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Histopathology and TB-PCR kit analysis in differentiating the diagnosis of intestinal tuberculosis and Crohn’s disease 被引量:20
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作者 Joon Mee Kim Hyung Kil Kim +6 位作者 Lucia Kim Suk Jin Choi In Suh Park Jee Young Han Young Chae Chu Kye Sook Kwon Eun Joo Kim 《World Journal of Gastroenterology》 SCIE CAS CSCD 2010年第20期2496-2503,共8页
AIM: To compare the histopathologic features of intestinal tuberculosis (ITB) and Crohn’s disease (CD) and to identify whether polymerase chain reaction for Mycobacterium tuberculosis (TB-PCR) would be helpful for di... AIM: To compare the histopathologic features of intestinal tuberculosis (ITB) and Crohn’s disease (CD) and to identify whether polymerase chain reaction for Mycobacterium tuberculosis (TB-PCR) would be helpful for differential diagnosis between ITB and CD.METHODS: We selected 97 patients with established diagnoses (55 cases of ITB and 42 cases of CD) who underwent colonoscopic biopsies.Microscopic features of ITB and CD were reviewed,and eight pathologic parameters were evaluated.Nine cases of acid fast bacilli culture-positive specimens and 10 normal colonic tissue specimens were evaluated as the positive and negative control of the TB-PCR test,respectively.PCR assays were done using two commercial kits: kit <A> detected IS6110 and MPB64,and kit <B> detected IS6110 only;a manual in-house PCR method was also performed on formalin-fi xed,paraffi n-embedded colonoscopic biopsy specimens.RESULTS: Statistically significant differences were noted between ITB and CD with regard histopathologic criteria: size of granulomas (P = 0.000),giant cells (P = 0.015),caseation necrosis (P = 0.003),confluent granulomas (P = 0.001),discrete granulomas (P = 0.000),and granulomas with lymphoid cuffs (P = 0.037).However,29 cases (52.7%) of ITB showed less than fi ve kinds of pathologic