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调控Hippo信号通路对间充质干细胞氧化应激耐受能力的影响
1
作者 董亮 李朗 +5 位作者 惠姣洁 高飞 王秋卉 杨岚 张江茜 严洁 《中国急救医学》 CAS CSCD 北大核心 2018年第5期414-420,I0001,共8页
目的 探讨调控Hippo信号通路对小鼠骨髓来源间充质干细胞（mMSCs）氧化应激耐受能力的影响.方法 直接贴壁法分离C57BL/6小鼠原代mMSCs,通过流式细胞学检测和诱导其成骨、成软骨、成脂分化进行鉴定,采用非接触共培养诱导其向ATⅡ细胞分化... 目的 探讨调控Hippo信号通路对小鼠骨髓来源间充质干细胞（mMSCs）氧化应激耐受能力的影响.方法 直接贴壁法分离C57BL/6小鼠原代mMSCs,通过流式细胞学检测和诱导其成骨、成软骨、成脂分化进行鉴定,采用非接触共培养诱导其向ATⅡ细胞分化;通过2-脱氧-D-葡萄糖（2-DG）及XMU-MP-1调节Hippo信号通路,根据不同浓度的双氧水（H2O2）共培养来模拟氧化应激损伤.应用MTT法评估H2O2诱导氧化应激损伤对mMSCs存活的影响;Western blot法检测mMSCs中Hippo信号通路关键组分,评估H2O2诱导氧化应激损伤对Hippo信号通路的影响;同时应用Western blot法检测凋亡相关蛋白Bax及Bcl-2的表达,评估Hippo信号通路调控mMSCs氧化应激耐受能力的机制.结果 2-DG呈浓度依赖性的激活Hippo信号通路,而通过XMU-MP-1可抑制Hippo信号通路活化.H2O2能导致mMSCs损伤和抑制其Hippo信号通路的活性,凋亡相关蛋白Bcl-2/Bax表达比例下调是导致mMSCs损伤的可能机制;而活化Hippo信号通路能通过上调Bcl-2/Bax表达比例,增强mMSCs氧化应激耐受能力;通过抑制Hippo信号通路下调Bcl-2/Bax表达比例,减弱mMSCs氧化应激耐受和存活能力.结论 Hippo信号通路可通过调控凋亡相关蛋白Bcl-2/Bax表达比例,影响mMSCs的存活和氧化应激耐受能力. 展开更多
关键词 Hippo信号通路 间充质干细胞(mmscs) 氧化应激耐受 凋亡相关蛋白 BCL-2/BAX
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骨髓间充质干细胞来源类肝细胞的功能和超微结构评估 被引量：5
2
作者 何念海 赵文利 王宇明 《中华传染病杂志》 CAS CSCD 北大核心 2004年第6期372-376,共5页
目的　对骨髓间充质干细胞 (MMSCs)来源的类肝细胞进行功能和超微结构评估。方法　从人胎儿骨髓中分离MMSCs ,在 1%基质胶 (Matrigel)作基质 ,2 .5 μmol/ml氮胞苷 (AZA)预处理10～ 12h ,肝细胞生长因子 (HGF) 10ng/ml+成纤维细胞生长因... 目的　对骨髓间充质干细胞 (MMSCs)来源的类肝细胞进行功能和超微结构评估。方法　从人胎儿骨髓中分离MMSCs ,在 1%基质胶 (Matrigel)作基质 ,2 .5 μmol/ml氮胞苷 (AZA)预处理10～ 12h ,肝细胞生长因子 (HGF) 10ng/ml+成纤维细胞生长因子 4 (FGF4 ) 10ng/ml+肝细胞生长培养基 (HGM )中培养和诱导。以未诱导的MMSCs作对照 ,对诱导 4d、7d、14d、2 1d、2 8dMMSCs采用酶联免疫吸附法 (ELISA)检测培养上清液中人白蛋白 (ALB)水平 ,脲酶法检测合成尿素的能力 ,过碘酸希夫试验进行糖原染色 ,电镜观察细胞超微结构。结果　在分化过程的不同时相点检测ALB和尿素生成 ,未诱导分化的MMSCs没有分泌ALB和产生尿素 ,而给予FGF4和HGF处理后 ,MMSCs以时间依赖方式产生ALB和尿素。用过碘酸希夫 (PAS)染色法分析发现MMSCs诱导 14d时首先见到部分细胞出现红紫色染色的糖原积聚物 ,2 8d后阳性染色细胞数量增多 ,提示诱导后MMSCs已具备肝细胞的糖原合成能力。电镜显示未诱导MMSCs具有幼稚细胞的结构特点。诱导 2 8d的MM SCs已分化 ,并具有上皮样细胞的极性结构特点。结论　诱导后MMSCs已具备肝细胞特有的结构和功能性特征。 展开更多
关键词 诱导 肝细胞 ALB 糖原 超微结构 HGF 骨髓 提示 来源 对照
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人胎儿骨髓间充质干细胞体外分离培养及诱导分化为类肝细胞 被引量：3
