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噬菌体MS2和φX174的双层琼脂平板和液体培养基扩增方法的建立 被引量:14
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作者 王秋英 赵炳梓 +4 位作者 张佳宝 王一明 张辉 陈效民 龚建东 《土壤》 CAS CSCD 北大核心 2007年第2期297-300,共4页
噬菌体MS2和φX174曾广泛作为指示病毒,用来研究病毒在土柱和田间实验条件下的迁移行为。本文详细介绍了实验室小规模双层琼脂平板扩增和大规模高复数感染法制备纯噬菌体溶液的条件和方法步骤。宿主细菌E.coli(ATCC 15597)的最佳培养时... 噬菌体MS2和φX174曾广泛作为指示病毒,用来研究病毒在土柱和田间实验条件下的迁移行为。本文详细介绍了实验室小规模双层琼脂平板扩增和大规模高复数感染法制备纯噬菌体溶液的条件和方法步骤。宿主细菌E.coli(ATCC 15597)的最佳培养时间为90~120min,而E.coli(ATCC 13706)的最佳培养时间为120~150min,在上述时间段内,它们的生长分别进入对数期。小规模双层琼脂平板扩增方法耗时、耗力,但用高复数感染扩增方法可获取一次大量(约500ml)的高浓度纯噬菌体MS2和φX174溶液,它们的含量分别可达1011pfu/ml和108pfu/ml。 展开更多
关键词 噬菌体 ms2 φX174 扩增方法和步骤
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MS2噬菌体衣壳蛋白与包装位点结合特异性及其生物学应用进展 被引量:10
2
作者 孙士鹏 刘贵建 《生物技术通讯》 CAS 2014年第2期259-262,共4页
MS2噬菌体为正义单链RNA噬菌体,基因组含有3569个核苷酸,编码成熟酶蛋白、衣壳蛋白、复制酶蛋白和裂解蛋白。MS2噬菌体复制酶编码基因5'端一个由19个碱基组成的茎环结构(又称包装位点)是衣壳蛋白二聚体与RNA相互作用的部位,二者相... MS2噬菌体为正义单链RNA噬菌体,基因组含有3569个核苷酸,编码成熟酶蛋白、衣壳蛋白、复制酶蛋白和裂解蛋白。MS2噬菌体复制酶编码基因5'端一个由19个碱基组成的茎环结构(又称包装位点)是衣壳蛋白二聚体与RNA相互作用的部位,二者相互作用形成的复合物是启动噬菌体自我包装的信号。MS2噬菌体衣壳蛋白与包装位点结合的特异性已被应用于RNA病毒核酸检测的标准物质、校准品和质控品的研究,实时动态监测活细胞内RNA的运动,以及RNA体内递送载体的研究等领域。 展开更多
关键词 ms2噬菌体 衣壳蛋白 包装位点 结合特异性
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MS2和T4噬菌体对短波紫外线抵抗力的比较研究 被引量:4
3
作者 陈昭斌 许欣 +2 位作者 代小英 曾忠铭 张朝武 《现代预防医学》 CAS 北大核心 2007年第3期469-471,共3页
[目的]观察MS2和T4两种噬菌体对短波紫外线(UVC)抵抗力的变化,确定不同强度UVC有效灭活两种噬菌体的时间,为寻找最适噬菌体作指示病毒用于UVC灭活病毒效果的评价提供依据。[方法]噬菌体悬液在一定紫外线强度下照射不同的时间,最后采用... [目的]观察MS2和T4两种噬菌体对短波紫外线(UVC)抵抗力的变化,确定不同强度UVC有效灭活两种噬菌体的时间,为寻找最适噬菌体作指示病毒用于UVC灭活病毒效果的评价提供依据。[方法]噬菌体悬液在一定紫外线强度下照射不同的时间,最后采用双层琼脂平板法分别测定照射前后的噬菌体滴度,绘制照射前后噬菌体的灭活曲线(t-Δlog),并在不同紫外线强度下进行测定。[结果]MS2噬菌体在UVC照射下:370 μW/cm2,10min,或680 μW/cm2,5min,或1130 μW/cm2,3min,达到消毒水平(LIV≥4.00log10),LIV分别为4.49 log10、4.52 log10和4.16 log10;T4噬菌体则为370 μW/cm2,20min,或680 μW/cm2,15min,或1130 μW/cm2,5min,达到消毒水平,LIV分别为4.60 log10,4.02 log10和5.46 log10。[结论]在本实验条件下,对短波紫外线的抵抗力:T4噬菌体﹥MS2噬菌体。 展开更多
