和运动对成骨细胞的影响。方法选取40只6周龄雄性C57BL/6小鼠为研究对象,按体重分为正常对照组(NC,n=10)和高脂组(HF,n=30),高脂饲料喂养12周构建IR模型。建模成功后,HF组按体重分为IR组(n=9)、IR+跑台... 目的探讨在T2DM的发生发展中胰岛素和运动对成骨细胞的影响。方法选取40只6周龄雄性C57BL/6小鼠为研究对象,按体重分为正常对照组(NC,n=10)和高脂组(HF,n=30),高脂饲料喂养12周构建IR模型。建模成功后,HF组按体重分为IR组(n=9)、IR+跑台组(IR+RT,n=10)和IR+爬梯组(IR+LS,n=10),随后进行为期12周的运动干预。提取小鼠右腿胫骨骨髓间充质干细胞(BMSC)进行体外培养,菌落形成单位(CFU)法检测其增殖情况;RT-PCR检测BMSC中碱性磷酸酶(ALP)、锌指结构转录因子(Osterix)、激活转录因子4(ATF4)、骨钙素(OCN)、骨桥蛋白(OPN)、Runt相关转录因子2(Runx2)、CCAAT/增强子结合蛋白(CEBP)和核因子κB受体活化因子配体(RANKL)mRNA的表达。结果 CFU实验结果显示,IR+RT组六孔板的成骨细胞数目最多。BMSC中基因检测发现,与NC组比较,IR+RT组ALP、Osterix、OCN、OPN mRNA表达上调(P<0.05),IR+LS组Osterix和OCN mRNA(P<0.05)、OPN mRNA(P<0.01)表达上调;与IR组比较,IR+RT组和IR+LS组OCN mRNA表达上调(P<0.05);与IR+RT组比较,IR+LS组ATF4 mRNA表达上调(P<0.05)。结论有氧运动和负重运动均可改善IR小鼠BMSC向成骨细胞分化的能力,在分化早期阶段有氧运动的影响更显著。 展开更多
关键词 胰岛素抵抗 骨髓间充质干细胞 成骨细胞 运动
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5-氮杂胞苷诱导脐带间充质干细胞向成肌细胞分化研究 被引量:3
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作者 蓝建发 罗新 +2 位作者 宋泓 石海燕 郭红宇 《中国实用妇科与产科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2013年第6期450-453,共4页
目的探讨人脐带间充质干细胞(human umbilical cord mesenchymal stem cells,HuMSCs)向成肌细胞分化。方法贴壁法分离HuMSCs;流式细胞仪分析其表面抗原;透射电镜及原子力电镜观察细胞超微结构;5-氮杂胞苷诱导细胞向成肌细胞分化;逆转录... 目的探讨人脐带间充质干细胞(human umbilical cord mesenchymal stem cells,HuMSCs)向成肌细胞分化。方法贴壁法分离HuMSCs;流式细胞仪分析其表面抗原;透射电镜及原子力电镜观察细胞超微结构;5-氮杂胞苷诱导细胞向成肌细胞分化;逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)检测成肌细胞特异基因结蛋白(desmin)和重链肌球蛋白(myosin heavy chain,MHC)表达;蛋白质印迹法(Western Blot)检测特异蛋白desmin和MHC表达。结果贴壁法稳定从脐带分离出细胞;HuMSCs不表达CD31、CD34、CD45,强表达CD29、CD90、CD44、CD105,极低表达HLA-DR、CD40;5-氮杂胞苷诱导后干细胞表达成肌细胞特异基因及蛋白明显高于对照组。结论贴壁法分离HuMSCs可靠、纯度高;5-氮杂胞苷可诱导HuMSCs向成肌细胞分化。 展开更多
关键词 脐带间质干细胞 结蛋白 重链肌球蛋白 5-氮杂胞苷
