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人食管下括约肌中胃动素受体的表达及其对胃动素的收缩反应 被引量：8
1
作者 王艳瑜 刘俊峰 +4 位作者 龚海峰 高庆敏 陈勇 王福顺 李保庆 《中华实验外科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2011年第4期589-591,共3页
目的应用人食管下括约肌的套索纤维和钩状纤维，观察胃动素受体（MTLR）在套索纤维和钩状纤维的表达和胃动素对套索纤维和钩状纤维的收缩作用。方法采用逆转录一聚合酶链反应（RT—PCR）技术和Western blot技术观察人食管下括约肌套索... 目的应用人食管下括约肌的套索纤维和钩状纤维，观察胃动素受体（MTLR）在套索纤维和钩状纤维的表达和胃动素对套索纤维和钩状纤维的收缩作用。方法采用逆转录一聚合酶链反应（RT—PCR）技术和Western blot技术观察人食管下括约肌套索纤维和钩状纤维MTLR的表达，应用倒置显微镜观察胃动素引起的套索纤维和钩状纤维长度的变化。结果胃动素受体在套索纤维和钩状纤维均有表达，套索纤维表达高于钩状纤维；胃动素对套索纤维和钩状纤维均存在收缩作用，胃动素对套索纤维的收缩作用强于钩状纤维。结论胃动素通过人食管下括约肌套索纤维和钩状纤维的胃动素受体，激发食管下括约肌的收缩，其对套索纤维的收缩作用大于钩状纤维。 展开更多
关键词 胃动素受体 食管下括约肌 收缩 逆转录-聚合酶链反应 WESTERN BLOT
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广西五步蛇毒小肽的分离纯化及抗肿瘤作用 被引量：4
2
作者 李映新 雷丹青 周先果 《中国临床药理学与治疗学》 CAS CSCD 2007年第2期187-190,共4页
目的:从广西五步蛇毒分离出小分子活性组分,研究其对肿瘤细胞株的抑制作用。方法:经Sephadex G-75凝胶过滤、超滤和DEAE-Sepharose-CL-6B离子交换层析法从广西五步蛇毒中分离纯化获得一种小分子的肽类,采用MTT法检测其对多种体外培养的... 目的:从广西五步蛇毒分离出小分子活性组分,研究其对肿瘤细胞株的抑制作用。方法:经Sephadex G-75凝胶过滤、超滤和DEAE-Sepharose-CL-6B离子交换层析法从广西五步蛇毒中分离纯化获得一种小分子的肽类,采用MTT法检测其对多种体外培养的癌细胞株的生长抑制情况。结果:从广西五步蛇毒中分离纯化得到的单一的小肽,其对卵巢癌细胞株(A2780)、人胃癌细胞(SGC-7901)以及鼠乳腺癌细胞株(782)有抑制作用并呈明显的剂量依赖关系,作用24h的IC50分别为0.264、0.648、0.173μg/mL。结论:应用凝胶过滤和离子交换层析方法可以从广西五步蛇毒中分离出单一组分的小分子肽,其对多种肿瘤细胞的生长有抑制作用。 展开更多
关键词 广西五步蛇毒 小肽 抗肿瘤 MTT
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大鼠肠肌间神经元胃动素受体的表达及胃动素引起神经元内钙信号的机制 被引量：8
3
作者 杨侠 董蕾 杨浩 《四川大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2006年第5期683-686,共4页
目的观察大鼠肠肌间神经元胃动素受体(MTLR)的表达,并探讨胃动素引起神经元内钙信号的机制。方法采用免疫荧光双标技术观察大鼠肠肌间神经元MTLR的表达;应用激光共聚焦显微镜技术检测不同药物处理组胃动素引起的单个神经元内Ca2+荧光强... 目的观察大鼠肠肌间神经元胃动素受体(MTLR)的表达,并探讨胃动素引起神经元内钙信号的机制。方法采用免疫荧光双标技术观察大鼠肠肌间神经元MTLR的表达;应用激光共聚焦显微镜技术检测不同药物处理组胃动素引起的单个神经元内Ca2+荧光强度的变化。结果大鼠肠肌间神经元呈MTLR免疫反应阳性表达;在Hank's液中,10-6mol/L胃动素可引起神经元内Ca2+浓度的显著升高,其峰高(峰值减去静息值)为30.6±3.7,荧光强度相对变化百分比为(100.8±18.4)%。在D-Hank's液(去除细胞外Ca2+)中或用L型钙离子通道阻断剂维拉帕米预处理细胞后,胃动素可轻度升高胞内Ca2+浓度。与单独应用胃动素组相比差异有统计学意义(P<0.05)。当分别用G蛋白拮抗剂NEM和PLC抑制剂Compound48/80预处理细胞后再加入胃动素,胞内Ca2+浓度升高的程度明显降低,与单独应用胃动素组相比差异有统计学意义(P<0.05)。当用PKC抑制剂D-鞘氨醇预处理细胞后,再加入胃动素,其峰高和荧光强度相对变化百分比同单独应用胃动素组相比差异无统计学意义(P>0.05)。结论大鼠肠肌间神经元能自身表达MTLR。胃动素可明显升高神经元内Ca2+浓度,胞内Ca2+浓度的升高既源于外钙的内流又源于内钙的释放。外钙的内流主要通过L型Ca2+通道,G蛋白偶联型MTLR-PLC-IP3途径参与细胞内钙的释放。 展开更多