关键词 ms2噬菌体 T4噬菌体 短波紫外线 抵抗力 双层琼脂法
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噬菌体MS2和f_2对消毒剂二溴海因抵抗力研究 被引量:3
4
作者 刘晓娟 李虹霖 陈昭斌 《中国消毒学杂志》 CAS 北大核心 2015年第4期323-325,328,共4页
目的研究噬菌体MS2和f2对消毒剂二溴海因的抵抗力,探讨肠道病毒灭活效果的指示病毒。方法采用病毒悬液定量灭活试验方法,比较两种噬菌体对二溴海因的抗力。结果浓度为250 mg/L二溴海因消毒液作用5 min和10 min,对MS2噬菌体的灭活对数值... 目的研究噬菌体MS2和f2对消毒剂二溴海因的抵抗力,探讨肠道病毒灭活效果的指示病毒。方法采用病毒悬液定量灭活试验方法,比较两种噬菌体对二溴海因的抗力。结果浓度为250 mg/L二溴海因消毒液作用5 min和10 min,对MS2噬菌体的灭活对数值分别为3.87和4.36。相同浓度的二溴海因消毒液作用5 min和10 min,对f2噬菌体的灭活对数值为3.25和3.48。二溴海因对f2噬菌体灭活对数值达到4.0以上,需要提高浓度到375 mg/L,且需要作用10 min。结论研究证明,f2噬菌体对二溴海因抗力明显高于MS2噬菌体。 展开更多
关键词 ms2噬菌体 F2噬菌体 二溴海因 抵抗力
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仙台病毒假病毒装甲RNA标准质控品的制备及其应用
5
作者 齐欣尧 李明 +3 位作者 费东亮 孙莉 马跃宇 马鸣潇 《中国生物制品学杂志》 CAS CSCD 2024年第9期1085-1089,1095,共6页
目的基于Ms2噬菌体制备内含仙台病毒(Sendai virus,SeV)RNA的假病毒装甲RNA标准质控品,以期应用于SeV感染的诊断及该病毒的分子生物学安全检测。方法将SeV的L基因片段插入质粒pET-28b-Ms2中,构建重组质粒pET-28b-Ms2-L(SeV)。将重组质... 目的基于Ms2噬菌体制备内含仙台病毒(Sendai virus,SeV)RNA的假病毒装甲RNA标准质控品,以期应用于SeV感染的诊断及该病毒的分子生物学安全检测。方法将SeV的L基因片段插入质粒pET-28b-Ms2中,构建重组质粒pET-28b-Ms2-L(SeV)。将重组质粒转化感受态E.coli BL21(DE3),经IPTG诱导表达重组蛋白,即SeV假病毒装甲RNA标准质控品。将标准质控品置电镜下观察其形态,并进行10%SDS-PAGE分析、抗DNaseⅠ及抗RNsaeA试验、稳定性分析。采用重组酶聚合酶扩增(recombinase polymerase amplification,RPA)技术对SeV、小鼠肝炎病毒(mouse hepatitis virus,MHV)、小鼠肺炎病毒(pneumonia virus of mice,PVM)、汉坦病毒(Hantaan virus,HV)、呼肠弧病毒Ⅲ型(reovirus typeⅢ,ReoⅢ)、小鼠细小病毒(minute virus of mice,MVM)进行检测,验证标准质控品的效果。结果标准质控品于电镜下呈Ms2噬菌体假病毒颗粒结构,相对分子质量约为14000,可有效抵抗DNaseⅠ及RNsaeA的降解。标准质控品于-80℃保存6个月、-20℃保存6个月、28℃保存5、10、15 d后仍具有良好的稳定性。仅SeV可见RPA特异性扩增曲线,其他病毒均未出现扩增曲线。结论本研究构建的SeV假病毒装甲RNA标准质控品具有良好的稳定性及特异性,可作为SeV的各项分子生物学安全检测的阳性对照。 展开更多
关键词 仙台病毒 ms2噬菌体 假病毒 装甲RNA 标准质控品
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猪塞内卡病毒(SVA)和O型口蹄疫病毒双重荧光RT-PCR检测方法中阳性参考品的制备
6
作者 陈信全 张展 +2 位作者 周伟光 张峥嵘 黄慧贤 《广东畜牧兽医科技》 2024年第5期56-60,69,共6页
