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基于CRISPR/Cas9系统定点编辑小鼠MAD2L1基因及其脱靶效应分析 被引量：4
1
作者 陈丽香 彭秀华 +5 位作者 谭丹 韩铖潇 赵锐 王超 李顺 周晓辉 《中国实验动物学报》 CSCD 北大核心 2017年第6期587-593,共7页
目的建立利用CRISPR/Cas9系统对小鼠MAD2L1基因第二外显子基因编辑的方法体系,并分析CRISPR/Cas9对MAD2L1基因编辑的脱靶效应。方法通过CHOPCHOP网站设计位于小鼠MAD2L1基因第二外显子的靶点序列,并构建Cas9-MAD2L1载体,将该载体转染到N... 目的建立利用CRISPR/Cas9系统对小鼠MAD2L1基因第二外显子基因编辑的方法体系,并分析CRISPR/Cas9对MAD2L1基因编辑的脱靶效应。方法通过CHOPCHOP网站设计位于小鼠MAD2L1基因第二外显子的靶点序列,并构建Cas9-MAD2L1载体,将该载体转染到NIH/3T3细胞中,通过嘌呤霉素筛选并结合荧光显微镜观察GFP后,提取细胞转染后的基因组DNA,利用PCR方法,结合T7E1分析和桑格尔测序,鉴定对小鼠MAD2L1基因编辑情况,并对转染后的NIH/3T3细胞进行CRISPR/Cas9脱靶效应分析。结果将Cas9-MAD2L1载体转染到NIH/3T3细胞并进行嘌呤霉素筛选后,荧光显微镜下观察到大量表达GFP的细胞,PCR结合T7E1结果显示,以转染后的细胞DNA为模板扩增出的228 bp MAD2L1 PCR产物,可被酶切成166 bp和62 bp片段,测序结果显示,成功对MAD2L1基因第二外显子靶点处进行基因编辑,脱靶效应分析未检测到CRISPR/Cas9有对脱靶位点进行基因编辑。结论成功建立对小鼠MAD2L1基因第二外显子进行基因编辑的方法体系,设计的对MAD2L1基因编辑靶点未检测到脱靶效应的发生。 展开更多
关键词 CRISPR/Cas9 小鼠 mad2l1 脱靶效应
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MAD2L1在结直肠癌中的表达及与免疫浸润关系的研究
2
作者 刘萌萌 李付广 《临床研究》 2024年第5期5-9,共5页
目的 探讨干扰有丝分裂阻滞缺陷2样蛋白1(MAD2L1)在结直肠癌组织中的表达及与免疫浸润的关系。方法 基于TCGA数据库分析结直肠癌组织及正常结直肠组织中MAD2L1的表达差异,生存分析评价MAD2L1表达水平与患者预后的关系,采用临床相关性分... 目的 探讨干扰有丝分裂阻滞缺陷2样蛋白1(MAD2L1)在结直肠癌组织中的表达及与免疫浸润的关系。方法 基于TCGA数据库分析结直肠癌组织及正常结直肠组织中MAD2L1的表达差异,生存分析评价MAD2L1表达水平与患者预后的关系,采用临床相关性分析研究结直肠癌与临床资料的相关性。使用Timer数据库gene模块分析探究MAD2L1与免疫细胞群之间的关系。使用correlation模块评估与免疫检查点水平的相关性。使用correlation模块进行免疫细胞浸润的关联分析,分析结直肠癌组织中MAD2L1的表达与免疫细胞浸润的关系。结果 与正常组织相比,结直肠癌组织中MAD2L1表达上调;MAD2L1高表达组与低表达组结直肠癌患者相比,N分期患者比例不同,差异具有统计学意义(P<0.05)。预后分析显示,MAD2L1高表达组的患者生存期、无进展生存期均高于低表达组的患者,差异具有统计学意义(P<0.05)。多因素COX回归分析显示,年龄和T分期可作为影响结直肠癌患者预后的独立预后因子(P<0.05)。MAD2L1与结直肠癌中CD8^(+)T细胞(结肠癌:r=0.315,P<0.001;直肠癌r=0.352,P<0.001)、嗜中性粒细胞(结肠癌:r=0.195,P<0.001;直肠癌:r=0.278,P<0.001)浸润水平均呈正相关,与CD4^(+)T细胞(结肠癌:r=-0.174,P<0.001;直肠癌:r=-0.381,P<0.001)浸润水平呈负相关。其中还与结肠癌中B细胞水平(r=0.125,P<0.05)呈正相关。在结肠癌中,MAD2L1与PD-L1(r=0.159,P<0.05)呈正相关。在直肠癌中,MAD2L1与PD-1(r=-0.241,P<0.05)呈负相关。结论 MAD2L1在结直肠癌中高表达,与结直肠癌良好的预后及肿瘤免疫浸润相关,可能是结直肠癌患者潜在的治疗靶点。 展开更多
关键词 mad2l1 结直肠癌 免疫浸润 预后
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MAD2L1在肺腺癌中的表达及对免疫微环境的影响 被引量：4
3
作者 刘迎博 刘晓红 +1 位作者 茹美华 李建强 《肿瘤防治研究》 CAS CSCD 2022年第6期586-592,共7页
