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云斑尖塘鳢肿大细胞病毒属虹彩病毒的分离与鉴定 被引量:14
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作者 王庆 曾伟伟 +5 位作者 刘春 李凯彬 常藕琴 潘加雄 石存斌 吴淑勤 《水生生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2010年第6期1150-1156,共7页
2009年10月,广东顺德地区一云斑尖塘鳢养殖场暴发不明病因疾病,发病尖塘鳢体长15—18 cm不等,死亡率约85%,濒死尖塘鳢从池塘底层游至水面,呈现游动失衡状态直至死亡。死亡尖塘鳢腹部膨大,剖检可见肝脏、脾脏、肾脏肿大,有出血斑点,从内... 2009年10月,广东顺德地区一云斑尖塘鳢养殖场暴发不明病因疾病,发病尖塘鳢体长15—18 cm不等,死亡率约85%,濒死尖塘鳢从池塘底层游至水面,呈现游动失衡状态直至死亡。死亡尖塘鳢腹部膨大,剖检可见肝脏、脾脏、肾脏肿大,有出血斑点,从内脏器官肝脏、脾脏和肾脏未分离到致病菌。病鱼内脏组织研磨过滤除菌后,腹腔注射20尾尖塘鳢,7d后开始出现死亡,10d后全部死亡,对照组无死亡。自然发病鱼和人工感染鱼的病理切片显示肝脏、脾脏和肾脏出现大量肿大细胞,超薄切片经电子显微镜观察,肝脏、脾脏和肾脏观察到大量病毒颗粒。电镜下病毒呈六边形,直径约135 nm,形态与虹彩病毒相似。针对虹彩病毒主衣壳蛋白(Major capsid protein,MCP)序列设计引物,提取自然发病鱼和人工感染鱼的DNA作为模板,均能扩增出预期大小的特异性产物。利用NCBI的Blast搜索,结果显示扩增序列与肿大细胞病毒属的传染性脾肾坏死病毒(ISKNV)、闪电丽鱼虹彩病毒(DGIV)和条石鲷虹彩病毒(RBIV)MCP核苷酸序列同源性分别为98.8%、98.1%和94.7%。利用MCP序列构建的系统发育树显示,导致云斑尖塘鳢发病死亡的病毒为肿大细胞病毒属虹彩病毒,暂命名云斑尖塘鳢虹彩病毒(MSGIV)。 展开更多
关键词 云斑尖塘鳢 虹彩病毒 肿大细胞病毒 MCP
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大口黑鲈虹彩病毒双重PCR检测方法的建立 被引量:13
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作者 王庆 曾伟伟 +3 位作者 刘春 马冬梅 石存斌 吴淑勤 《华中农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2013年第4期106-110,共5页
为同时检测患病大口黑鲈中不同属虹彩病毒感染和带毒情况,针对蛙病毒属和肿大细胞病毒属大口黑鲈虹彩病毒主衣壳蛋白(major capsid protein,MCP)基因的序列,分别设计1对特异性引物Rana-mcp F/R和Mega-mcp F/R,扩增产物片段大小分别为475... 为同时检测患病大口黑鲈中不同属虹彩病毒感染和带毒情况,针对蛙病毒属和肿大细胞病毒属大口黑鲈虹彩病毒主衣壳蛋白(major capsid protein,MCP)基因的序列,分别设计1对特异性引物Rana-mcp F/R和Mega-mcp F/R,扩增产物片段大小分别为475 bp和262 bp。通过PCR反应体系的优化、反应的特异性和灵敏度试验,建立一种可以同时检测大口黑鲈蛙病毒属和肿大细胞病毒属虹彩病毒感染的双重PCR检测方法,最低DNA检测量分别为6.5 pg和14.5 pg。用此方法,对临床获得的15个大口黑鲈样品进行双重PCR检测和序列测定,获得5个蛙病毒属和1个肿大细胞病毒属虹彩病毒检测阳性结果。本研究中建立的基于MCP基因的大口黑鲈虹彩病毒双重PCR检测方法,可用于养殖大口黑鲈虹彩病毒病快速鉴别诊断和分子流行病学调查。 展开更多
关键词 大口黑鲈 虹彩病毒 蛙病毒属 肿大细胞病毒属 虹彩病毒主衣壳蛋白基因 双重PCR