为制备猪塞内卡病毒(SVA)和O型口蹄疫病毒(FMDV-O)阳性质控品,根据选择的目的基因片段,设计阳性参考品序列,通过基因拼接技术和装甲RNA技术,制备含有口蹄疫O型病毒和塞内卡病毒目的基因的装甲RNA病毒样颗粒,用来作为塞内卡病毒(SVA)和O... 为制备猪塞内卡病毒(SVA)和O型口蹄疫病毒(FMDV-O)阳性质控品,根据选择的目的基因片段,设计阳性参考品序列,通过基因拼接技术和装甲RNA技术,制备含有口蹄疫O型病毒和塞内卡病毒目的基因的装甲RNA病毒样颗粒,用来作为塞内卡病毒(SVA)和O型口蹄疫病毒(FMDV-O)的阳性参考品。结果表明,该阳性质控品无生物传染性,可以真实模拟病毒粒子结构,耐受DNaseI及RNaseA,稳定性高,在-70℃保存18个月,荧光RT-PCR检测结果均无显著差异。本试验制备的含有猪O型口蹄疫病毒和塞内卡病毒目的基因的装甲RNA病毒样颗粒,可以作为SVA和FMDV-O双重荧光RT-PCR检测方法中进行质量控制的阳性参考品。 展开更多
关键词 猪塞内卡病毒 O型口蹄疫病毒 ms2噬菌体 装甲RNA技术 阳性参考品
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GⅠ/GⅡ型诺如病毒两联装甲RNA标准样品的研制 被引量:3
7
作者 王鸣秋 杨俊 +2 位作者 常雨桐 张涛 刘丽娟 《现代食品科技》 CAS 北大核心 2021年第3期286-293,131,共9页
针对目前缺乏适配多项检测标准、稳定、安全的诺如病毒RNA标准样品的问题,研制基于MS2噬菌体内含常见GⅠ/GⅡ型诺如病毒检测靶标两联装甲RNA标准参考样品。人工合成MS2噬菌体成熟酶基因、衣壳蛋白基因、包装位点及GⅠ/GⅡ型诺如病毒靶... 针对目前缺乏适配多项检测标准、稳定、安全的诺如病毒RNA标准样品的问题,研制基于MS2噬菌体内含常见GⅠ/GⅡ型诺如病毒检测靶标两联装甲RNA标准参考样品。人工合成MS2噬菌体成熟酶基因、衣壳蛋白基因、包装位点及GⅠ/GⅡ型诺如病毒靶标基因,克隆于表达载体pET-28a(+)中,构建重组质粒p ET-MS2-NoV。经大肠杆菌BL21诱导表达,先后利用PEG6000、酶处理和丙烯葡聚糖凝胶层析柱纯化表达产物。SDS-PAGE和透射电镜鉴定产物大小及结构,荧光定量PCR检测有无残留核酸。之后对纯化的病毒样颗粒(Virus-like particles,VLPs)开展定值、均匀性和短期稳定性研究。SDS-PAGE结果表明重组质粒在BL21中表达出了目的蛋白,大小在10~15ku之间,与预期一致;纯化后的VLPs无杂蛋白和残留核酸;透射电镜下呈结构完整、大小均一的球状,直径约25 nm。纯化后AR-NoV中GⅠ型和GⅡ型靶标定值结果分别为(4.04±0.62)×10^(7) copies/μL和(6.16±0.30)×10^(7) copies/μL。单因素方差检验证实样品均一性良好,F<F0.05(25,52);短期稳定性研究结果表明AR-No V在37℃至少可稳定保存15 d,25℃至少稳定保存24d。本研究制备的诺如病毒GI/GII型两联装甲RNA标准样品稳定均一,拷贝数高,能够为GⅠ/GⅡ型诺如病毒核酸分子检测提供全过程质控。 展开更多
关键词 诺如病毒 两联装甲RNA ms2噬菌体 标准样品 实时荧光定量RT-PCR
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基于MS2噬菌体病毒样颗粒的RT-PCR检测猪流行性腹泻病毒质控品的制备 被引量:3
8
作者 王国强 马红芳 +6 位作者 曾华辉 贾媛 苏运芳 毛梦迪 刘保光 尚立芝 张振强 《西南农业学报》 CSCD 北大核心 2020年第11期2686-2692,共7页
【目的】利用MS2噬菌体外壳蛋白可在体外自组装并包封外源核酸的特点,制备RT-PCR检测猪流行性腹泻病毒质控品,并研究其稳定性和耐Rnase降解特性。【方法】选择猪流行性腹泻病毒保守性强的N蛋白基因为靶序列,插入到携带有MS2噬菌体外壳... 【目的】利用MS2噬菌体外壳蛋白可在体外自组装并包封外源核酸的特点,制备RT-PCR检测猪流行性腹泻病毒质控品,并研究其稳定性和耐Rnase降解特性。【方法】选择猪流行性腹泻病毒保守性强的N蛋白基因为靶序列,插入到携带有MS2噬菌体外壳蛋白和PAC位点基因的下游,构建重组载体,经原核表达系统,表达重组蛋白,目的蛋白经过硫酸铵和凝胶过滤层析纯化,以及Benzonase核酸酶消化,利用电镜对嵌合蛋白进行物理表征,通过Taqman荧光RT-PCR验证盔甲RNA热稳定性及耐Rnase攻击能力。