目的探讨MAD2L1在肺腺癌组织中的表达对患者预后及免疫微环境的影响。方法通过TCGA和GEO数据库分析在肺腺癌组织及正常肺组织样本中MAD2L1的表达差异,生存分析评价其表达水平与患者预后的关系,StarBase数据库构建肺腺癌miRNA-MAD2L1调... 目的探讨MAD2L1在肺腺癌组织中的表达对患者预后及免疫微环境的影响。方法通过TCGA和GEO数据库分析在肺腺癌组织及正常肺组织样本中MAD2L1的表达差异,生存分析评价其表达水平与患者预后的关系,StarBase数据库构建肺腺癌miRNA-MAD2L1调控网络,分析肺腺癌组织中MAD2L1的表达与免疫细胞浸润的关系。结果肺腺癌组织中MAD2L1表达上调且MAD2L1高表达与肺腺癌的病理分期、淋巴结转移显著相关,MAD2L1表达水平高的肺腺癌患者预后较差,miR-101-3p/MAD2L1轴被确定为MAD2L1在肺腺癌中最有潜力的上游调控相关途径,MAD2L1表达水平与肿瘤免疫细胞浸润和免疫检查点表达呈显著相关。结论MAD2L1在肺腺癌组织中高表达,与肺腺癌不良预后及肿瘤免疫浸润相关,可作为肺腺癌患者治疗的潜在靶点。 展开更多
关键词 mad2l1 肺腺癌 预后 免疫浸润 免疫微环境
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结直肠癌组织中MAD2L1的表达及与预后的关系
4
作者 章芳芳 李宁君 +1 位作者 陈福娟 朱伟君 《临床与实验病理学杂志》 CAS 北大核心 2024年第6期649-651,655,共4页
目的探讨有丝分裂阻滞缺陷蛋白2(mitotic arrest deficient 2-like 1,MAD2L1)在结直肠癌组织中的表达及与预后的关系。方法收集259例结直肠癌患者的临床病理资料,采用免疫组化SP法检测结直肠癌组织中MAD2L1的表达,分析MAD2L1表达与结直... 目的探讨有丝分裂阻滞缺陷蛋白2(mitotic arrest deficient 2-like 1,MAD2L1)在结直肠癌组织中的表达及与预后的关系。方法收集259例结直肠癌患者的临床病理资料,采用免疫组化SP法检测结直肠癌组织中MAD2L1的表达,分析MAD2L1表达与结直肠癌临床病理特征的关系及其对患者5年生存期的影响。结果TCGA和GTEx数据库分析结果显示,结直肠癌组织中MAD2L1 mRNA表达量显著高于癌旁组织;免疫组化结果显示,结直肠癌组织中MAD2L1表达水平均高于癌旁正常组织。259例结直肠癌组织中148例呈MAD2L1高表达,111例呈低表达。生存分析结果显示,MAD2L1低表达组患者5年生存率高于高表达组(67.57%vs 49.32%);按病变部位分析,MAD2L1高表达的结肠癌和直肠癌患者5年生存率均低于低表达患者(47.25%vs 73.21%;52.53%vs 65.38%)。结论MAD2L1在结直肠癌组织中高表达,可能与患者预后不良有关,是预测结直肠癌的潜在标志物。 展开更多
关键词 结直肠肿瘤 mad2l1 预后 总生存率
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SP600125对人宫颈癌HeLa细胞增殖和侵袭的影响 被引量：1
5
作者 莫艳秀 姚飞虹 +2 位作者 刘峻彤 胡紫昂 李木兰 《肿瘤防治研究》 CAS CSCD 2022年第4期304-313,共10页
目的探讨SP600125对人宫颈癌HeLa细胞的增殖周期、凋亡以及侵袭的影响。方法采用CCK-8法检测不同时间点不同浓度的SP600125作用后HeLa细胞的增殖状态。确定20μmol/L的SP600125用于后续实验。利用平板克隆形成实验检测细胞增殖能力,DAP... 目的探讨SP600125对人宫颈癌HeLa细胞的增殖周期、凋亡以及侵袭的影响。方法采用CCK-8法检测不同时间点不同浓度的SP600125作用后HeLa细胞的增殖状态。确定20μmol/L的SP600125用于后续实验。利用平板克隆形成实验检测细胞增殖能力,DAPI染色观察细胞核形态,流式细胞仪检测细胞周期和凋亡,细胞划痕和Transwell法检测细胞迁移和侵袭能力,qRT-PCR和Western blot分别检测SP600125作用不同时间点后各组细胞的p53、Mad2L1和CDC20 mRNA和蛋白水平的变化。结果与对照组(0.1%DMSO)相比,10、20、30、40、50μmol/L SP600125作用24 h均能使细胞的增殖活性降低。与对照组相比,各SP600125处理组的细胞凋亡率明显增加,且G_(2)/M期细胞比例增加(P<0.001),而SP600125处理HeLa细胞24和48 h的G_(0)/G_(1)期比例减少(P<0.001),其细胞的克隆数、迁移和侵袭能力明显下降(P<0.001);qRT-PCR和Western blot结果显示Mad2L1 mRNA和蛋白表达明显下降(P<0.05),p53和CDC20 mRNA和蛋白则呈上升趋势(P<0.01)。结论SP600125可通过上调p53和CDC20以及下调Mad2L1的表达诱导宫颈癌HeLa细胞周期阻滞于G_(2)/M期并促进细胞凋亡来抑制细胞的增殖、迁移和侵袭。 展开更多
关键词 SP600125 人宫颈癌HElA细胞 mad2l1 CDC20
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