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题名甘露聚糖酶基因在毕赤酵母中的表达及酶学性质研究
被引量：7
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作者
乔宇
陈小兵
丁宏标
岳明
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机构
中国农业科学院饲料研究所
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出处
《中国生物工程杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2006年第7期52-56,共5页
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基金
国家自然科学基金资助项目(30371046)国家"863"计划资助项目(2003AA241160)国际科学基金IFS资助项目(B/3873-1)
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文摘
采用PCR的方法,以枯草芽孢杆菌Bacillus subtilis基因组DNA为模板,克隆出甘露聚糖酶MAN的成熟肽编码序列,将其插入巴斯德毕赤酵母Pichia pastoris表达载体pPIC9K中,并位于α-因子信号肽序列的下游,获得重组质粒pPIC9K-MAN。重组质粒线性化后用聚乙二醇法导入毕赤酵母Pichia pastoris菌株GS115中,经大量筛选,获得高效分泌表达甘露聚糖酶的毕赤酵母工程菌株MAN22。将此菌株在5 L发酵罐中进行高密度发酵,测定酶活最高达1102IU／ml,同时对重组甘露聚糖酶的性质进行了初步研究。
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关键词
甘露聚糖酶
毕赤酵母
表达
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Keywords
mannanase pichia pastoris expression
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分类号
Q786
[生物学—分子生物学]
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题名枯草芽孢杆菌β-甘露聚糖酶在毕赤酵母中的分泌表达
被引量：8
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作者
马威
沈志娜
陈轶群
李志民
曹云鹤
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机构
中国农业大学动物营养学国家重点实验室
哈尔滨师范大学生命科学院
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出处
《生物技术通讯》
CAS
2010年第2期171-174,共4页
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基金
国家高技术研究发展计划(2007AA100601)
教育部新世纪优秀人才支持计划(NCET-07-0807)
动物营养学国家重点实验室自主研究课题(2004DA125184(团)0806)
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文摘
目的:研制高效分泌表达枯草芽孢杆菌β-甘露聚糖酶的毕赤酵母基因工程菌株。方法与结果:将优化设计的枯草芽孢杆菌MA139β-甘露聚糖酶基因用EcoRⅠ/XbaⅠ双酶切,克隆到诱导型表达载体pPICzαA中α因子信号肽编码序列的下游,转化大肠杆菌筛选重组质粒,转化毕赤酵母X-33感受态细胞,经Zeocin筛选,获得重组表达菌株X-33/mann。将重组菌株在10L全自动发酵罐中进行高密度发酵培养,甲醇诱导72h发酵活力达到2100U/mL。重组甘露聚糖酶的最适催化温度为40℃,最适催化pH值为6.0。结论:枯草芽孢杆菌β-甘露聚糖酶在毕赤酵母中获得了高效分泌表达,具有开发作为饲料添加剂的潜能。
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关键词
Β-甘露聚糖酶
枯草芽孢杆菌
毕赤酵母
分泌表达
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Keywords
β-mannanase Bacillus subtilis pichia pastoris secreting expression
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分类号
Q785
[生物学—分子生物学]
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