【结果】成功构建包含MS2噬菌体外壳蛋白、PAC位点和猪流行性腹泻病毒靶基因的重组载体。经过原核表达和纯化,得到均一的、直径为23~28 nm的MS2病毒样颗粒,该颗粒经核酸酶消化、RNA提取和荧光RT-PCR,证实其形成了包封靶基因的盔甲RNA。该盔甲RNA可以耐受Rnase的降解,并且无菌条件下可在37℃稳定存在15 d。【结论】MS2噬菌体外壳蛋白体外包封PEDV N蛋白靶序列制备的病毒样颗粒,可以作为RT-PCR检测猪流行性腹泻病毒的质控品(盔甲RNA),其热稳定性好,耐Rnase攻击,可全程监控整个检测过程。 展开更多
关键词 猪流行性腹泻 ms2噬菌体 盔甲RNA 病毒样颗粒
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Effect of Post-Treatment Conditions on the Inactivation of MS2 Bacteriophage as Indicator for Pathogenic Viruses after the Composting Process 被引量:1
9
作者 Hamidatu S. Darimani Ryusei Ito +1 位作者 Naoyuki Funamizu Amadou H. Maiga 《Journal of Agricultural Chemistry and Environment》 2018年第2期73-80,共8页
A rural model composting toilet system still had some pathogens in the compost after months of operation and hence requires a post-treatment. The aim of the study was to sanitize compost withdrawn from the composting ... A rural model composting toilet system still had some pathogens in the compost after months of operation and hence requires a post-treatment. The aim of the study was to sanitize compost withdrawn from the composting toilet by setting post-treatment conditions. The kinetics inactivation of MS2 bacteriophage, selected as indicator for pathogenic viruses were determined during post-treatment at different temperatures (30°C, 40°C and 50°C) with varying moisture contents (50%, 60% and 70%). As a result, the inactivation rates during the post-treatment were 0.093 - 0.020 h-1, 0.025 - 0.088 h1, 0.447 - 0.100 h-1 at 30°C, 40°C and 50°C respectively. The inactivation rate coefficient (k) values of MS2 bacteriophage depended on higher temperature but not on moisture content. 展开更多
关键词 COMPOSTING TOILET ms2 bacteriophage Temperature Moisture Content POST-TREATMENT
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基于MS2噬菌体lys基因的质粒型条件自溶菌的构建与应用 被引量:1
10