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鱼类细胞肿大虹彩病毒病研究进展 被引量:11
3
作者 吴成龙 孔晓瑜 史成银 《动物医学进展》 CSCD 2007年第3期70-74,共5页
鱼类细胞肿大虹彩病毒病在东亚和东南亚的真鲷、石斑鱼、大菱鲆、大黄鱼、鳜鱼等多种养殖鱼类中的频繁流行,致使感染鱼类出现大面积死亡,已成为危害养殖鱼类最严重的病毒病之一。文章综述了近年来鱼类细胞肿大虹彩病毒病的研究现状,重... 鱼类细胞肿大虹彩病毒病在东亚和东南亚的真鲷、石斑鱼、大菱鲆、大黄鱼、鳜鱼等多种养殖鱼类中的频繁流行,致使感染鱼类出现大面积死亡,已成为危害养殖鱼类最严重的病毒病之一。文章综述了近年来鱼类细胞肿大虹彩病毒病的研究现状,重点介绍了该类疾病的流行病学、临床症状、组织病理学、分子生物学检测技术、病毒的传播途径、致病机制以及病毒的免疫防控等方面的研究进展,并对当前鱼类细胞肿大虹彩病毒研究中存在的问题进行了分析和展望。 展开更多
关键词 细胞肿大病毒 虹彩病毒
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褐篮子鱼虹彩病毒病的诊断 被引量:9
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作者 雷燕 戚瑞荣 +3 位作者 唐绍林 肖洋 马家好 王雪鹏 《大连海洋大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2014年第3期236-240,共5页
对福建省东山县每年6—10月网箱养殖褐篮子鱼Siganus fuscescens暴发的不明原因疾病(死亡率达80%)进行了研究。濒死褐篮子鱼从网箱底层游至水面,主要症状是体色发黑,开始游动快,之后变慢,最后呈现游动失衡状态直至死亡。解剖可见脾脏和... 对福建省东山县每年6—10月网箱养殖褐篮子鱼Siganus fuscescens暴发的不明原因疾病(死亡率达80%)进行了研究。濒死褐篮子鱼从网箱底层游至水面,主要症状是体色发黑,开始游动快,之后变慢,最后呈现游动失衡状态直至死亡。解剖可见脾脏和肾脏肿大、出血,胃肠空虚,肠道发红。通过对流行病学调查发现,该病具有明显的传染性,从病鱼肝脏、脾脏和肾脏中未分离到致病菌,也未检测到大量寄生虫。对病鱼组织病理切片观察,其肝脏、脾脏和肾脏出现大量肿大细胞。参考OIE设计虹彩病毒的检测引物,以从自然发病鱼的各种组织提取的DNA作为模板,检测结果显示,病鱼的各种组织均能扩增出与预期大小片段相符的特异性产物。经过克隆测序比对显示,扩增条带的基因序列与肿大细胞病毒属的真鲷虹彩病毒(RSIV)、石斑鱼虹彩病毒(GIV)和传染性脾肾坏死病毒(ISKNV)核苷酸序列同源性分别为98.6%、97.4%和93.2%。利用MCP序列构建系统发育树,结果显示,导致褐篮子鱼发病死亡的病毒为肿大细胞病毒属的虹彩病毒,暂命名为褐篮子鱼虹彩病毒(SFIV)。 展开更多
关键词 褐篮子鱼 虹彩病毒 诊断 肿大细胞病毒 组织病理变化
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尖吻鲈Lates calcarifer虹彩病毒病的诊断 被引量:8
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作者 文琳 雷燕 +2 位作者 戚瑞荣 肖洋 王雪鹏 《水产学杂志》 CAS 2015年第4期28-32,共5页