parameters,resulting in confusion with CD.The sensitivities and specificities of the TB-PCR test by kit <A>,kit <B>,and the in-house PCR method were 88.9% and 100%,88.9% and 100%,and 66.7% and 100% in positive and negative controls,respectively.The PCR test done on endoscopic biopsy specimens of ITB and CD were signifi cantly different with kit <A> (P = 0.000) and kit <B> (P = 0.000).The sensitivities and specifi cities of TB-PCR were 45.5% and 88.1%,36.4% and 100%,and 5.8% and 100%,for kit <A> and kit <B> and inhouse PCR method on endoscopic biopsy specimens.Among the 29 cases of histopathologically confusing CD,10 cases assayed using kit <A> and 6 cases assayed using kit <B> were TB-PCR positive.A combination of histologic fi ndings and TB-PCR test 展开更多
关键词 Intestine Tuberculosis Crohn’s disease HISTOPATHOLOGY Polymerase chain reaction KIT IS6110 mpb64
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MPB64分泌蛋白检测鉴定结核分枝杆菌复合群的应用研究 被引量:8
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作者 刘志辉 蔡杏姗 +3 位作者 刘玉美 何霞 罗春明 樊晖 《国际呼吸杂志》 2010年第18期1100-1103,共4页
目的对应用MPB64分泌蛋白检测鉴定结核分枝杆菌复合群进行方法学评价。方法对临床分离菌株。取BacT/ALERT3D系统的液体培养液或改良罗氏固体培养基分离培养菌落室温静置约2h、浊度为1麦氏单位的生理盐水菌悬液0.1ml为检测样本,应用... 目的对应用MPB64分泌蛋白检测鉴定结核分枝杆菌复合群进行方法学评价。方法对临床分离菌株。取BacT/ALERT3D系统的液体培养液或改良罗氏固体培养基分离培养菌落室温静置约2h、浊度为1麦氏单位的生理盐水菌悬液0.1ml为检测样本,应用胶体金标记抗MPB64单克隆抗体采用免疫层析色谱法进行MPB64分泌蛋白检测,而后与菌种鉴定结果相比较。对参考菌株,则同时采用两种样本进行检测。结果对23株分枝杆菌参考菌株、267株临床分离菌株进行了检测。①对于参考菌株的两种样本,MPB64检测结果均为:结核分枝杆菌、牛分枝杆菌、田鼠分枝杆菌菌株阳性,其他20株非结核分枝杆菌为阴性。分群鉴定准确度为100%。②在111株BacT/AI。ERT3D系统分离培养临床株中,55株为结核分枝杆菌,其中51株MPB64检测阳性;56株为非结核分枝杆菌,其中54株MPB64检测阴性。分群鉴定准确度为94.59%。③在156株改良罗氏培养基分离培养临床菌株中,121株为结核分枝杆菌,其中115株MPB64检测阳性;35株为非结核分枝杆菌,MPB64检测全部阴性。分群鉴定准确度为96.15%。④对于所有研究样本,应用MPB64分泌蛋白检测鉴定结核分枝杆菌复合群的敏感度、特异度与准确度分别为94.41%、98.20%和95.86%。结论应用MPB64分泌蛋白检测鉴定结核分枝杆菌复合群是一种准确、快速、简便而又不需要任何仪器设备的实用型方法,值得临床推广应用。 展开更多
关键词 mpb64 分泌蛋白 结核分枝杆菌复合群 细菌分型技术
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高敏感度酶联免疫吸附测定法检测分泌蛋白MPB64对于活动性肺结核诊断的价值 被引量:8