作者 吕敏佳 刘捷婧 +2 位作者 周于婷 陈萍 欧阳永长 《微生物学通报》 CAS CSCD 北大核心 2022年第11期4598-4607,共10页
【背景】传统外源蛋白的原核表达通常需要以超声破碎或者酶解的方式破碎菌体,过程比较烦琐。【目的】构建基于MS2噬菌体lys基因的质粒型条件自溶菌,以简化外源蛋白的获取流程。【方法】从MS2噬菌体中克隆lys基因,构建重组表达质粒,并在... 【背景】传统外源蛋白的原核表达通常需要以超声破碎或者酶解的方式破碎菌体,过程比较烦琐。【目的】构建基于MS2噬菌体lys基因的质粒型条件自溶菌,以简化外源蛋白的获取流程。【方法】从MS2噬菌体中克隆lys基因,构建重组表达质粒,并在大肠杆菌BL21(DE3)中异源表达,以此构建质粒型条件自溶菌,通过生长曲线和菌落形成单位反映自溶菌裂解效率,利用SDS-PAGE检测外源蛋白释放情况。【结果】构建了pBAD-lysBL21(DE3)、pBAD-Opti-lys BL21(DE3)及pCDF-BAD-Opti-lys BL21(DE3)这3种质粒型条件自溶菌。以上自溶菌在阿拉伯糖诱导后其宿主裂解效率均为99.99%以上,CFU结果显示含pCDF-BAD-Opti-lys质粒的宿主裂解效果更优,在此自溶菌BL21(DE3)中表达含His标签的重组绿色荧光蛋白(enhancedgreenfluorescent protein,eGFP),经阿拉伯糖诱导后菌体中约63.00%以上的eGFP释放至胞外,利用Ni-NTA可以直接从培养基中纯化得到约30 kDa的单一目的蛋白。【结论】基于MS2噬菌体lys基因成功构建了阿拉伯糖诱导的质粒型条件自溶菌,此自溶菌能够以自我裂解的方式释放大部分胞内外源蛋白,简化传统外源蛋白获取流程。 展开更多
关键词 ms2噬菌体 lys 自溶菌 蛋白纯化
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常用消毒剂对噬菌体核酸污染的清除效果研究
11
作者 王慧敏 金慧 +3 位作者 陆烨 曹阳 陈冰冰 沈林海 《中国消毒学杂志》 CAS 2023年第11期805-806,809,共3页
目的研究季铵盐消毒剂、75%乙醇、商品核酸清除剂和含氯消毒剂对MS2噬菌体核酸污染的清除效果。方法将1010 PFU;mL的噬菌体悬液滴加在无菌物体表面载体上,2000 mg;L双链季铵盐消毒剂、75%乙醇、核酸清除剂和有效氯1000、2000 mg;L含氯... 目的研究季铵盐消毒剂、75%乙醇、商品核酸清除剂和含氯消毒剂对MS2噬菌体核酸污染的清除效果。方法将1010 PFU;mL的噬菌体悬液滴加在无菌物体表面载体上,2000 mg;L双链季铵盐消毒剂、75%乙醇、核酸清除剂和有效氯1000、2000 mg;L含氯消毒剂作用10或30 min,荧光定量逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测常用消毒剂对MS2噬菌体核酸的清除效果。结果作用30 min,含有效氯2000 mg;L的含氯消毒剂可完全清除MS2噬菌体基因,2000 mg;L双链季铵盐消毒剂、75%乙醇、商品核酸清除剂和有效氯1000 mg;L含氯消毒剂对MS2噬菌体基因清除效果较差。结论用有效氯2000 mg;L的含氯消毒剂可清除病毒核酸。 展开更多
关键词 消毒剂 核酸污染 核酸清除 ms2噬菌体
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RGD序列修饰的MS2噬菌体样颗粒的构建及表达
12
作者 孙士鹏 庞博 刘贵建 《生物技术通讯》 CAS 2015年第3期342-345,共4页
目的:构建并表达衣壳蛋白表面展示有精氨酸-甘氨酸-天冬氨酸(RGD)序列的MS2噬菌体样颗粒,以期获得肿瘤细胞靶向性RNA递送载体。方法:用分子克隆技术将RGD4C编码序列插入MS2衣壳蛋白编码基因,然后构建到p ETDuet-1质粒多克隆位点MCS1上;... 目的:构建并表达衣壳蛋白表面展示有精氨酸-甘氨酸-天冬氨酸(RGD)序列的MS2噬菌体样颗粒,以期获得肿瘤细胞靶向性RNA递送载体。方法:用分子克隆技术将RGD4C编码序列插入MS2衣壳蛋白编码基因,然后构建到p ETDuet-1质粒多克隆位点MCS1上;将含有MS2噬菌体包装位点的pre-let-7编码基因构建到p ETDuet-1质粒多克隆位点MCS2上;重组质粒转化大肠杆菌,表达产物纯化后经琼脂糖凝胶电泳、电子显微镜鉴定。结果和结论:采用分子克隆技术和原核细胞单质粒双表达系统获得表面展示有RGD序列,内部包装有pre-let-7 RNA的MS2噬菌体样颗粒,为体内和体外研究其肿瘤细胞靶向递送和功能奠定了基础。 展开更多