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抑制骨髓间充质干细胞成脂分化能力对骨质疏松早期疗效的实验研究 被引量:1
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作者 周彪 安奇君 刘强 《中国当代医药》 2015年第27期14-16,共3页
目的探讨抑制骨髓间充质干细胞(BMSCs)成脂分化能力对骨质疏松(OP)的早期疗效。方法选取雌性SD大鼠40只,采用背侧入路摘除卵巢法建立大鼠OP模型。随机分为4组:A组(假手术组)、B组(模型组)、C组(BMSCs治疗组)、D组(RNAi转染BMSCs治疗组)... 目的探讨抑制骨髓间充质干细胞(BMSCs)成脂分化能力对骨质疏松(OP)的早期疗效。方法选取雌性SD大鼠40只,采用背侧入路摘除卵巢法建立大鼠OP模型。随机分为4组:A组(假手术组)、B组(模型组)、C组(BMSCs治疗组)、D组(RNAi转染BMSCs治疗组),每组10只。造模后7 d经尾静脉分别注射生理盐水、10%胎牛血清的LG-DMEM培养液、BMSCs、RNAi转染BMSCs,BMSCs来自课题组从SD大鼠骨髓中提取并经过流式细胞仪和诱导分化染色鉴定的BMSCs,RNAi转染BMSCs来自课题组前一部分体外实验中使用腺病毒转染后的BMSCs。干预后,依照分组行骨密度(BMD)、骨转换标志物检测。比较4组大鼠的骨转换标志物在OP早期骨形成与骨吸收过程中的变化。结果 D组的BMD显著高于B、C组(P<0.05),而与A组差异无统计学意义(P>0.05);D组的PⅠNP高于B、C组(P<0.05),而与A组差异无统计学意义(P>0.05);D组的β-CTX低于B、C组(P<0.05),而与A组差异无统计学意义(P>0.05)。结论 RNAi转染BMSCs可提高去势大鼠的BMD,促进骨形成。 展开更多
关键词 RNA干预 骨髓间充质干细胞 骨质疏松 骨密度 Ⅰ型前胶原氨基端前肽 β-Ⅰ型胶原羧基端肽
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活体示踪BMSCs在大鼠癫痫模型中的可行性研究
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作者 龙乾发 刘卫平 +3 位作者 高建忠 罗强 黑悦 伊西才 《中华神经外科疾病研究杂志》 CAS 2017年第2期115-119,共5页
目的探索活体示踪骨髓间充质干细胞(BMSCs)在大鼠癫痫模型中的可行性。方法体外分离纯化SD大鼠BMSCs,超微超顺磁性氧化铁(USPIO)纳米颗粒标记,而后诱导大鼠癫痫模型并接受USPIO标记的BMSCs(U-BMSCs)移植,进而通过MRI检测U-BMSCs体内外影... 目的探索活体示踪骨髓间充质干细胞(BMSCs)在大鼠癫痫模型中的可行性。方法体外分离纯化SD大鼠BMSCs,超微超顺磁性氧化铁(USPIO)纳米颗粒标记,而后诱导大鼠癫痫模型并接受USPIO标记的BMSCs(U-BMSCs)移植,进而通过MRI检测U-BMSCs体内外影像,示踪UBMSCs在癫痫模型中的分布,最后通过免疫组化验证USPIO标记对BMSCs抑制癫痫海马神经元损失的影响。结果 USPIO体外标记BMSCs的效率为99.2%±1.24%,体内外MRI T2W2显示U-BMSCs为可与脑实质区别明显的低信号影像。细胞移植两周后发现U-BMSCs低信号影像可分布于癫痫模型脑实质包括海马,免疫组化结果示U-BMSCs移植组海马CA1和齿状回门区(DH)神经元数量明显多于PBS组(P<0.05),且与BMSCs移植组无明显区别(P>0.05)。结论 USPIO标记BMSCs可依赖MRI检测实现其在大鼠癫痫模型中的活体示踪且不影响其神经保护功能。 展开更多
关键词 超微超顺磁性氧化铁 骨髓间充质干细胞 癫痫 神经保护
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