恶性疟原虫海南分离株(FCC1/HN)裂殖子表面蛋白2(MSA2)真核表达载体的构建 被引量：1

1

作者 刘彦文 余新炳 +3 位作者 徐劲 罗树红 方建民 张静 《中国人兽共患病杂志》 CSCD 北大核心 2000年第2期29-31,共3页

目的构建恶性疟原虫海南分离株（FCC1／HN）裂殖子表面蛋白MSA2的真核表达质粒pcDNA3／MSA2，为疟疾核酸疫苗及蛋白疫苗的研制奠定基础。方法采用PCR技术对FCC1／HN基因组DNAMSA2基因进行扩增，扩增产物经纯化后用BamHI和EcoRI双酶切，... 目的构建恶性疟原虫海南分离株（FCC1／HN）裂殖子表面蛋白MSA2的真核表达质粒pcDNA3／MSA2，为疟疾核酸疫苗及蛋白疫苗的研制奠定基础。方法采用PCR技术对FCC1／HN基因组DNAMSA2基因进行扩增，扩增产物经纯化后用BamHI和EcoRI双酶切，然后走向克隆入真核表达质粒pcDNA3，连接产物转化大肠杆菌TG1，再用相同的内切酸酶切和PCR扩增对重组子进行鉴定。结果筛选出的重组子为编码PCC1／HCMSA2基因片段的重组质粒pcDNA3／MSA2。结论编码FCC1／HNMSA2基因片段真该表达质粒pcDNA3／MSA2的构建，为疟疾核酸疫苗及蛋白疫苗的研制奠定基础。 展开更多

关键词 恶性疟原虫 聚合酶链反应 msa2 克隆 疟疾疫苗

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恶性疟原虫海南、云南、安徽株裂殖子表面抗原MSA2基因的克隆和序列分析 被引量：2

2

作者 李明 谢毅 +2 位作者 李英杰 任大明 毕惠祥 《第一军医大学学报》 CSCD 1995年第2期94-98,共5页

应用ＰＣＲ技术扩增并克隆了恶性疟原虫海南、云南、安徽三个地理株的ＭＳＡ２基因，测定并分析了全基因序列。结果表明，海南、云南、安徽株ＭＳＡ２基因序列完全相同，全长为７９５ｂｐ，编码２６４个氨基酸，与ＦＣＱ－２７／ＰＮＧ... 应用ＰＣＲ技术扩增并克隆了恶性疟原虫海南、云南、安徽三个地理株的ＭＳＡ２基因，测定并分析了全基因序列。结果表明，海南、云南、安徽株ＭＳＡ２基因序列完全相同，全长为７９５ｂｐ，编码２６４个氨基酸，与ＦＣＱ－２７／ＰＮＧ株ＭＳＡ２高度同源。对抗原表位进行多参数综合分析表明，我国虫株除具有国外已确定的抗原表位ＳＴＮＳ、ＤＴＰＴＡＴＥ外，在第５３—７２位氢基酸间可能具有一个新的抗原表位。 展开更多

关键词 疟原虫 裂殖子 表面抗原 基因序列分析 msa2

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恶性疟原虫FCC-1/HN株裂殖子表面抗原2(MSA-2)基因在卡介苗BCG中的表达 被引量：7

3

作者 郑春福 吴少庭 +2 位作者 陈雅棠 高世同 林敏 《寄生虫与医学昆虫学报》 CAS 2002年第4期193-197,共5页

目的 :裂殖子表面抗原 2基因 (Merozoitesurfaceantigen 2 ,MSA2 )是恶性疟原虫的一种保护性抗原 ,为研究其重组BCG疫苗的保护作用 ,首先探讨携带有恶性疟原虫FCC 1 HN株MSA2基因的重组分枝杆菌-大肠杆菌穿梭质粒pBCG MSA2在卡介苗 (Bac... 目的 :裂殖子表面抗原 2基因 (Merozoitesurfaceantigen 2 ,MSA2 )是恶性疟原虫的一种保护性抗原 ,为研究其重组BCG疫苗的保护作用 ,首先探讨携带有恶性疟原虫FCC 1 HN株MSA2基因的重组分枝杆菌-大肠杆菌穿梭质粒pBCG MSA2在卡介苗 (BacillusCalmetteGuerin ,BCG)中的表达情况。方法 :采用电穿孔转化法将重组质粒pBCG MSA2导入BCG中 ,通过卡那霉素抗性筛选并经PCR鉴定的重组BCG培养于Middlebrook 7H9Broth (M7H9)培养基 ,并添加 10 %M7H9EnrichmentADC和 0 0 5 %Tween80 ,4周后于 4 5℃进行诱导表达 ,表达产物进行十二烷基磺酸钠 -聚丙烯酰胺凝胶电泳 (Sodiumdodecylsulfatepolyacrylamidegelelectrophoresis,SDS PAGE)及免疫印迹 (Western blot)分析。结果 :SDS PAGE及Western blot分析结果均显示在约 31kDa的位置上可见明显的蛋白条带 ,并与MSA2基因编码序列推断的分子量相符。结论 :恶性疟原虫裂殖子表面抗原 2可在BCG中表达 。 展开更多