关键词 ms2噬菌体 RGD序列 克隆 肿瘤细胞靶向性
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MS2病毒样颗粒原核表达优化及颗粒稳定性能测试
13
作者 张国广 欧阳莹 +2 位作者 刘颖 黄小君 陈亮 《闽南师范大学学报(自然科学版)》 2014年第4期62-66,共5页
MS2噬菌体病毒样颗粒广泛用于构建RNA病毒检测中的阳性对照品.本文基于已构建的表达载体p CPHA,优化了表达载体在BL21(DE3)细胞中的表达条件.结果表明在LB培养基中,菌液OD600=0.9时,加入IPTG诱导6h,外壳蛋白的表达量达到最大,电镜下观... MS2噬菌体病毒样颗粒广泛用于构建RNA病毒检测中的阳性对照品.本文基于已构建的表达载体p CPHA,优化了表达载体在BL21(DE3)细胞中的表达条件.结果表明在LB培养基中,菌液OD600=0.9时,加入IPTG诱导6h,外壳蛋白的表达量达到最大,电镜下观察到表达出的产物呈现MS2噬菌体病毒颗粒结构,该病毒样颗粒在常温下至少可以保存60 d,64℃温度时30 min内结构保持稳定. 展开更多
关键词 ms2噬菌体 病毒样颗粒 表达量优化 稳定性能
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装载RNA“病毒样”纳米颗粒表面巯基化表达载体的构建及荧光修饰
14
作者 程扬健 梁基选 李庆阁 《Acta Genetica Sinica》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2005年第8期874-878,共5页
以本实验室构建的能够装载外源RNA片段的MS2噬菌体“病毒样”颗粒表达载体为基础,利用定点突变技术将衣壳蛋白基因的第15位密码子由编码苏氨酸突变为胱氨酸。表达产物在35%蔗糖密度梯度处有一目的产物,目的产物在透射电镜下呈球形,直径... 以本实验室构建的能够装载外源RNA片段的MS2噬菌体“病毒样”颗粒表达载体为基础,利用定点突变技术将衣壳蛋白基因的第15位密码子由编码苏氨酸突变为胱氨酸。表达产物在35%蔗糖密度梯度处有一目的产物,目的产物在透射电镜下呈球形,直径大小约为27nm。用马来酰亚胺5′荧光素对表达产物进行化学修饰,经光谱分析、SDSPAGE分析和MALDITOFMS鉴定,证明巯基在表达产物的外表面,并能与马来酰亚胺5′荧光素进行反应。这种携带外源RNA片段的荧光修饰的天然纳米颗粒为制备各种功能性纳米材料提供了新途径。 展开更多
关键词 “病毒样”颗粒 ms2噬菌体 衣壳蛋白 半胱氨酸残基 荧光修饰
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二溴海因对MS2噬菌体和脊髓灰质炎病毒Ⅰ型疫苗株杀灭效果研究 被引量:7
15
作者 陈倩 陈昭斌 陈雯杰 《中国消毒学杂志》 CAS 2018年第3期161-164,共4页
目的比较MS2噬菌体和脊髓灰质炎病毒Ⅰ型(Poliovirus-Ⅰ,PV-Ⅰ)对二溴海因消毒剂的抵抗力大小,筛选用于评价消毒因子灭活肠道病毒效果的指示病毒。方法参考2002年版《消毒技术规范》,灭活病毒效果的评价采用病毒悬液定量灭活试验设计,... 目的比较MS2噬菌体和脊髓灰质炎病毒Ⅰ型(Poliovirus-Ⅰ,PV-Ⅰ)对二溴海因消毒剂的抵抗力大小,筛选用于评价消毒因子灭活肠道病毒效果的指示病毒。方法参考2002年版《消毒技术规范》,灭活病毒效果的评价采用病毒悬液定量灭活试验设计,分别对MS2噬菌体和PV-Ⅰ进行病毒灭活试验。结果二溴海因消毒剂的浓度250 mg/L、作用10 min和375 mg/L、作用5 min,对MS2噬菌体的灭活对数值分别达到4.04和6.11。二溴海因消毒剂的浓度500 mg/L、作用20 min和375 mg/L、作用50 min,对PV-Ⅰ的灭活对数值分别达到4.42和4.27。相同浓度(375 mg/L)的二溴海因消毒剂灭活病毒MS2噬菌体和PV-Ⅰ达到消毒水平(灭活对数值≥4.00)的浓时积值(C·t)分别为1 875 mg·min/L和18 750 mg·min/L。结论病毒MS2噬菌体对二溴海因的抵抗力弱于PV-Ⅰ。 展开更多