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作者 赵冰 侯萍 +4 位作者 黄静 贺文从 欧喜超 刘东鑫 赵雁林 《中国防痨杂志》 CAS 2017年第12期1303-1308,共6页
目的评价以结核分枝杆菌(MTB)分泌蛋白MPB64为检测抗原的高敏感度酶联免疫吸附测定法(high sensitivityenzyme-linked immunosorbent assay,HI-ELISA)用于检测痰液中MTB的价值。方法选取97份储存的疑似肺结核患者的痰标本,分别进... 目的评价以结核分枝杆菌(MTB)分泌蛋白MPB64为检测抗原的高敏感度酶联免疫吸附测定法(high sensitivityenzyme-linked immunosorbent assay,HI-ELISA)用于检测痰液中MTB的价值。方法选取97份储存的疑似肺结核患者的痰标本,分别进行BACTEC MGIT960液体培养(简称“MGIT960培养”)、MTB/利福平耐药实时荧光定量核酸扩增检测系统(Gene Xpert MTB/RIF,简称“Xpert检测”)和HI-ELISA检测,通过与MGIT 960培养比较来评价HI-ELISA的诊断效能。结果本研究97份痰标本中,MGIT 960培养、HI-ELISA检测MTB的阳性率分别为36.08%(35/97)、32.99%(32/97);与MGIT 960培养比较,HI-ELISA的检测敏感度、特异度、总体符合率分别为88.57%(31/35)、98.39%(61/62)、94.85%(92/97)。在Xpert检测阳性的66份痰标本中,MGIT 960培养、HI-ELISA检测MTB的阳性率分别为51.51%(34/66)、48.48%(32/66);与MGIT 960培养相比,HI-ELISA的检测敏感度、特异度、总体符合率分别为91.18%(31/34)、96.88%(31/32)、93.93%(62/66)。Xpert检测MTB为阴性的31份痰标本中,仅有1份标本的MGIT960培养阳性而HI-ELISA未能检测到MTB,其他30份标本检测结果全部相符,符合率为96.77%(30/31)。结论HI-ELISA可以特异性检测MTB活菌,对活动性肺结核的诊断及治疗评价有很高的应用价值。 展开更多
关键词 分枝杆菌 结核 分泌蛋白 mpb64 酶联免疫吸附测定 敏感性与特异性 诊断
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应用MPB64单克隆抗体检测液体培养基中结核分枝杆菌的初步研究 被引量:7
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作者 何霞 谭守勇 +3 位作者 蔡杏姗 樊晖 罗春明 刘志辉 《国际医药卫生导报》 2007年第18期14-15,107,共3页
目的探讨应用MPB64单克隆抗体检测液体培养基中结核分枝杆菌的临床应用价值。方法应用抗酸染色涂片阳性样本进行分枝杆菌培养前处理,接种于BacT/Alert 3D全自动分枝杆菌培养系统培养基中。在培养监测的同时,每天定时测定培养液中的结核... 目的探讨应用MPB64单克隆抗体检测液体培养基中结核分枝杆菌的临床应用价值。方法应用抗酸染色涂片阳性样本进行分枝杆菌培养前处理,接种于BacT/Alert 3D全自动分枝杆菌培养系统培养基中。在培养监测的同时,每天定时测定培养液中的结核分枝杆菌分泌蛋白MPB64,比较它们可指示有结核分枝杆菌生长在时间上的差异。结果在12例涂片阳性样本中,仪器系统对12例样本都指示培养阳性结果,其中10例样本MPB64检测阳性;对12例样本进行分枝杆菌菌鉴定,培养指示阳性、MPB64指示阴性的2例样本为非结核分枝杆菌,培养与MPB64均指示阳性的10例样本为结核分枝杆菌;仪器系统指示培养阳性的平均时间为11.5天,MPB64检测指示有结核分枝杆菌生长的平均时间为6.5天。结论应用MPB64单克隆抗体检测液体培养基中结核分枝杆菌分泌蛋白MPB64来指示有无结核分枝杆菌生长具有操作简便、报告结果快速的特点,值得更进一步研究。 展开更多
关键词 分枝杆菌 结核分泌 蛋白 mpb64 免疫色谱法 抗体 单克隆
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结核分枝杆菌胶体金法对分枝杆菌菌型快速鉴别价值探讨 被引量:5
