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ASFV多表位融合基因MeP72基因的克隆、表达及其间接ELISA检测方法建立
被引量：
6
1
作者
郭晶
孟庆玲
+5 位作者
乔军
李重阳
伍晔晖
王立霞
马帅
才学鹏
《生物技术》
CAS
2018年第6期548-553,共6页
[目的]建立以重组多表位融合蛋白reMeP72为包被抗原的ASFV间接ELISA检测方法。[方法]预测分析ASFV结构蛋白P72的优势抗原表位,串连优势抗原表位并优化稀有密码子以合成多表位融合抗原基因MeP72。在毕赤酵母表达系统中诱导表达,分析重组...
[目的]建立以重组多表位融合蛋白reMeP72为包被抗原的ASFV间接ELISA检测方法。[方法]预测分析ASFV结构蛋白P72的优势抗原表位,串连优势抗原表位并优化稀有密码子以合成多表位融合抗原基因MeP72。在毕赤酵母表达系统中诱导表达,分析重组融合蛋白的反应原性。用reMeP72做包被抗原,建立ASFV的ELISA间接检测方法。[结果]成功构建了402bp的MeP72基因片段。SDS-PAGE和WesternBlotting分析该蛋白在14kDa有条带,证明其反应原性良好。经ELISA反应条件优化,建立的ELISA方法与猪的其他病原的阳性血清不发生交叉反应,且可检测到稀释倍数为1∶512ASFV阳性血清,证明其特异性和敏感性良好。[结论]建立了抗原包被浓度为15μg/mL,一抗、二抗稀释倍数分别为1∶200、1∶5000倍的特异性和敏感性良好的reMeP72-ELISA检测方法。
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关键词
非洲猪瘟病毒
mep
72
毕赤酵母表达
间接ELISA检测方法
原文传递
非洲猪瘟病毒多表位融合蛋白P72的构建、表达及免疫学特性研究
被引量：
5
2
作者
郭晶
李重阳
+5 位作者
孟庆玲
乔军
伍晔晖
王立霞
马帅
才学鹏
《家畜生态学报》
北大核心
2019年第6期60-65,共6页
非洲猪瘟是由非洲猪瘟病毒(ASFV)引起的一种烈性传染病,对中国猪养殖产业的发展存在巨大的潜在威胁。为了建立有效的检测手段来防控ASFV的流行,本试验以GenBank中ASFV基因组序列为基础,运用在线软件对ASFV结构蛋白P72的优势线性抗原表...
非洲猪瘟是由非洲猪瘟病毒(ASFV)引起的一种烈性传染病,对中国猪养殖产业的发展存在巨大的潜在威胁。为了建立有效的检测手段来防控ASFV的流行,本试验以GenBank中ASFV基因组序列为基础,运用在线软件对ASFV结构蛋白P72的优势线性抗原表位进行预测分析,利用预测结果分析合成多表位融合基因P72 (MeP72)。再将MeP72经pMD19-T克隆后插入到原核表达载体pET-32a(+)中得到重组质粒pET-MeP72,双酶切验证在402 bp及5 000 bp以上有条带,证明重组质粒构建成功。转化重组质粒pET-MeP72至大肠杆菌感受态细胞E.coli BL21 (DE3),用IPTG诱导表达并优化诱导条件,分析重组蛋白反应原性。SDS-PAGE检测结果显示,MeP72重组蛋白的分子质量为30.74 kDa;Western blot分析显示MeP72重组蛋白可被ASFV阳性血清特异性识别,表明其反应原性良好;小鼠免疫试验证实MeP72蛋白可诱导机体产生特异性抗体,具有良好的免疫原性。研究表明MeP72重组蛋白可在大肠杆菌中高效表达,并诱导机体产生特异性抗体,为诊断抗原的研发奠定了前期基础。
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关键词
非洲猪瘟病毒
mep
72
多表位融合抗原基因
原核表达
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职称材料
题名
ASFV多表位融合基因MeP72基因的克隆、表达及其间接ELISA检测方法建立
被引量：
6
1
作者
郭晶
孟庆玲
乔军
李重阳
伍晔晖
王立霞
马帅
才学鹏
机构
石河子大学动物科技学院
中国农业科学院兰州兽医研究所
出处
《生物技术》
CAS
2018年第6期548-553,共6页
基金
国家“十三·五”重点研发计划项目子课题(“基于复合多表位融合抗原的非洲猪瘟病毒间接ELISA抗体检测试剂盒的研制”,No.2017YFD0502300)