关键词 ms2噬菌体 脊髓灰质炎病毒Ⅰ型 二溴海因 抵抗力 灭活对数值 浓时积值
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含口蹄疫病毒IRES RNA病毒样颗粒表达载体的构建 被引量:7
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作者 窦敏 张国广 +3 位作者 于广福 张红心 沈明山 陈亮 《中国生物工程杂志》 CAS CSCD 北大核心 2007年第9期31-35,共5页
利用PCR技术扩增大肠杆菌MS2噬菌体的外壳蛋白和成熟酶蛋白基因,将其克隆到pET32a中构建中间载体pET32a-CP。将口蹄疫病毒(FMDV)的内部核糖体结合位点(IRES)保守序列连接到中间载体噬菌体基因的下游,构建原核表达载体pCPES。将重组质粒p... 利用PCR技术扩增大肠杆菌MS2噬菌体的外壳蛋白和成熟酶蛋白基因,将其克隆到pET32a中构建中间载体pET32a-CP。将口蹄疫病毒(FMDV)的内部核糖体结合位点(IRES)保守序列连接到中间载体噬菌体基因的下游,构建原核表达载体pCPES。将重组质粒pCPES转化宿主菌BL21(DE3),1 mmol/L IPTG诱导表达。蔗糖密度梯度离心纯化表达产物。透射电镜观察到直径大约26 nm的圆形病毒样颗粒。检测病毒样颗粒的稳定性并进行RT-PCR鉴定。结果表明该病毒样颗粒含口蹄疫病毒IRES RNA序列,并且稳定性良好,构建的病毒样颗粒可以作为RNA病毒检测时的标准品和质控品使用。 展开更多
关键词 ms2噬菌体 外壳蛋白 RNA病毒 病毒样颗粒
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装载戊型肝炎病毒核酸片段的重组MS2噬菌体衣壳的制备及其特性研究 被引量:6
17
作者 刘莹 王珅 +1 位作者 周铁忠 高慎阳 《病毒学报》 CAS CSCD 北大核心 2016年第5期538-544,共7页
为制备一种可以实际应用于戊型肝炎病毒(Hepatitis E virus,HEV)核酸检测的质控品,即装载戊型肝炎病毒核酸片段的重组MS2噬菌体衣壳(rHEPC)。根据装甲RNA技术原理,设计将MS2噬菌体基因组的5’端部分非编码区、成熟酶蛋白、衣壳蛋白以及... 为制备一种可以实际应用于戊型肝炎病毒(Hepatitis E virus,HEV)核酸检测的质控品,即装载戊型肝炎病毒核酸片段的重组MS2噬菌体衣壳(rHEPC)。根据装甲RNA技术原理,设计将MS2噬菌体基因组的5’端部分非编码区、成熟酶蛋白、衣壳蛋白以及部分复制酶起始位点等编码基因与HEV ORF2保守区部分基因序列串联并合成目标基因MS2-HEV。随后将MS2-HEV基因克隆、插入原核表达载体pET-28b中构建pET-28b-MS2/HEV重组质粒,转化大肠杆菌感受态细胞BL21(DE3),经过1mM/L IPTG诱导培养4h后,SDS-PAGE鉴定表达情况;将验证的表达菌体超声破碎、离心、取上清、去除核酸杂质后再经超滤离心纯化、浓缩,电镜分析回收浓缩的rHEPC形态;梯度稀释rHEPC进行稳定性鉴定包括DNase I、RNase A抗性以及保存期三方面的稳定性试验检测。SDS-PAGE分析结果表明重组MS2-HEV基因获得有效表达,重组rHEPC纯度高无杂带;RT-PCR鉴定结果表明设计的HEV保守基因序列成功地被包装到重组rHEPC中。进一步的病毒颗粒稳定性试验结果表明制备的rHEPC能够有效抵抗高浓度的DNase I和RNase A的降解作用,并且在-20℃条件下可以持续保存7个月而无明显降解。上述结果表明制备的rHEPC达到了作为RNA病毒核酸检测阳性质控品的基本要求。 展开更多
关键词 戊型肝炎病毒 ms2噬菌体衣壳 装甲RNA技术
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过氧乙酸对MS_2噬菌体灭活效果的初步观察 被引量:5
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作者 张杰 陈昭斌 许欣 《中国消毒学杂志》 CAS 北大核心 2012年第2期87-89,共3页