关键词 恶性疟原虫 FCC-1/HN株 裂殖子 表面抗原2 msa-2 基因 卡介苗BCG 表达 穿梭质粒

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牛巴贝斯虫新疆株MSA-2c基因重组质粒的构建、真核表达及其免疫反应性研究 被引量：11

4

作者 袁江玲 马素贞 +5 位作者 沈炯玉 黄家雨 苏贵成 简子健 张兰江 李晓军 《新疆农业大学学报》 CAS 2008年第4期79-82,共4页

根据GenBank公布的牛巴贝斯虫裂殖子表面抗原MSA-2c基因序列设计引物,采用PCR方法从患病牛的全血基因组中扩增得到798 bp的MSA-2c基因片段,将其克隆至真核表达载体pcDNA3.1(+),测序验证后,小白鼠尾静脉注射瞬时表达MSA-2c基因,取其肝脏... 根据GenBank公布的牛巴贝斯虫裂殖子表面抗原MSA-2c基因序列设计引物,采用PCR方法从患病牛的全血基因组中扩增得到798 bp的MSA-2c基因片段,将其克隆至真核表达载体pcDNA3.1(+),测序验证后,小白鼠尾静脉注射瞬时表达MSA-2c基因,取其肝脏提取总RNA,采用反转录聚合酶链式反应(RT-PCR)扩增可得到目的条带;用重组质粒pcDNA3.1(+)-MSA-2c肌肉注射免疫小白鼠4次后,将获得的抗血清作为抗体,纯化的GST-MSA-2c融合蛋白作为抗原进行Western-blot检测,可得到抗原-抗体结合产生的特异性条带,表明重组质粒具有免疫学活性。 展开更多

关键词 牛巴贝斯虫 msa-2c基因 瞬时表达 免疫印迹法

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牛巴贝斯虫GST-MSA-2c融合蛋白抗体间接ELISA检测方法的初步建立 被引量：10

5

作者 沈炯玉 马素贞 +1 位作者 简子健 吕伟 《新疆农业大学学报》 CAS 北大核心 2009年第2期58-62,共5页

以纯化的牛巴贝斯虫GST-MSA-2c融合蛋白作为检测抗原,通过优化ELISA反应条件,初步建立了检测牛巴贝斯虫血清特异性抗体的间接ELISA方法。方阵试验确定的GST-MSA-2C抗原的最适包被浓度为2.5μg/mL,血清最佳稀释倍数为20倍,ELISA阳性反应... 以纯化的牛巴贝斯虫GST-MSA-2c融合蛋白作为检测抗原,通过优化ELISA反应条件,初步建立了检测牛巴贝斯虫血清特异性抗体的间接ELISA方法。方阵试验确定的GST-MSA-2C抗原的最适包被浓度为2.5μg/mL,血清最佳稀释倍数为20倍,ELISA阳性反应的临界值为OD450≥0.347,批内和批间重复试验的变异系数均小于10%。经对多例血清检测表明,所建ELSIA检测法重复性好、特异性强、灵敏度高。 展开更多

