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HeLa细胞中miRNA-214靶基因Mek3的确定
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作者 杨作臻 陈双 +3 位作者 栾雪晶 刘民 李欣 汤华 《医学分子生物学杂志》 CAS CSCD 2009年第3期248-251,共4页
目的探索miRNA-214在HeLa细胞中的与其靶基因Mek3相互作用。方法通过miRNA靶基因预测网站寻找可能与miRNA-214相互作用的靶基因，合成miRNA-214和对照序列，将miRNA-214、对照序列、Mek3的3’非翻译区（3’UTR）以及突变的Mek3 3’UTR... 目的探索miRNA-214在HeLa细胞中的与其靶基因Mek3相互作用。方法通过miRNA靶基因预测网站寻找可能与miRNA-214相互作用的靶基因，合成miRNA-214和对照序列，将miRNA-214、对照序列、Mek3的3’非翻译区（3’UTR）以及突变的Mek3 3’UTR分别克隆到表达载体上，转染HeLa细胞，转染48h后提取蛋白，检测绿色荧光蛋白的表达水平；HeLa细胞转染miRNA-214后，Trizol抽提RNA，通过荧光定量PCR检测Mek3mRNA的表达水平；Western印迹检Mek3的蛋白表达水平。经过以上实验从mRNA和蛋白水平上验证了在HeLa细胞中miRNA-214对靶基因Mek3的作用效应。结果生物信息学方法显示miRNA-214和Mek3存在可能的结合位点。经过实验验证了miRNA-214可以下调Mek3的mRNA和蛋白水平。结论miRNA-214可以负调节靶基因Mek3的表达。 展开更多
关键词 miRNA-214 mek3基因 HELA细胞 靶基因
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