目的研究过氧乙酸消毒剂对MS2噬菌体的灭活效果。方法采用悬液定量灭活试验方法进行了实验室观察。结果用浓度为200 mg/L的过氧乙酸消毒剂溶液作用60 min,对悬液内MS2噬菌体的平均灭活对数值为2.49。用浓度为1 200、800、500 mg/L的过... 目的研究过氧乙酸消毒剂对MS2噬菌体的灭活效果。方法采用悬液定量灭活试验方法进行了实验室观察。结果用浓度为200 mg/L的过氧乙酸消毒剂溶液作用60 min,对悬液内MS2噬菌体的平均灭活对数值为2.49。用浓度为1 200、800、500 mg/L的过氧乙酸溶液分别作用15、30和60 min,对悬液内MS2噬菌体的平均灭活对数值达到4.0以上。结论在本试验条件下,较低浓度的过氧乙酸溶液对MS2噬菌体灭活效果较好。 展开更多
关键词 过氧乙酸 ms2噬菌体 灭活效果
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乙型脑炎病毒部分NS1基因假病毒的构建
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作者 龙彩韵 王瑞晨 +8 位作者 姚晓慧 武婕慧 付士红 李樊 殷启凯 崔倩倩 许松涛 聂凯 王环宇 《中国人兽共患病学报》 CAS CSCD 北大核心 2024年第3期231-235,242,共6页
目的构建耐核酸酶的含乙型脑炎病毒(Japanese encephalitis virus,JEV)部分非结构蛋白1(Non-structural protein 1,NS1)基因的假病毒,为JEV的实验室核酸检测提供质控品,提高检测质量。方法将JEV部分NS1基因、蚊18S RNA基因和人GAPDH基... 目的构建耐核酸酶的含乙型脑炎病毒(Japanese encephalitis virus,JEV)部分非结构蛋白1(Non-structural protein 1,NS1)基因的假病毒,为JEV的实验室核酸检测提供质控品,提高检测质量。方法将JEV部分NS1基因、蚊18S RNA基因和人GAPDH基因片段次序连接克隆到该质粒上,构建重组载体pET-MS2-JEV;转化大肠杆菌后表达纯化假病毒,并对其进行耐受性和稳定性评估。结果构建了重组载体pET-MS2-JEV,表达获得的假病毒具有耐核酸酶、耐物理化学因子的特性,可在4℃和-20℃条件下稳定保存。结论本研究获得了稳定性好的含JEV部分NS1基因的假病毒,可作为JEV实验室核酸检测的质控品。 展开更多
关键词 乙型脑炎病毒 ms2噬菌体 假病毒
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空气净化装置病毒净化效率试验中病毒滴度测定方法比较
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作者 马向东 叶智坚 +3 位作者 张文欢 覃芳敏 赵爽 朱吉兴 《中国消毒学杂志》 CAS 2024年第5期327-329,334,共4页
目的比较3种不同病毒滴度测定方法在通风系统用空气净化装置病毒净化效率试验中的适用性。方法采用气溶胶染菌,分别使用噬斑法、定量聚合酶链反应法(qPCR)和结合细胞培养的qPCR法(ICC-qPCR)3种病毒滴度测定方法,对5款不同类型空气净化... 目的比较3种不同病毒滴度测定方法在通风系统用空气净化装置病毒净化效率试验中的适用性。方法采用气溶胶染菌,分别使用噬斑法、定量聚合酶链反应法(qPCR)和结合细胞培养的qPCR法(ICC-qPCR)3种病毒滴度测定方法,对5款不同类型空气净化装置的一次净化效率进行对比。结果高压静电净化装置、初效过滤器、中效过滤器的净化效率,3种方法检测结果无统计学差异(P>0.01);紫外线净化装置和高效过滤器的净化效率,qPCR法的检测灵敏性高于与其他2种方法(P<0.01),ICC-qPCR法耗时最短(约5 h),重复性好,RSD值小于其他2种方法,最低为0.01%。结论ICC-qPCR法适用范围广、用时短、结果稳定性高,适用于通风系统用净化装置病毒净化效率的评价。 展开更多
关键词 通风系统 净化装置 净化效率 噬菌体ms2 噬斑法 qPCR法 ICC-qPCR法
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