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MT1F基因过表达重组质粒构建及转染结肠癌RKO细胞的鉴定
1
作者 严东旺 王权 +3 位作者 李大卫 温玉刚 唐华美 彭志海 《中华实验外科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2011年第12期2162-2164,共3页
目的构建MT1F基因过表达重组质粒，并转染结肠癌细胞株。方法Real—time聚合酶链反应（PCR）检测和筛选6株结肠癌细胞MT1FmRNA表达。采用全基因合成法合成MT1F编码区序列，分别克隆人pEGFP和pcDNA3．1（＋）载体的C1末端，构建重组质粒p... 目的构建MT1F基因过表达重组质粒，并转染结肠癌细胞株。方法Real—time聚合酶链反应（PCR）检测和筛选6株结肠癌细胞MT1FmRNA表达。采用全基因合成法合成MT1F编码区序列，分别克隆人pEGFP和pcDNA3．1（＋）载体的C1末端，构建重组质粒pEGFP-C1-MT1F和pcDNA3．1-MT1F，DNA测序，以500ul脂质体质粒复合物转染RKO细胞，G418（400mg／L）维持筛选，Westernblot（鼠抗人MT单抗1：500、鼠抗GFP抗体1：1000）等检测目的基因表达效率。结果6株细胞中，RKO细胞MT1FmRNA水平最低。测序表明MT1F重组质粒构建成功。瞬时和稳定转染RKO细胞后，MT1FmRNA分别升高约600和2000倍，并表达15×10^3的MT蛋白。结论成功构建MT1F基因过表达重组质粒．获得外源性MT1F稳定转染的结肠痛RKO细胞株。 展开更多
关键词 mt1f 结肠癌 基因转染 质粒
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MT1F mRNA在结肠癌组织中的表达及其临床病理意义
2
作者 仇生龙 蔡冬兰 +2 位作者 陈桂明 王敏 严东旺 《现代生物医学进展》 CAS 2016年第7期1257-1261,共5页
目的:探讨MT1F mRNA在结肠癌组织中的表达及其临床病理意义。方法:采用Taq Man探针实时荧光定量Real-time PCR检测40例结肠癌及对应正常粘膜组织中MT1F mRNA的表达,并通过免疫组化检测Metallothionein(MT)的蛋白表达。结果:82.5%(33/40... 目的:探讨MT1F mRNA在结肠癌组织中的表达及其临床病理意义。方法:采用Taq Man探针实时荧光定量Real-time PCR检测40例结肠癌及对应正常粘膜组织中MT1F mRNA的表达,并通过免疫组化检测Metallothionein(MT)的蛋白表达。结果:82.5%(33/40例)的结肠癌组织MT1F mRNA表达较对应正常组织明显下调,降低2.4倍至113倍不等。MT1F mRNA水平与结肠癌患者的年龄、性别、肿瘤部位、肉眼形态、直径、分化及Dukes分期无关。在MT1F mRNA低表达的病例中,癌组织MT蛋白表达低于对应正常组织(P<0.05)。结论:结肠癌组织MT1F mRNA水平显著下调,但与结肠癌的临床病理特征无关。 展开更多
关键词 mt1f 结肠癌 临床病理意义
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