关键词 胃动素 胃动素受体 肠肌间神经元 钙信号
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mTLR-2基因的克隆及其在毕赤酵母中的表达 被引量：4
4
作者 赵文忠 江海燕 +2 位作者 刘艳君 朱平 富宁 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2004年第4期488-490,共3页
目的 :克隆mTLR 2基因 ,并在毕赤酵母中的表达其融合蛋白。方法 :采用RT PCR从鼠肝脏中扩增mTLR 2全基因 ,并将其克隆到T载体中 ,测序验证。将目的基因编码序列插入毕赤酵母表达载体pPICZαC中 ,构建重组质粒 ,并转化毕赤酵母。重组酵母... 目的 :克隆mTLR 2基因 ,并在毕赤酵母中的表达其融合蛋白。方法 :采用RT PCR从鼠肝脏中扩增mTLR 2全基因 ,并将其克隆到T载体中 ,测序验证。将目的基因编码序列插入毕赤酵母表达载体pPICZαC中 ,构建重组质粒 ,并转化毕赤酵母。重组酵母以PCR、RT PCR验证 ,表达的重组蛋白用SDS PAGE和Westernblot进行分析。结果 :克隆了mTLR 2全基因(AY179346 ) ,与已发表的mTLR 2基因的同源性为 99.84 %。构建了重组表达质粒pPICZ mTLR 2。SDS PAGE和Westernblot分析显示 ,在相对分子质量 (Mr)为约 970 0 0处出现 1条特异性蛋白带 ,且能与兔抗mTLR 2抗体发生反应。结论 :克隆了mTLR 2全基因 ,并在毕赤酵母中获得表达。 展开更多
关键词 mtlr-2 基因克隆 毕赤酵母 表达
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抗小鼠TLR2胞外段单表位抗体TSP-2对酵母多糖诱发小鼠腹膜炎的影响 被引量：5
5
作者 杨翠兰 赵文忠 +1 位作者 黄恩平 罗深秋 《南方医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第8期1521-1524,共4页
目的观察抗小鼠TLR2胞外段(mTLR2ECD)单表位抗体TSP-2对酵母多糖诱发的小鼠腹膜炎的主要作用。方法用腹腔灌洗、细胞计数及特异染色、免疫组化、ELISA等各种方法检测了抗体TSP-2对模型动物的扭身次数、腹腔灌洗液的伊文思兰渗出、腹腔... 目的观察抗小鼠TLR2胞外段(mTLR2ECD)单表位抗体TSP-2对酵母多糖诱发的小鼠腹膜炎的主要作用。方法用腹腔灌洗、细胞计数及特异染色、免疫组化、ELISA等各种方法检测了抗体TSP-2对模型动物的扭身次数、腹腔灌洗液的伊文思兰渗出、腹腔白细胞浸润的数量变化、腹腔肥大细胞脱颗粒情况以及腹腔灌洗液离心上清中PAF和TNFα水平的影响。结果与PBS处理组和正常兔IgG组相比,抗体TSP-2能促使小鼠因腹腔炎症引起的扭身次数减少,腹腔灌洗液中伊文思蓝OD值降低,腹腔灌洗液中白细胞渗透减少以及C48/80诱导的腹腔肥大细胞脱颗粒降低。结论抗体TSP-2可能通过对肥大细胞脱颗粒的抑制作用减轻酵母多糖诱导的小鼠腹膜炎炎症症状。 展开更多
关键词 mtlr2 TSP-2 酵母多糖 腹膜炎
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转录因子MtlR介导嗜热厌氧杆菌SCUT27木糖代谢途径的激活
6
作者 陈莉莉 屈春云 +1 位作者 傅宏鑫 王菊芳 《生物技术》 CAS 2021年第4期321-328,共8页