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作者 陈俊林 顾欣荣 +2 位作者 顾德林 施军卫 王小平 《医学综述》 2009年第18期2847-2848,共2页
目的探讨结核分枝杆菌胶体金法对分枝杆菌菌型快速鉴别的价值。方法采用结核分枝杆菌胶体金法诊断试剂和传统菌型鉴定实验方法,对131株分枝杆菌临床分离株进行鉴别并进行比较。结果采用胶体金法快速鉴定试剂,23株非结核分枝杆菌临床分... 目的探讨结核分枝杆菌胶体金法对分枝杆菌菌型快速鉴别的价值。方法采用结核分枝杆菌胶体金法诊断试剂和传统菌型鉴定实验方法,对131株分枝杆菌临床分离株进行鉴别并进行比较。结果采用胶体金法快速鉴定试剂,23株非结核分枝杆菌临床分离株检测结果全部阴性,108株结核分枝杆菌临床分离株有107株阳性,该试剂快速鉴定结核分枝杆菌敏感度为99.1%,特异度为100%。胶体金法检出结核分枝杆菌所需时间平均为9.9 d,传统方法所需时间平均为28.2 d,二者间差异有统计学意义(P<0.05)。结论结核分枝杆菌胶体金法快速诊断试剂盒鉴别结核分枝杆菌与非结核分枝杆菌,方法简便、快速,是分枝杆菌菌型鉴别的有效方法。 展开更多
关键词 免疫色谱法 单克隆抗体 快速诊断 mpb64
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直接检测痰标本中MPB64蛋白在结核病诊断中的临床应用价值 被引量:5
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作者 孟繁荣 谢贝 +6 位作者 郑小凌 尹小毛 蔡杏珊 许婉华 彭湘明 赖艳榕 刘志辉 《实用医学杂志》 CAS 北大核心 2010年第23期4267-4269,共3页
目的:探讨直接检测痰液标本MPB64蛋白作为结核病快速诊断方法的可能性。方法:对65例肺结核病患者和72例非结核病患者的痰液标本同时进行痰涂片染色抗酸菌检查、实时荧光定量PCR检测结核杆菌DNA和免疫胶体金法检测MPB64蛋白,比较分析3种... 目的:探讨直接检测痰液标本MPB64蛋白作为结核病快速诊断方法的可能性。方法:对65例肺结核病患者和72例非结核病患者的痰液标本同时进行痰涂片染色抗酸菌检查、实时荧光定量PCR检测结核杆菌DNA和免疫胶体金法检测MPB64蛋白,比较分析3种方法的检测结果,并依据临床诊断对MPB64蛋白检测结果进行诊断方法学评价。结果:MPB64蛋白检测法与涂片染色、荧光定量PCR检测结果的符合率均为60.58%;MPB64蛋白检测的敏感度、特异度、准确度分别为58.46%、69.44%和64.23%,其敏感度显著高于涂片染色法的27.69%与荧光定量PCR法的35.38%,但其特异度和准确度则低于涂片染色法(100%、65.69%)与荧光定量PCR法(98.61%、68.61%)。结论:采用免疫胶体金法直接检测痰液标本中MPB64蛋白对结核病的诊断具有较高的敏感度,可以作为筛查检测手段;但特异度相对较低,可否作为一种结核病快速诊断方法值得进一步研究。 展开更多
关键词 结核 mpb64 方法学评价
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MPB64抗原检测快速诊断结核分枝杆菌的临床价值 被引量:3
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作者 陈俊林 顾德林 +2 位作者 顾欣荣 施军卫 石彩芳 《临床肺科杂志》 2010年第3期350-352,共3页
目的比较痰涂片抗酸染色、改良酸性罗氏培养、MPB64的免疫胶体金法用于检测结核分枝杆菌特异性的分泌蛋白质MPB64,评价MPB64的免疫胶体金法在结核分枝杆菌快速检测中的应用价值。方法选取438例确诊肺结核患者痰液,进行痰涂片抗酸染色、... 目的比较痰涂片抗酸染色、改良酸性罗氏培养、MPB64的免疫胶体金法用于检测结核分枝杆菌特异性的分泌蛋白质MPB64,评价MPB64的免疫胶体金法在结核分枝杆菌快速检测中的应用价值。方法选取438例确诊肺结核患者痰液,进行痰涂片抗酸染色、7H9液体培养基和改良酸性罗氏培养基培养、基于MPB64的免疫胶体金法检测,对结果进行比较分析。并选取痰涂片确认为阳性的标本33例,用米氏7H9液体培养和基于MPB64的免疫胶体金法进行检出时间对比。结果痰涂片阳性率为14.8%,罗氏培养阳性率为20.7%,7H9液体培养阳性率24.8%,MPB64的免疫胶体金法阳性率为25.1%。基于MPB64的免疫胶体金法在培养的第15天检出32例阳性;而单纯的7H9液体培养加抗酸染色检测法在第15天只检出11例阳性。结论7H9液体培养配合基于MPB64的免疫胶体金法可以作为一种较为敏感和特异的检测结核分枝杆菌感染的方法,并可以有效的区分结核分枝杆菌和非结核分枝杆菌。 展开更多