对广东珠海一养殖池塘中尖吻鲈Lates calcarifer的发病情况进行了调查。调查发现,病鱼体色发黑,剖检可见鳃充血发紫;空肠空胃,肠道微红,脾和肾肿大,有出血点,胆囊充盈,有胆汁渗出,肾发黑,有出血点,其他组织器官无明显变化。从病鱼的鳃... 对广东珠海一养殖池塘中尖吻鲈Lates calcarifer的发病情况进行了调查。调查发现,病鱼体色发黑,剖检可见鳃充血发紫;空肠空胃,肠道微红,脾和肾肿大,有出血点,胆囊充盈,有胆汁渗出,肾发黑,有出血点,其他组织器官无明显变化。从病鱼的鳃、肝、肾、肌肉、肠道,和血液中未检查到寄生虫,从肝、脾和肾中未分离到致病菌。参考世界动物卫生组织(Office International des Epi-zooties,OIE)设计引物,提取自然发病鱼各种组织的DNA作为模板,扩增出了预期大小的特异性产物。测序比对显示,扩增的条带的基因序列与真鲷虹彩病毒(Red sea bream iridovirus,RSIV)的基因序列同源性高达98.6%。病理切片显示:肝和脾出现肿大细胞。因此,引起尖吻鲈发病死亡的原因是肿大细胞病毒属虹彩病毒感染。 展开更多
关键词 尖吻鲈 虹彩病毒 诊断 肿大细胞病毒 组织病理变化
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一株大黄鱼虹彩病毒的分离鉴定及多克隆抗体的制备 被引量:1
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作者 刘笑茹 郑义华 +5 位作者 赵路品 高娃 祁婧婷 吕利群 胡鲲 姜有声 《水产学杂志》 CAS 2024年第2期39-45,共7页
2021年7月,浙江省象山某养殖场养殖的大黄鱼(Larimichthys crocea)出现类似大黄鱼虹彩病毒引起的疾病。采用鲤上皮瘤细胞培养和病毒主要衣壳蛋白测序分析的方法,从患病的大黄鱼中分离到一株病毒。该病毒接种到鲤上皮瘤细胞(EPC)后出现... 2021年7月,浙江省象山某养殖场养殖的大黄鱼(Larimichthys crocea)出现类似大黄鱼虹彩病毒引起的疾病。采用鲤上皮瘤细胞培养和病毒主要衣壳蛋白测序分析的方法,从患病的大黄鱼中分离到一株病毒。该病毒接种到鲤上皮瘤细胞(EPC)后出现空斑、脱落的细胞病变症状。根据虹彩病毒MCP和ATPase基因保守序列设计特异性引物对病毒组织样本进行PCR扩增,得到分别为1 367 bp和740 bp的目的基因片段。将MCP基因扩增片段测序,经BLAST对比及系统发育树聚类分析,确定该分离的病毒属虹彩病毒科细胞肿大病毒属。通过蔗糖密度梯度离心纯化,用透射电镜观察该病毒粒子呈正六边形,直径为120~150 nm。用纯化病毒作为抗原免疫小鼠获得抗大黄鱼虹彩病毒的多克隆抗体,效价为1∶7 000;通过SDS-PAGE和Western blotting初步确定3个免疫蛋白。本研究为大黄鱼虹彩病毒纯化提供一种新方法,并初步分离出免疫蛋白,为该病毒相关分子生物学研究、蛋白研究以及疫苗制备等提供理论依据。 展开更多
关键词 大黄鱼 虹彩病毒 细胞肿大病毒 分离鉴定 病毒纯化 多克隆抗体
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大口黑鲈重要病原三重PCR检测方法的建立 被引量:1
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作者 林而舒 《福建农林大学学报(自然科学版)》 CAS CSCD 北大核心 2024年第4期517-521,共5页
【目的】为同时检测患病大口黑鲈蛙病毒(Rana)、肿大细胞病毒(Mega)和弹状病毒(Rhab)的感染情况,建立了其三重PCR检测方法。【方法】设计了Rana、Mega和Rhab 3对特异性上、下游引物进行三重PCR检测,Rana、Mega和Rhab扩增片段长度分别为... 【目的】为同时检测患病大口黑鲈蛙病毒(Rana)、肿大细胞病毒(Mega)和弹状病毒(Rhab)的感染情况,建立了其三重PCR检测方法。【方法】设计了Rana、Mega和Rhab 3对特异性上、下游引物进行三重PCR检测,Rana、Mega和Rhab扩增片段长度分别为202、360、563 bp,并进行三重PCR反应体系的优化。【结果】建立的三重PCR方法对Rana、Mega和Rhab核酸检出限最低均可达5.3×10^(-6)μg·mL^(-1)。对临床获得的5份大口黑鲈病料进行三重PCR检测,获得2个Rana、1个Mega和1个Rhab检测阳性结果。【结论】本研究建立的大口黑鲈重要病原三重PCR检测方法,可用于养殖大口黑鲈过程中病毒病快速鉴别诊断和分子流行病学调查。 展开更多
