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苹果着色期实时定量PCR内参基因的筛选和验证 被引量:19
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作者 樊连梅 王超 +1 位作者 刘更森 原永兵 《植物生理学报》 CAS CSCD 北大核心 2014年第12期1903-1911,共9页
苹果果实着色期基因表达水平的变化对果实品质形成具有重要影响,选择适合的内参基因是提高实时荧光定量PCR分析准确性的首要条件。本试验以‘富士’苹果着色过程中不同取样时间的果皮为材料,通过q RT-PCR分析了常用候选持家基因β-actin... 苹果果实着色期基因表达水平的变化对果实品质形成具有重要影响,选择适合的内参基因是提高实时荧光定量PCR分析准确性的首要条件。本试验以‘富士’苹果着色过程中不同取样时间的果皮为材料,通过q RT-PCR分析了常用候选持家基因β-actin、EF-1α、GAPDH和18S r RNA的表达变化,借助ge Norm和Norm Finder程序筛选出在果实着色期q RT-PCR分析的理想内参基因。结果表明,EF-1α的表达水平高且最稳定,其次是18S r RNA,而β-actin和GAPDH的相对表达水平较低;同时,用筛选的内参基因EF-1α和18S r RNA分析苹果花青苷合成途径的二氢黄酮醇-4-还原酶基因的表达水平,其表达规律比较一致,均呈现正态分布。因此,EF-1α和18S r RNA是研究苹果着色期表达的理想的内参基因。 展开更多
关键词 '富士’苹果 内参基因 实时荧光定量PCR geNorm程序 NormFinder程序
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苹果谷胱甘肽S-转移酶基因MdGSTF3的克隆及其表达分析 被引量:1
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作者 樊连梅 刘更森 +1 位作者 李思琪 原永兵 《植物生理学报》 CAS CSCD 北大核心 2015年第9期1502-1512,共11页
以‘富士’苹果果皮为试材,利用RT-PCR和RACE-PCR克隆得到1个全长为868bp的苹果谷胱甘肽S-转移酶基因MdGSTF3全长cDNA序列,GenBank的登录号为KP234026,该基因5'非翻译区49bp,3'非翻译区151bp,含有26 bp的PolyA尾,编码区为642 bp... 以‘富士’苹果果皮为试材,利用RT-PCR和RACE-PCR克隆得到1个全长为868bp的苹果谷胱甘肽S-转移酶基因MdGSTF3全长cDNA序列,GenBank的登录号为KP234026,该基因5'非翻译区49bp,3'非翻译区151bp,含有26 bp的PolyA尾,编码区为642 bp,编码213个氨基酸,编码的蛋白质含有19种氨基酸,不含有半胱氨酸Cys,相对分子质量为23.993 kDa,等电点为6.17。氨基酸多重序列比对分析结果表明Md GST与梅的PmGST蛋白(XP_008235026)遗传相似性为83%。实时荧光定量PCR结果表明,Md GSTF3在条红‘富士’的茎、叶和花中表达量高于其突变体片红‘富士’;而在果皮和果肉中,片红‘富士’该基因的表达量高于条红‘富士’;在表达量达到最大值时,片红‘富士’比条红‘富士’分别高出46.6%和22.1%。实验结果表明,MdGSTF3的表达与苹果果实不同组织花青苷的积累和分布密切相关。 展开更多
关键词 '富士’苹果 谷胱甘肽S-转移酶(GST) 花青苷 克隆 表达分析
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苹果金属硫蛋白基因MdFjMT2克隆及生物信息学分析 被引量:8
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作者 樊连梅 刘更森 +1 位作者 刘成连 原永兵 《植物遗传资源学报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第5期782-789,共8页
以红富士苹果(Malus domesticaCV Red Fuji)浓红型芽变和其条红母株为试材,构建抑制性差减杂交(Suppression Subtractive Hybridization,SSH)文库,差异筛选SSH-cDNA文库,经过大量测序构建成红富士苹果EST序列本地数据库,对本地数据库进... 以红富士苹果(Malus domesticaCV Red Fuji)浓红型芽变和其条红母株为试材,构建抑制性差减杂交(Suppression Subtractive Hybridization,SSH)文库,差异筛选SSH-cDNA文库,经过大量测序构建成红富士苹果EST序列本地数据库,对本地数据库进行Blastn检索,得到42条金属硫蛋白基因MdFjMT2的cDNA片段,通过序列拼接和逆转录PCR(RT-PCR)方法,获得了红富士苹果金属硫蛋白基因MdFjMT2全长cDNA序列(Gen-bank登录号为HQ730757),该基因全长684bp,其中5′非翻译区97bp,3′非翻译区347bp,编码区(Coding sequence,CDS)为240bp,编码79个氨基酸,推测蛋白分子量为7.7938kDa,理论等电点为4.75。