3
作者 何念海 赵文利 王宇明 《重庆医学》 CAS CSCD 2006年第21期1923-1928,共6页
目的 建立人胎儿骨髓间充质干细胞（marrow mesenchymal stem cells，MMSCs）的体外分离、培养方法．体外诱导分化MMSCs为类肝细胞，观察MMSCs细胞生物学特性，并对类肝细胞进行分子生物学及功能鉴定。方法 采用体外细胞培养技术，分离... 目的 建立人胎儿骨髓间充质干细胞（marrow mesenchymal stem cells，MMSCs）的体外分离、培养方法．体外诱导分化MMSCs为类肝细胞，观察MMSCs细胞生物学特性，并对类肝细胞进行分子生物学及功能鉴定。方法 采用体外细胞培养技术，分离培养人胎儿MMSCs，在1％Matrigel做基质，2．5gmol／inlAZA预处理10～12h，HGF10ng／ml＋FGF410ng／ml＋HGM培养基中诱导。用显微摄像和MTT研究细胞增殖及生长特征，用流式细胞仪、免疫组织化学和RT—PCR鉴定细胞表型。采用ELISA法检测培养上清中人清蛋白水平。结果 24h换液后可获得约（300±80）个贴壁细胞；培养细胞在种植后1～3d为生长滞留期，第4天达到对数生长期，以后进入到平台期，细胞分裂指数曲线的趋势与生长曲线类似。连续传10代后．每个胎儿来源的MMSCs可扩增达10^11～10^12个细胞。MMSCs表型为CD166阳性，CD34阴性。在添加FGF4和HGF的Matrigel上诱导培养的MMSCs在21～28d时，细胞形态由长梭形变为三角形、多角形或类圆形。细胞转圆率为40％～50％，双核细胞比率5％～7％。免疫组化和RT—PCR检测显示未诱导培养的MMSCs中，有较少的细胞表达AFP及其mRNA，未见其他肝脏特有的转录因子或者胞浆蛋白标志。诱导早期可见较多细胞表达GATA4、AFP和CK19及其mRNA，至诱导后期表达下降，而ALB、CK18、GST-Ⅱ和肝细胞转录因子HNF1d表达逐渐上升。ALB、CK18阳性细胞比例达61％～65％。未诱导分化的MMSCs没有分泌ALB，诱导分化的MMSCs以时间依赖方式产生清蛋白。结论 人胎儿MMSCs分离成分单纯，增生旺盛。诱导培养可获得高比例的类肝细胞。MMSCs向类肝细胞的横向分化是先分化为肝前体细胞，再分化为成熟肝细胞，在本实验诱导奈件下可获得在复制及翻译各环节肝细胞标志阳性的类肝细胞。诱导后MMSCs已具备肝细胞特有的功能性特征。 展开更多
关键词 间充质干细胞 类肝细胞 细胞分化 横向分化
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CCL20重组慢病毒对小鼠肿瘤生长的影响
4
作者 李红霞 陈平 +4 位作者 王炼 徐健蓉 王国庆 贾永前 杨莉 《四川大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2006年第5期712-716,共5页
目的通过CCL20重组慢病毒整合的间充质干细胞,观察肿瘤原位高表达CCL20能否激发机体的抗肿瘤免疫。方法构建小鼠CCL20重组慢病毒lenti-mCCL20,体外转导BALB/c小鼠间充质干细胞(mMSCs),杀稻瘟素(blasticidin)筛选出稳定表达mCCL20的混合... 目的通过CCL20重组慢病毒整合的间充质干细胞,观察肿瘤原位高表达CCL20能否激发机体的抗肿瘤免疫。方法构建小鼠CCL20重组慢病毒lenti-mCCL20,体外转导BALB/c小鼠间充质干细胞(mMSCs),杀稻瘟素(blasticidin)筛选出稳定表达mCCL20的混合克隆,命名为lenti-mCCL20-mMSCs,与CT26混合后皮下接种至同系BALB/c小鼠,设lenti-null-mMSCs与CT26混合接种、mMSCs与CT26混合接种、CT26单独接种为对照,观察肿瘤生长情况。结果构建了重组慢病毒lenti-mCCL20,体外转导BALB/c小鼠MSCs,获得lenti-mCCL20-mMSCs,动物实验发现CCL20瘤内表达增加肿瘤内淋巴细胞的浸润,但促进肿瘤生长。结论CCL20瘤内表达增加肿瘤内淋巴细胞的浸润,促进肿瘤生长,机制有待进一步研究。 展开更多
关键词 趋化因子CCL20 重组慢病毒 小鼠间充质干细胞(mMSC) 瘤内淋巴细胞浸润
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