关键词 牛巴贝斯虫 msa-2C 融合蛋白 间接 ELISA

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新疆牛巴贝斯虫病的流行病学调查 被引量：4

6

作者 简子健 马素贞 +3 位作者 孙其喆 沈炯玉 吕伟 苗中秋 《新疆农业科学》 CAS CSCD 北大核心 2011年第11期2129-2133,共5页

【目的】2006～2008年对全疆14个地州的牛巴贝斯虫病进行流行病学调查。【方法】使用已建立的牛巴贝斯虫病间接ELISA检测方法,以纯化的重组蛋白GST-MSA-2作为抗原。【结果】(1)新疆存在着牛巴贝斯虫病。在2006年采集的278份牛血清样品中... 【目的】2006～2008年对全疆14个地州的牛巴贝斯虫病进行流行病学调查。【方法】使用已建立的牛巴贝斯虫病间接ELISA检测方法,以纯化的重组蛋白GST-MSA-2作为抗原。【结果】(1)新疆存在着牛巴贝斯虫病。在2006年采集的278份牛血清样品中,阳性血清7份,感染率为2.52%。在2007年的532份牛血清样品中检出阳性血清32份,感染率为3.13%。在2008年的530份牛血清中检出阳性血清43份,感染率为5.28%。(2)2008年在地方流行性疫病区牛巴贝斯虫感染率高达28%。(3)牛巴贝斯虫病所在的地州由2006年的5个扩大到2008年的11个。【结论】新疆牛巴贝斯虫病的感染率逐年上升,疫区面积不断扩大,流行区内感染率激增,牛巴贝斯虫病的防治不容忽视。这是新疆首次利用血清学方法对全疆牛巴贝斯虫病进行大规模的流行病学调查。 展开更多

关键词 牛 牛巴贝斯虫 msa-2c间接酶联免疫吸附试验 流行病学调查 感染率

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南太平洋降水中MSA的纬度分布及其分解的气温敏感性 被引量：3

7

作者 效存德 孙俊英 +3 位作者 秦大河 田立德 Whitlow S Stievernard M 《海洋学报》 CAS CSCD 北大核心 2001年第3期112-116,共5页

对“中国第 1 2次南极考察队”南太平洋航线上降水样品中MSA的分析指出 ,MSA含量由赤道海域向高纬海域呈递增趋势 ,其中在 1 5°S附近海域以及 6 0°～ 6 5°S之间表现为突然上升 ,正好对应上升洋流区 .MSA/nssSO2 -4 比率... 对“中国第 1 2次南极考察队”南太平洋航线上降水样品中MSA的分析指出 ,MSA含量由赤道海域向高纬海域呈递增趋势 ,其中在 1 5°S附近海域以及 6 0°～ 6 5°S之间表现为突然上升 ,正好对应上升洋流区 .MSA/nssSO2 -4 比率与δD密切相关 ,显示MSA向nssSO2 -4 的转化速率敏感地依赖于温度变化 . 展开更多

关键词 甲基磺酸 海洋初级生产力 msa 温度 转化速率 分布 浮游植物

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牛巴贝斯虫巢式PCR诊断方法的建立 被引量：4

8

作者 简子健 马素贞 沈炯玉 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2010年第3期356-358,共3页

根据GenBank发表的XJ-MSA-2c核苷酸序列(登录号:EU328267)设计的2对特异性引物MS-1、MS-2、MS-3以及MS-4,建立牛巴贝斯虫病巢式PCR快速检测方法。在特异性检测试验中,仅从MSA-2c质粒样本中扩增出622、350bp2条目的片段,与预期片段大小相... 根据GenBank发表的XJ-MSA-2c核苷酸序列(登录号:EU328267)设计的2对特异性引物MS-1、MS-2、MS-3以及MS-4,建立牛巴贝斯虫病巢式PCR快速检测方法。在特异性检测试验中,仅从MSA-2c质粒样本中扩增出622、350bp2条目的片段,与预期片段大小相符,而作为对照样本的双芽巴贝斯虫、牛环形泰勒虫、东方巴贝斯虫基因组DNA均无此扩增目的条带出现。第1次和第2次扩增的敏感性分别为1.75、1.75×10-2μg/L。在对46份全血的DNA样本巢式PCR和显微镜检测中,阳性检出率分别为34.8%(16/46)和23.9%(11/46)。结果表明,所建立的巢式PCR方法准确、敏感、特异,作为牛巴贝斯虫病的快速检测和小范围的流行病学调查,具有重要的临床意义。 展开更多