该基因具有金属硫蛋白基因的典型结构域特征,编码的氨基酸序列中含有14个半胱氨酸残基Cys(C),Cys残基的排列特征是以CC、CXC和CXXC集中分布在肽链的N端和C端。系统进化分析表明MdFjMT2与砂梨(Pyrus pyrifo-lia)、苹果(Malus domestica)和小金海棠(M.xiaojinensis)等植物金属硫蛋白具有较近的亲缘关系,与扁桃(Prunus dulcis)、旱柳(Salixmatsudana)、美味猕猴桃(Actinidia deliciosa)等植物的亲缘关系较远。生物信息学分析结果表明,MdFjMT2主要位于叶绿体中,没有信号肽,是非跨膜亲水性蛋白,其蛋白质二级结构的主要元件是无规则卷曲,没有功能结构域。这些结果为Md-FjMT2的结构与功能挖掘提供一定的参考。本研究结果有助于研究该基因在苹果着色中的作用,阐明苹果着色的分子机制。 展开更多
关键词 红富士苹果 金属硫蛋白 MdFjMT2 基因克隆 生物信息
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苹果属不同种对褐斑病菌生长发育的影响 被引量:7
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作者 王洁 赵华 +2 位作者 苏苏 高小宁 黄丽丽 《西北农业学报》 CAS CSCD 北大核心 2012年第5期60-64,83,共6页
利用荧光显微镜技术观察苹果褐斑病菌(Diplocarpon mali)接种苹果品种富士和砧木山定子叶片后不同时间点的生长发育特点。接种富士6h后分生孢子即可萌发入侵,24h在表皮细胞中形成吸器,3d在叶组织中形成菌落并已扩展至海绵组织,5d后观察... 利用荧光显微镜技术观察苹果褐斑病菌(Diplocarpon mali)接种苹果品种富士和砧木山定子叶片后不同时间点的生长发育特点。接种富士6h后分生孢子即可萌发入侵,24h在表皮细胞中形成吸器,3d在叶组织中形成菌落并已扩展至海绵组织,5d后观察到特殊的角质层下菌丝束(SHS)组织,7d即可观察到大量分生孢子盘。虽然病菌在山定子叶片中的生长发育过程与在富士上相似,但发育明显延迟,接种后3d在角质层下扩展并侵染表皮细胞形成吸器;7d时仍局限在侵染点周围,未观察到SHS组织;11d始见个别分生孢子盘。且接种后12h在侵染点周围的表皮细胞壁上有明显的胼胝质沉积,说明山定子对褐斑病的抗性明显大于富士,可用于进一步的抗病机理研究和应用。 展开更多
关键词 苹果褐斑病菌 吸器 角质层下菌丝束 富士 山定子
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富士苹果SDRs家族基因MdSDR的克隆及序列分析 被引量:2
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作者 龚婉 吕路琼 +1 位作者 王维东 黄丽丽 《分子植物育种》 CAS CSCD 北大核心 2020年第14期4597-4604,共8页
本研究以富士苹果(Malus domestica cv. Fuji)为材料,提取总RNA并反转获得的cDNA为模板,利用PCR技术获得苹果短链脱氢酶/还原酶家族基因MdSDR序列,并结合生物信息学方法对MdSDR蛋白序列进行分析。结果显示,苹果MdSDR序列全长804 bp,编码... 本研究以富士苹果(Malus domestica cv. Fuji)为材料,提取总RNA并反转获得的cDNA为模板,利用PCR技术获得苹果短链脱氢酶/还原酶家族基因MdSDR序列,并结合生物信息学方法对MdSDR蛋白序列进行分析。结果显示,苹果MdSDR序列全长804 bp,编码267个氨基酸,分子质量约27.83 kD,等电点为7.69,是一种稳定的疏水蛋白。比对分析发现其编码蛋白氨基酸序列与已选序列中的碧桃、樱花相似性最高,分别达77.78%和77.69%,进化分析结果也表明MdSDR蛋白与碧桃和樱花亲缘关系较近。亚细胞定位结果显示该蛋白主要位于细胞质中。多序列比对分析显示该蛋白含有SDR家族特有的两个保守结构域:GxxxGxG与YxxxK。二级结构中β片层、α螺旋、无规则卷曲结构分别占比12.73%、39.70%、47.57%,并含有典型的βαβ单元。三级结构预测结果表明该蛋白具有典型的Rossman折叠结构域。本研究结果为了解苹果中SDRs蛋白的功能、探讨其在苹果抗逆中的作用、培育苹果抗逆种质资源提供了思路。 展开更多
关键词 富士苹果(malus domestica cv.fuji) 短链脱氢酶/还原酶 基因克隆 序列分析
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苹果类甜味蛋白编码基因Mdtl2克隆及功能的初步验证
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作者 龚婉 王维东 +2 位作者 吕路琼 王帅乐 黄丽丽 《植物病理学报》 CAS CSCD 北大核心 2023年第1期31-40,共10页
