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Mdp3抗体的制备和应用
1
作者 孙晓鸥 塔拉 周军 《南开大学学报（自然科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2012年第5期76-81,共6页
Mdp3是1个由876个氨基酸组成的蛋白质,其基因位于Xq26.3.利用pET32a(+)载体,构建了原核表达His-Mdp3融合蛋白的质粒pET32a(+)-Mdp3,转化到E.coli BL21(DE3)中,用IPTG诱导融合蛋白表达.摸索得到了His-Mdp3融合蛋白的最佳表达条件,并纯化... Mdp3是1个由876个氨基酸组成的蛋白质,其基因位于Xq26.3.利用pET32a(+)载体,构建了原核表达His-Mdp3融合蛋白的质粒pET32a(+)-Mdp3,转化到E.coli BL21(DE3)中,用IPTG诱导融合蛋白表达.摸索得到了His-Mdp3融合蛋白的最佳表达条件,并纯化得到大量纯度较高的蛋白质.利用从细菌中纯化的His-Mdp3蛋白免疫小鼠,得到针对Mdp3的抗体,并通过免疫印迹实验验证了该抗体的特异性.最后,用该抗体对细胞进行免疫荧光显微分析,发现Mdp3在细胞内呈现特异的定位模式. 展开更多
关键词 mdp3 蛋白纯化 抗体 免疫荧光
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pFlag-dlx3载体的构建及在iMDP3中的表达
2
作者 王锋 陈硕 王玮 《解剖学研究》 CAS 2015年第5期370-374,共5页
目的构建真核表达载体p Flag-dlx3,并将其转染成牙本质样细胞株i MDP3,检测外源dlx3基因在i MDP3细胞内的表达。方法提取新生小鼠牙髓总RNA,RT-PCR扩增Dlx3目的基因片段,并将该片段克隆至PCR-TopoⅡ载体中;经鉴定正确后目的基因与表达载... 目的构建真核表达载体p Flag-dlx3,并将其转染成牙本质样细胞株i MDP3,检测外源dlx3基因在i MDP3细胞内的表达。方法提取新生小鼠牙髓总RNA,RT-PCR扩增Dlx3目的基因片段,并将该片段克隆至PCR-TopoⅡ载体中;经鉴定正确后目的基因与表达载体p Flag-CMV连接;Lipofectamin 2000介导重组质粒p Flag-dlx3转染i MDP3;Western-blot鉴定外源性dlx3在细胞内的表达。结果重组p Flag-dlx3质粒经酶切、测序鉴定正确;i MDP3细胞内检测到外源dlx3蛋白的表达;转染p Flag-dlx3组dlx3蛋白的表达量显著高于正常组。结论成功构建真核表达载体p Flag-dlx3,且外源dlx3基因可在i MDP3细胞内过表达。 展开更多
关键词 真核表达 dlx3 I mdp3 牙
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