关键词 免疫色谱法 单克隆抗体 快速诊断 mpb64
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痰液中MPB64蛋白检测在肺结核诊断中的临床应用及其常见菌对检测影响的研究 被引量:3
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作者 刘少娟 孟繁荣 +3 位作者 刘志辉 彭湘明 赖艳榕 秦娟 《国际医药卫生导报》 2012年第15期2139-2142,共4页
目的探讨痰液MPB64蛋白检测在临床诊断肺结核的价值及常见菌对MPB64检测的影响。方法以11例涂片抗酸染色阳性且胸片出现肺部阴影的患者的痰标本为实验组,以11例涂片抗酸染色阴性且胸片无肺部阴影的患者的痰标本为对照组,分别进行免疫... 目的探讨痰液MPB64蛋白检测在临床诊断肺结核的价值及常见菌对MPB64检测的影响。方法以11例涂片抗酸染色阳性且胸片出现肺部阴影的患者的痰标本为实验组,以11例涂片抗酸染色阴性且胸片无肺部阴影的患者的痰标本为对照组,分别进行免疫胶体金法检测MPB64蛋白、荧光定量聚合酶链式反应(PCR)检测结核杆菌DNA和涂片抗酸染色,对3种检测方法的检测结果进行比较、分析;对临床送检痰标本中分离的65株常见菌,用蛋白胨水增菌24h,采用免疫胶体金法检测MPB64。结果实验组中,免疫胶体金法检测MPB64蛋白、荧光定量PCR检测结核杆菌DNA的敏感度分别为72.72%、45.45%,免疫胶体金法显著高于荧光定量PCR法,但其特异度(45.45%)和准确度(59.09%)则低于荧光定量PCR(100.00%、72.73%);MPB64蛋白检测与涂片染色、荧光定量PCR检测结果的符合率分别为50.00%、59.09%;25株金黄色葡萄球菌增菌液中MPB64检测试验阳性,阳性率100%,其余菌株增菌液阴性。结论痰液中MPB64蛋白检测快速、简便、敏感性高,但特异性低;金黄色葡萄球菌菌株的存在可能造成对痰液MPB64检测的假阳性。 展开更多
关键词 肺结核 mpb64 常见菌 假阳性
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液体分枝杆菌培养管培养联合结核分枝杆菌分泌蛋白64免疫胶体金检测法在快速鉴定结核分枝杆菌中的应用 被引量:4
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作者 徐礼锋 余旭良 +1 位作者 张峰 祝进 《中国卫生检验杂志》 CAS 2017年第4期495-497,共3页
目的评估MGIT培养联合MPB64免疫胶体金法在快速检测结核分枝杆菌中的应用价值。方法收集2015年7月-2016年6月衢州市人民医院就诊疑似肺结核患者1 275例,取晨痰标本进行抗酸染色镜检和MGIT培养,培养阳性标本分别采用PNB/TCH生长试验和MP... 目的评估MGIT培养联合MPB64免疫胶体金法在快速检测结核分枝杆菌中的应用价值。方法收集2015年7月-2016年6月衢州市人民医院就诊疑似肺结核患者1 275例,取晨痰标本进行抗酸染色镜检和MGIT培养,培养阳性标本分别采用PNB/TCH生长试验和MPB64免疫胶体金检测法进行菌种初步鉴定,利用基因芯片法对分离到的非结核分枝杆菌做进一步鉴定。分析MGIT培养联合MPB 64免疫胶体金检测法在快速鉴定结核分枝杆菌中的应用效能。结果 MGIT培养阳性标本共287例,MPB64免疫胶体金法鉴定结核分枝杆菌的敏感度为97.8%(261/267),特异度为100%(20/20)。与PNB/TCH生长试验法相比差异无统计学意义(χ2=0.62和0,P>0.05)。结论 MPB64免疫胶体金法检测MGIT培养阳性标本中的结核分枝杆菌具有较高的敏感性、特异性和快速性,能准确区分非结核分枝杆菌。具有很高的实验室应用价值。 展开更多
关键词 分枝杆菌 结核 免疫胶体金法 结核分枝杆菌分泌蛋白64 液体分枝杆菌培养管
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米氏7H9液体培养联合MPB64胶体金法快速检测结核分枝杆菌 被引量:3