[目的]探究嗜热厌氧杆菌Thermoanaerobacterium aotearoense SCUT27(SCUT27)木糖代谢途径的调控机制,强化葡萄糖和木糖共利用。[方法]通过q PCR、RT-PCR对木糖代谢相关基因xyl A、xyl B和xyl T的共转录及功能进行验证,然后利用基因敲除... [目的]探究嗜热厌氧杆菌Thermoanaerobacterium aotearoense SCUT27(SCUT27)木糖代谢途径的调控机制,强化葡萄糖和木糖共利用。[方法]通过q PCR、RT-PCR对木糖代谢相关基因xyl A、xyl B和xyl T的共转录及功能进行验证,然后利用基因敲除技术构建rok、lac I和mtlR的敲除菌,以探究其对木糖代谢的调控,最后构建mtlR的过表达菌株,强化葡萄糖和木糖的共利用。[结果]RT-PCR结果显示xyl A、xyl B和xyl T共转录;敲除xyl AB后,木糖利用能力下降83.72%;当敲除rok和lac I后,木糖利用能力变化不显著;敲除mtlR后,木糖利用能力下降67.56%,xyl AB和xyl T的转录水平分别下降约39.67%和86.93%。过表达mtlR后,xyl AB的转录水平提高约44.75%,木糖利用能力提高25.71%。[结论]转录因子MtlR是SCUT27木糖代谢的正调控因子,过表达mtlR可强化SCUT27的葡萄糖和木糖共利用。 展开更多
关键词 Thermoanaerobacterium aotearoense 木糖代谢 木糖操纵子 转录因子mtlr
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小鼠睾丸特异表达新基因(mtLR1)在大肠杆菌中的表达
7
作者 聂东宋 周延凯 +1 位作者 刘宇 曹佐英 《湖南理工学院学报（自然科学版）》 CAS 2006年第4期67-69,89,共4页
根据已经克隆的mtLR1基因序列,采用RT-PCR的方法获得mtLR1基因。将所得的PCR产物插入原核表达载体pMAL-P-2x中,得重组质粒(pMAL-P-2x/mtLR1)并转化大肠杆菌(E．coli)DH5α．经IPTG诱导表达,SDS-PAGE电泳分析显示,重组蛋白得到了正确表达... 根据已经克隆的mtLR1基因序列,采用RT-PCR的方法获得mtLR1基因。将所得的PCR产物插入原核表达载体pMAL-P-2x中,得重组质粒(pMAL-P-2x/mtLR1)并转化大肠杆菌(E．coli)DH5α．经IPTG诱导表达,SDS-PAGE电泳分析显示,重组蛋白得到了正确表达,表达的融合蛋白占菌体蛋白总量的52％,分子质量约为73 kDa。mtLR1蛋白的高效表达,为研究其生物学功能和制备单克隆抗体奠定了基础。 展开更多
关键词 mtlr1 表达与纯化 大肠杆菌
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小鼠TLR-2N末端基因的克隆表达和抗体制备 被引量：1
8
作者 杨翠兰 赵文忠 +2 位作者 刘艳君 朱平 富宁 《南方医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2006年第11期1609-1611,1615,共4页
目的克隆mTLR-2基因氨基端序列,并表达和纯化N端融合蛋白,制备抗mTLR-2N末端的多克隆抗体。方法采用PCR技术扩增编码mTLR-2N端1～153氨基酸的基因,并将其克隆到pET32A载体中,测序验证;用大肠杆菌表达融合蛋白,并以Probond树脂柱纯化;免... 目的克隆mTLR-2基因氨基端序列,并表达和纯化N端融合蛋白,制备抗mTLR-2N末端的多克隆抗体。方法采用PCR技术扩增编码mTLR-2N端1～153氨基酸的基因,并将其克隆到pET32A载体中,测序验证;用大肠杆菌表达融合蛋白,并以Probond树脂柱纯化;免疫家兔制备多克隆抗体,采用免疫组化、流式细胞术及间接ELISA检测抗体特异性及效价。结果成功构建了融合表达载体pET-N,表达和纯化了相应的融合蛋白,所制备多克隆抗体可与pGEX-N表达的融合蛋白反应,并可结合表达TLR-2的RAW264.7及转染mTLR-2全长基因的CHO细胞。结论获得了mTLR-2N末端重组融合蛋白及其可与天然mTLR-2结合的多克隆抗体。 展开更多
关键词 mtlr-2 重组蛋白 抗体 克隆 基因表达
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TLR4在鼠感染疾病模型的作用机理
9
作者 弓莉 王元占 +2 位作者 蔡建平 杨培梁 朱玉峰 《中国比较医学杂志》 CAS 2008年第12期57-60,共4页
TLRs是宿主识别各种病原体相关分子模式、并激活和调节天然免疫-适应性免疫反应的一类模式识别受体。在哺乳动物发现13种TLRs成员;已利用近交系小鼠对其作用机理进行了深入研究,本文简要综述TLR4在抗细菌、病毒、寄生虫感染中的作用机理。
关键词 TLRS 感染疾病模型 鼠TLR4 感染
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