兵团中青年科技创新领军人才计划(“动物传染病诊断与防控技术”,No.2016BC001)
文摘
[目的]建立以重组多表位融合蛋白reMeP72为包被抗原的ASFV间接ELISA检测方法。[方法]预测分析ASFV结构蛋白P72的优势抗原表位,串连优势抗原表位并优化稀有密码子以合成多表位融合抗原基因MeP72。在毕赤酵母表达系统中诱导表达,分析重组融合蛋白的反应原性。用reMeP72做包被抗原,建立ASFV的ELISA间接检测方法。[结果]成功构建了402bp的MeP72基因片段。SDS-PAGE和WesternBlotting分析该蛋白在14kDa有条带,证明其反应原性良好。经ELISA反应条件优化,建立的ELISA方法与猪的其他病原的阳性血清不发生交叉反应,且可检测到稀释倍数为1∶512ASFV阳性血清,证明其特异性和敏感性良好。[结论]建立了抗原包被浓度为15μg/mL,一抗、二抗稀释倍数分别为1∶200、1∶5000倍的特异性和敏感性良好的reMeP72-ELISA检测方法。
关键词
非洲猪瘟病毒
mep
72
毕赤酵母表达
间接ELISA检测方法
Keywords
African swine fever virus(ASFV)
mep
72
Pichia pastoris expression
indirect ELISA detection method
分类号
Q784 [生物学—分子生物学]
原文传递
题名
非洲猪瘟病毒多表位融合蛋白P72的构建、表达及免疫学特性研究
被引量：
5
2
作者
郭晶
李重阳
孟庆玲
乔军
伍晔晖
王立霞
马帅
才学鹏
机构
石河子大学动物科技学院
中国农业科学院兰州兽医研究所
出处
《家畜生态学报》
北大核心
2019年第6期60-65,共6页
基金
国家十三五重点研发计划子课题(2017YFD0502300)
兵团中青年科技创新领军人才计划(2016BC001)
文摘
非洲猪瘟是由非洲猪瘟病毒(ASFV)引起的一种烈性传染病,对中国猪养殖产业的发展存在巨大的潜在威胁。为了建立有效的检测手段来防控ASFV的流行,本试验以GenBank中ASFV基因组序列为基础,运用在线软件对ASFV结构蛋白P72的优势线性抗原表位进行预测分析,利用预测结果分析合成多表位融合基因P72 (MeP72)。再将MeP72经pMD19-T克隆后插入到原核表达载体pET-32a(+)中得到重组质粒pET-MeP72,双酶切验证在402 bp及5 000 bp以上有条带,证明重组质粒构建成功。转化重组质粒pET-MeP72至大肠杆菌感受态细胞E.coli BL21 (DE3),用IPTG诱导表达并优化诱导条件,分析重组蛋白反应原性。SDS-PAGE检测结果显示,MeP72重组蛋白的分子质量为30.74 kDa;Western blot分析显示MeP72重组蛋白可被ASFV阳性血清特异性识别,表明其反应原性良好;小鼠免疫试验证实MeP72蛋白可诱导机体产生特异性抗体,具有良好的免疫原性。研究表明MeP72重组蛋白可在大肠杆菌中高效表达,并诱导机体产生特异性抗体,为诊断抗原的研发奠定了前期基础。
关键词
非洲猪瘟病毒
mep
72
多表位融合抗原基因
原核表达
Keywords
African swine fever viral(ASFV)
mep
72
multi-epitope fusion antigen gene
prokaryotic expression
分类号
S811.5 [农业科学—畜牧学]
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职称材料
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
ASFV多表位融合基因MeP72基因的克隆、表达及其间接ELISA检测方法建立
郭晶
孟庆玲
乔军
李重阳
伍晔晖
王立霞
马帅
才学鹏
《生物技术》
CAS
2018
6
原文传递
2
非洲猪瘟病毒多表位融合蛋白P72的构建、表达及免疫学特性研究
郭晶
李重阳
孟庆玲
乔军
伍晔晖
王立霞
马帅
才学鹏
《家畜生态学报》
北大核心
2019
5
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职称材料
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