关键词 大口黑鲈 三重PCR检测 蛙病毒 肿大细胞病毒 弹状病毒
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真鲷虹彩病毒引起养殖斑石鲷大规模死亡的研究 被引量:7
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作者 王海波 史成银 +2 位作者 谢国驷 刘冉阳 任宁欣 《渔业科学进展》 CSCD 北大核心 2020年第4期151-158,共8页
2017年8月,山东省烟台市某养殖场网箱养殖的斑石鲷(Oplegnathuspunctatus)幼鱼突然发病并大量急性死亡。疾病调查显示,养殖海域水温为26℃~28℃;病鱼为4~5月龄,全长为(16.3±1.6) cm,体重为(156.9±37.0) g;80万尾斑石鲷幼鱼2... 2017年8月,山东省烟台市某养殖场网箱养殖的斑石鲷(Oplegnathuspunctatus)幼鱼突然发病并大量急性死亡。疾病调查显示,养殖海域水温为26℃~28℃;病鱼为4~5月龄,全长为(16.3±1.6) cm,体重为(156.9±37.0) g;80万尾斑石鲷幼鱼2周内累积死亡率达90%以上,经济损失惨重。临诊检查发现,病鱼体表无明显损伤,但活力差、呼吸急促。剖检可见病鱼脾肿大、质地脆、易碎,肾糜烂,肝有出血点。组织切片观察发现,病鱼脾、肾造血组织中可见许多直径约为20μm的肿大细胞,肿大细胞内含有大量直径约为145nm、呈六边形的病毒颗粒。用过滤除菌的病鱼脾组织匀浆液,腹腔注射感染健康斑石鲷,感染组14d内累积死亡率达95%。人工感染病鱼表现出与自然发病鱼类似的外观症状,且在脾、肾组织切片中也可观察到大量的肿大细胞及相似的病毒粒子。使用特异性PCR引物,从自然发病鱼和人工感染病鱼的肝、脾和肾组织中均检测到鱼类虹彩病毒的高强度感染。克隆、测序得到了1362 bp的病毒主要衣壳蛋白基因(MCP),序列比对显示,该病毒的MCP序列与真鲷虹彩病毒(RSIV)RIE12-1的相应序列完全相同。构建的虹彩病毒系统发育树也显示,该病毒属于虹彩病毒科肿大细胞病毒属RSIV类群,是RSIV的一个分离株。本研究首次证实RSIV可以导致斑石鲷大规模死亡,研究结果为诊断和防治斑石鲷病毒病提供了重要参考。 展开更多
关键词 斑石鲷 真鲷虹彩病毒 肿大细胞虹彩病毒 系统发育树 诊断
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大黄鱼肿大细胞病毒不同毒株的细胞培养及主要衣壳蛋白基因比较 被引量:1
9
作者 杨西西 池洪树 +5 位作者 郑在予 刘晓东 罗潘潘 许斌福 陈秀霞 龚晖 《水产学报》 CAS CSCD 北大核心 2023年第9期145-154,共10页
为建立大黄鱼肿大细胞病毒的培养方法,明确其分类地位,用肿大细胞病毒检测呈阳性的大黄鱼幼鱼病料(FD201807和SA201808)肾组织匀浆液感染鳜仔鱼细胞系(mandarin fish fry cell line-1,MFF-1)并连续传代,从病料组织匀浆液和细胞冻融液中... 为建立大黄鱼肿大细胞病毒的培养方法,明确其分类地位,用肿大细胞病毒检测呈阳性的大黄鱼幼鱼病料(FD201807和SA201808)肾组织匀浆液感染鳜仔鱼细胞系(mandarin fish fry cell line-1,MFF-1)并连续传代,从病料组织匀浆液和细胞冻融液中提取病毒DNA,克隆病毒主要衣壳蛋白基因(mcp),测序后与NCBI GenBank中的虹彩病毒科肿大细胞病毒属病毒mcp以及2018—2020年所检出的15株大黄鱼肿大细胞病毒mcp进行比对分析。结果显示,病毒传至第4代才可引起MFF-1细胞病变,细胞病变的主要特征为细胞脱壁、变圆、折光度增强;感染时间越长脱壁细胞越多,同时培养液中的颗粒增加;透射电镜下可见感染细胞的细胞质散在大小为130~150 nm的六边形病毒粒子和空壳。