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骨髓间充质干细胞来源类肝细胞的功能和超微结构评估 被引量：5
1
作者 何念海 赵文利 王宇明 《中华传染病杂志》 CAS CSCD 北大核心 2004年第6期372-376,共5页
目的　对骨髓间充质干细胞 (MMSCs)来源的类肝细胞进行功能和超微结构评估。方法　从人胎儿骨髓中分离MMSCs ,在 1%基质胶 (Matrigel)作基质 ,2 .5 μmol/ml氮胞苷 (AZA)预处理10～ 12h ,肝细胞生长因子 (HGF) 10ng/ml+成纤维细胞生长因... 目的　对骨髓间充质干细胞 (MMSCs)来源的类肝细胞进行功能和超微结构评估。方法　从人胎儿骨髓中分离MMSCs ,在 1%基质胶 (Matrigel)作基质 ,2 .5 μmol/ml氮胞苷 (AZA)预处理10～ 12h ,肝细胞生长因子 (HGF) 10ng/ml+成纤维细胞生长因子 4 (FGF4 ) 10ng/ml+肝细胞生长培养基 (HGM )中培养和诱导。以未诱导的MMSCs作对照 ,对诱导 4d、7d、14d、2 1d、2 8dMMSCs采用酶联免疫吸附法 (ELISA)检测培养上清液中人白蛋白 (ALB)水平 ,脲酶法检测合成尿素的能力 ,过碘酸希夫试验进行糖原染色 ,电镜观察细胞超微结构。结果　在分化过程的不同时相点检测ALB和尿素生成 ,未诱导分化的MMSCs没有分泌ALB和产生尿素 ,而给予FGF4和HGF处理后 ,MMSCs以时间依赖方式产生ALB和尿素。用过碘酸希夫 (PAS)染色法分析发现MMSCs诱导 14d时首先见到部分细胞出现红紫色染色的糖原积聚物 ,2 8d后阳性染色细胞数量增多 ,提示诱导后MMSCs已具备肝细胞的糖原合成能力。电镜显示未诱导MMSCs具有幼稚细胞的结构特点。诱导 2 8d的MM SCs已分化 ,并具有上皮样细胞的极性结构特点。结论　诱导后MMSCs已具备肝细胞特有的结构和功能性特征。 展开更多
关键词 诱导 肝细胞 ALB 糖原 超微结构 HGF 骨髓 提示 来源 对照
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人胎儿骨髓间充质干细胞体外分离培养及诱导分化为类肝细胞 被引量：3
2
作者 何念海 赵文利 王宇明 《重庆医学》 CAS CSCD 2006年第21期1923-1928,共6页
目的 建立人胎儿骨髓间充质干细胞（marrow mesenchymal stem cells，MMSCs）的体外分离、培养方法．体外诱导分化MMSCs为类肝细胞，观察MMSCs细胞生物学特性，并对类肝细胞进行分子生物学及功能鉴定。方法 采用体外细胞培养技术，分离... 目的 建立人胎儿骨髓间充质干细胞（marrow mesenchymal stem cells，MMSCs）的体外分离、培养方法．体外诱导分化MMSCs为类肝细胞，观察MMSCs细胞生物学特性，并对类肝细胞进行分子生物学及功能鉴定。方法 采用体外细胞培养技术，分离培养人胎儿MMSCs，在1％Matrigel做基质，2．5gmol／inlAZA预处理10～12h，HGF10ng／ml＋FGF410ng／ml＋HGM培养基中诱导。用显微摄像和MTT研究细胞增殖及生长特征，用流式细胞仪、免疫组织化学和RT—PCR鉴定细胞表型。采用ELISA法检测培养上清中人清蛋白水平。结果 24h换液后可获得约（300±80）个贴壁细胞；培养细胞在种植后1～3d为生长滞留期，第4天达到对数生长期，以后进入到平台期，细胞分裂指数曲线的趋势与生长曲线类似。连续传10代后．每个胎儿来源的MMSCs可扩增达10^11～10^12个细胞。MMSCs表型为CD166阳性，CD34阴性。在添加FGF4和HGF的Matrigel上诱导培养的MMSCs在21～28d时，细胞形态由长梭形变为三角形、多角形或类圆形。细胞转圆率为40％～50％，双核细胞比率5％～7％。免疫组化和RT—PCR检测显示未诱导培养的MMSCs中，有较少的细胞表达AFP及其mRNA，未见其他肝脏特有的转录因子或者胞浆蛋白标志。诱导早期可见较多细胞表达GATA4、AFP和CK19及其mRNA，至诱导后期表达下降，而ALB、CK18、GST-Ⅱ和肝细胞转录因子HNF1d表达逐渐上升。ALB、CK18阳性细胞比例达61％～65％。未诱导分化的MMSCs没有分泌ALB，诱导分化的MMSCs以时间依赖方式产生清蛋白。结论 人胎儿MMSCs分离成分单纯，增生旺盛。诱导培养可获得高比例的类肝细胞。MMSCs向类肝细胞的横向分化是先分化为肝前体细胞，再分化为成熟肝细胞，在本实验诱导奈件下可获得在复制及翻译各环节肝细胞标志阳性的类肝细胞。诱导后MMSCs已具备肝细胞特有的功能性特征。 展开更多
关键词 间充质干细胞 类肝细胞 细胞分化 横向分化
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