关键词 牛巴贝斯虫 msa-2c 巢式PCR 检测

原文传递

牛巴贝斯虫GST-MSA-2c融合蛋白间接ELISA血清学诊断方法的建立 被引量：4

9

作者 简子健 马素贞 +4 位作者 袁江玲 沈炯玉 吕伟 孙其喆 苗中秋 《新疆农业科学》 CAS CSCD 北大核心 2011年第1期139-142,共4页

【目的与方法】在优化表达牛巴贝斯虫GST-MSA-2c融合蛋白和建立ELISA反应条件的基础上,进一步探讨牛巴贝斯虫GST-MSA-2c融合蛋白及其所建立的ELISA检测方法的特异性,从而建立牛巴贝斯虫GST-MSA-2c融合蛋白间接ELISA血清学检测方法。【... 【目的与方法】在优化表达牛巴贝斯虫GST-MSA-2c融合蛋白和建立ELISA反应条件的基础上,进一步探讨牛巴贝斯虫GST-MSA-2c融合蛋白及其所建立的ELISA检测方法的特异性,从而建立牛巴贝斯虫GST-MSA-2c融合蛋白间接ELISA血清学检测方法。【结果】牛巴贝斯虫GST-MSA-2c融合蛋白间接ELISA检测方法能排除GST的干扰,与其它梨形虫病无交叉反应,与牛巴贝斯虫巢式PCR检测方法的阳性符合率为96%。【结论】所建立的GST-MSA-2c融合蛋白间接ELISA血清学检测方法重复性好、特异性强、灵敏度高。这是国内首次利用重组蛋白抗原建立的牛巴贝斯病血清学诊断方法,为大规模地进行牛巴贝斯虫病的流行病学调查和血清学诊断提供有效的技术手段。 展开更多

关键词 牛巴贝斯虫 裂殖子表面抗原2c 融合蛋白 间接ELISA 建立

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牛巴贝斯虫新疆株MSA-2c基因的克隆表达及其重组蛋白免疫原性 被引量：1

10

作者 简子健 袁江玲 +2 位作者 马素贞 黄家雨 沈炯玉 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第10期1282-1285,共4页

本试验将新疆株牛巴贝斯虫的MSA-2c基因克隆,并构建重组质粒pGEX-4T-2/MSA-2c。利用大肠杆菌原核表达系统进行外源蛋白的表达,并成功诱导出GST-MSA-2c融合蛋白。通过优化诱导条件,得到了较高的可溶性表达;利用亲和层析技术纯化后的重组... 本试验将新疆株牛巴贝斯虫的MSA-2c基因克隆,并构建重组质粒pGEX-4T-2/MSA-2c。利用大肠杆菌原核表达系统进行外源蛋白的表达,并成功诱导出GST-MSA-2c融合蛋白。通过优化诱导条件,得到了较高的可溶性表达;利用亲和层析技术纯化后的重组蛋白皮下免疫试验小鼠。间接ELISA检测发现,免疫接种56 d后,抗重组蛋白的抗体效价达到1∶220000以上。用获得的抗血清进行Western-blot试验,可获得清晰的免疫反应条带。结果表明,本试验所表达的MSA-2c蛋白与文献报道的目的蛋白相符,并具有免疫原性。同时本试验也为建立以MSA-2c重组蛋白作为抗原的血清学诊断体系奠定了基础。 展开更多

关键词 牛巴贝斯虫 msa-2c 重组表达 免疫原性

原文传递

云南省不同地区恶性疟原虫MSA-1、MSA-2和Pf60.1基因多态性研究 被引量：1

11

作者 张国森 杨亚明 +2 位作者 刘慧 张再兴 沈旭 《中国寄生虫学与寄生虫病杂志》 CAS CSCD 北大核心 2001年第6期371-372,共2页

关键词 云南 疟原虫 msa-1 msa-2蛋白 Pf60.1基因 基因多态性

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新疆牛巴贝斯虫MSA-2c可溶性融合蛋白的高效表达 被引量：1

12

作者 简子健 沈炯玉 +3 位作者 马素贞 苗中秋 孙其喆 吕伟 《新疆农业科学》 CAS CSCD 北大核心 2009年第4期835-838,共4页

为了提高新疆牛巴贝斯虫MSA-2c融合蛋白在大肠杆菌中的表达量,研究了不同表达条件对蛋白表达量的影响,包括温度、诱导时间以及诱导剂(IPTG)浓度等。结果表明,大肠杆菌BL21(DE3)在37℃培养约2.5 h后,添加终浓度为1 mmol/L的IPTG,在27℃... 为了提高新疆牛巴贝斯虫MSA-2c融合蛋白在大肠杆菌中的表达量,研究了不同表达条件对蛋白表达量的影响,包括温度、诱导时间以及诱导剂(IPTG)浓度等。结果表明,大肠杆菌BL21(DE3)在37℃培养约2.5 h后,添加终浓度为1 mmol/L的IPTG,在27℃振荡培养8 h时,GST-Tamsl融合蛋白表达量最高,达到3.2mg/mL。用GST-Sepharose 4B亲和层析柱对CST-MSA-2c融合蛋白进行纯化,SDS-PACE检测表明GST-Tamsl融合蛋白大小约为55 KD,与预期的分子量大小一致。MSA-2融合蛋白的优化表达为牛巴贝斯虫病的分子免疫学诊断和亚单位疫苗的研制奠定了基础。 展开更多

关键词 牛巴贝斯虫 msa-2C基因 高效表达 纯化.

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