感染细胞的病变周期随传代代次的增加而缩短,第15代次的FD201807株感染细胞80%细胞病变的时间为3 d,第15代次的SA201808株感染细胞80%细胞病变的时间为7~8 d。mcp序列比对和聚类分析发现,SA201808株与FD201807株的mcp序列存在21个碱基差异,二者的mcp序列分别与大黄鱼虹彩病毒(largeyellowcroakeriridovirus,LYCIV)LYCIVZhoushan(GenBank:MW139932.1)和花鲈虹彩病毒(Lateolabrax maculatus iridovirus,LMIV)(GenBank:MH577517.1)相近。15株从大黄鱼病料检出的肿大细胞病毒中,12株的mcp序列与SA201808株聚类;3株与FD201807聚类。本研究利用MFF-1细胞系分离培养了大黄鱼肿大细胞病毒,揭示了大黄鱼肿大细胞病毒存在差异,为更好地了解大黄鱼肿大细胞病毒提供了数据参考。 展开更多
关键词 大黄鱼 肿大细胞病毒 细胞培养 主要衣壳蛋白
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细胞肿大虹彩病毒的研究现状 被引量:1
10
作者 席云清 田佳鑫 +1 位作者 唐绍林 王桂芹 《黑龙江畜牧兽医》 CAS 北大核心 2018年第17期38-42,共5页
细胞肿大虹彩病毒(Megalocytivirus)是目前发现的危害鱼类健康的重要病毒性病原,该属病毒广泛分布于日本、韩国、中国、泰国等东南亚许多亚洲国家和地区的近百种淡水、海水鱼类中,致使感染鱼类出现大面积死亡,给水产养殖者造成重大经... 细胞肿大虹彩病毒(Megalocytivirus)是目前发现的危害鱼类健康的重要病毒性病原,该属病毒广泛分布于日本、韩国、中国、泰国等东南亚许多亚洲国家和地区的近百种淡水、海水鱼类中,致使感染鱼类出现大面积死亡,给水产养殖者造成重大经济损失。文章综述了近年来国内外对细胞肿大虹彩病毒的研究现状,主要对该病毒的流行病学研究、检测方法、疫苗免疫研究方面取得的成果进行综述,并对其今后的研究趋势进行展望。 展开更多
关键词 细胞肿大虹彩病毒 细胞肿大虹彩病毒病 流行病学研究 检测方法 疫苗免疫研究
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眼斑拟石首鱼虹彩病毒病的诊断 被引量:3
11
作者 席云清 戚瑞荣 +4 位作者 田佳鑫 张会军 雷燕 唐绍林 王桂芹 《水生生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2018年第5期929-934,共6页
对广东省珠海市每年6—10月池塘养殖的眼斑拟石首鱼(Sciaenop socellatus)暴发不明原因疾病进行了研究。通过对该病的流行病学调查,结合症状观察、病原分离鉴定、病理学变化,结果显示:该病具有明显的传染性,解剖病鱼可见鳃丝贫血、脾脏... 对广东省珠海市每年6—10月池塘养殖的眼斑拟石首鱼(Sciaenop socellatus)暴发不明原因疾病进行了研究。通过对该病的流行病学调查,结合症状观察、病原分离鉴定、病理学变化,结果显示:该病具有明显的传染性,解剖病鱼可见鳃丝贫血、脾脏和肾脏肿大、出血,通过镜检未检测到大量的寄生虫;从发病鱼的肝、脾、肾脏和肠中未分离到致病菌;在病鱼肝、脾和肾组织病理切片中观察到有大量肿大细胞;通过使用OIE推荐的虹彩病毒特异性引物进行PCR扩增出570 bp左右的目的片段,MCP基因序列比对显示扩增获得的基因序列与真鲷虹彩病毒(RSIV)的基因序列同源性高达99.2%。综合以上结果表明导致眼斑拟石首鱼发病死亡的原因是感染了细胞肿大属虹彩病毒而引起的虹彩病毒病。 展开更多
关键词 眼斑拟石首鱼 虹彩病毒病 细胞肿大属虹彩病毒 诊断
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