植物类甜味蛋白(Thaumatin like proteins, TLPs)是一类具有抗菌活性和抗非生物胁迫作用的病程相关蛋白。本研究克隆获得富士苹果(Malus domestica cv. Fuji)TLPs家族蛋白Mdtl2编码基因,该基因开放阅读框全长为912 bp,编码303个氨基酸... 植物类甜味蛋白(Thaumatin like proteins, TLPs)是一类具有抗菌活性和抗非生物胁迫作用的病程相关蛋白。本研究克隆获得富士苹果(Malus domestica cv. Fuji)TLPs家族蛋白Mdtl2编码基因,该基因开放阅读框全长为912 bp,编码303个氨基酸。生物信息学分析显示Mdtl2含有多个保守的半胱氨酸及TLPs家族保守序列片段,且具有TLPs典型的三维结构,属于TLPs家族的糖苷水解酶64家族(GH64-TLP-SF Superfamily)。在烟草中过表达Mdtl2能够显著抑制疫霉(Phytophthora infestans)的侵染。在苹果中过表达Mdtl2显著抑制苹果树腐烂病菌(Valsa mali)的侵染,并且能够诱导胼胝质的积累。上述结果表明,Mdtl2作为糖苷水解酶家族蛋白,能够通过诱导胼胝质的积累,提高植物对病原菌的抗性。 展开更多
关键词 富士苹果 类甜味蛋白 基因克隆 生信分析 功能验证
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喷施NaHSO_3溶液对红富士苹果贮藏生理的影响 被引量:4
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作者 陈屏昭 蒋彬 +3 位作者 武卫华 祁岑 蔡兆翔 张桦 《湖北农业科学》 北大核心 2013年第6期1395-1397,1409,共4页
以8年生盛果红富士苹果(Malus domestica Borkh.cv.Red Fuji)树为试材,通过叶面、果面喷施不同浓度的NaHSO3溶液,观察了红富士苹果采收后在常温下几项贮藏生理指标的变化规律。结果表明,在红富士苹果的生长发育过程中,叶面、果面喷施NaH... 以8年生盛果红富士苹果(Malus domestica Borkh.cv.Red Fuji)树为试材,通过叶面、果面喷施不同浓度的NaHSO3溶液,观察了红富士苹果采收后在常温下几项贮藏生理指标的变化规律。结果表明,在红富士苹果的生长发育过程中,叶面、果面喷施NaHSO3溶液可保持果实的硬度,降低失水率和病害率,延缓可溶性固形物、总糖、维生素C(VC)和可滴定酸相对含量的下降,其中以10 mmol/L NaHSO3溶液处理的综合效果最为显著。 展开更多
关键词 红富士苹果(malus domestica Borkh. cv. Red fuji) NAHSO3 贮藏 生理指标
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Na_2SO_3对红富士苹果产量和产值的影响
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作者 袁晓春 陈屏昭 +1 位作者 张泽俊 师睿 《湖北农业科学》 2018年第6期80-83,共4页
以12年生盛果期红富士苹果(Malus domestica Borkh.cv.Red Fuji)树为试材,分别用1、2、3、4、5mmol/L的Na_2SO_3雾状液喷洒红富士苹果叶面和果面(分别记为Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ、Ⅴ组),并以H_2O雾状液为对照。结果显示,与对照相比,处理组的果... 以12年生盛果期红富士苹果(Malus domestica Borkh.cv.Red Fuji)树为试材,分别用1、2、3、4、5mmol/L的Na_2SO_3雾状液喷洒红富士苹果叶面和果面(分别记为Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ、Ⅴ组),并以H_2O雾状液为对照。结果显示,与对照相比,处理组的果品外观质量和内在品质均有不同程度的改善;除Ⅴ组外,其他处理组的果实生长量、果实产量、果实高品级分数和总产值均有增加,其中,Ⅲ组的总产值比Ⅰ、Ⅱ、Ⅳ、Ⅴ组和对照分别净增168.40、68.70、177.20、288.20、279.70元,增收率分别为12.2%、5.0%、12.8%、20.8%和20.2%,差异达显著水平。说明Na_2SO_3对红富士苹果具有类似于NaHSO_3和KHSO_3的特性,其最佳喷施浓度为3 mmol/L。 展开更多
关键词 红富士苹果(malus domestica Borkh.cv.Red fuji) Na2SO3 浓度 产量 产值
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苹果果皮酚类物质对光强变化的适应性研究 被引量:4
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作者 郝燕燕 黄卫东 张文和 《中国农业科学》 CAS CSCD 北大核心 2004年第7期1050-1055,共6页
以套袋3个月的富士苹果为试材,研究光强变化对果皮酚类物质的影响。结果表明,未套袋果实果皮的UV吸收物、芦丁、花青苷含量明显高于套袋果实的,而绿原酸含量降低。套袋果实除袋后,果皮绿原酸、UV吸收物、花青苷、芦丁呈现上升趋势;摘袋... 以套袋3个月的富士苹果为试材,研究光强变化对果皮酚类物质的影响。结果表明,未套袋果实果皮的UV吸收物、芦丁、花青苷含量明显高于套袋果实的,而绿原酸含量降低。套袋果实除袋后,果皮绿原酸、UV吸收物、花青苷、芦丁呈现上升趋势;摘袋后用水杨酸(SA)浸蘸处理提高了果皮SA、槲皮素含量。 展开更多
关键词 苹果 果皮酚类物质 光强变化 适应性 果实套袋
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