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作者 施军卫 顾德林 +2 位作者 石彩芳 陈俊林 施慧慧 《临床检验杂志》 CAS CSCD 北大核心 2008年第6期434-435,共2页
目的观察米氏7H9液体培养联合MPB64免疫胶体金法快速检测结核分枝杆菌(MTB)的应用价值。方法选取247例临床确诊肺结核患者的痰标本进行痰涂片抗酸染色,米氏7H9液体培养基和改良酸性罗氏培养基培养,7H9液体培养联合MPB64免疫胶体金法检测... 目的观察米氏7H9液体培养联合MPB64免疫胶体金法快速检测结核分枝杆菌(MTB)的应用价值。方法选取247例临床确诊肺结核患者的痰标本进行痰涂片抗酸染色,米氏7H9液体培养基和改良酸性罗氏培养基培养,7H9液体培养联合MPB64免疫胶体金法检测,对结果进行比较分析。选取其中的12例,单独用米氏7H9液体培养和米氏7H9液体培养联合MPB64免疫胶体金法进行检出时间对比。结果247例肺结核患者痰涂片阳性率为14.6%,改良罗氏培养基阳性率为20.2%,米氏7H9液体培养基阳性率24.3%,米氏7H9液体培养联合MPB64免疫胶体金法阳性率为24.7%。7H9液体培养结合MPB64免疫胶体金法在培养的第15d检出11例(19.7%)阳性;而单纯的7H9液体培养加抗酸染色法在第15d只检出4例(33.3%)阳性。结论米氏7H9液体培养联合MPB64免疫胶体金法可作为较为敏感和特异的检测MTB感染的方法,并可以有效地区分MTB和非MTB。 展开更多
关键词 免疫胶体金法 单克隆抗体 快速诊断 mpb64
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结核分枝杆菌分泌蛋白MPB64表达纯化 被引量:2
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作者 石华 戈朝晖 +4 位作者 贾伟 马小明 牛宁奎 董辉 王自立 《宁夏医科大学学报》 2011年第8期704-707,共4页
目的表达并纯化结核分枝杆菌重组蛋白pET32a-MPB64。方法将构建好的表达载体pET32a-MPB64测序后,转化到大肠杆菌BL21(DE3)内。经IPTG诱导,在大肠杆菌BL-21中表达,用SDS-PAGE和免疫印迹分析表达产物并进行蛋白纯化。结果质粒pET32a-MPB6... 目的表达并纯化结核分枝杆菌重组蛋白pET32a-MPB64。方法将构建好的表达载体pET32a-MPB64测序后,转化到大肠杆菌BL21(DE3)内。经IPTG诱导,在大肠杆菌BL-21中表达,用SDS-PAGE和免疫印迹分析表达产物并进行蛋白纯化。结果质粒pET32a-MPB64经测序,结果与Geneback中的结核分枝杆菌标准菌株H37RV核苷酸序列基本一致;SDS-PAGE分析表明,该融合蛋白以可溶性的形式表达,其分子质量约为24 kDa,蛋白表达量约占菌体总蛋白的20%;该蛋白经MagExtractor-His-tag-磁珠纯化试剂盒纯化后浓度达2.49mg.mL-1;Western-blot结果显示融合蛋白可与抗His-Tag标签的单克隆抗体结合。结论成功得到高纯度的重组目的蛋白pET32a-MPB64,为进一步制备其单克隆抗体奠定了基础。 展开更多
关键词 结核分枝杆菌 mpb64 免疫印迹 蛋白表达纯化
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液体MGIT培养法联合MPB64胶体金法快速检测结核分枝杆菌 被引量:2
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作者 孙黎萍 何鑫 《生物技术世界》 2015年第12期12-13,共3页
目的观察液体分枝杆菌培养管(MGIT)培养法联合MPB64胶体金法快速检测结核分枝杆菌的应用价值。方法收集上海市某区级医院2013年4月至2013年10月肺结核门诊抗酸染色涂片阳性痰标本80例,分别用液体MGIT培养法与固体(L—J)培养法进行培养... 目的观察液体分枝杆菌培养管(MGIT)培养法联合MPB64胶体金法快速检测结核分枝杆菌的应用价值。方法收集上海市某区级医院2013年4月至2013年10月肺结核门诊抗酸染色涂片阳性痰标本80例,分别用液体MGIT培养法与固体(L—J)培养法进行培养阳性率和报阳时间比较分析;应用75株液体MGIT培养法与固体罗氏(L—J)培养法双阳菌株进行MPB64胶体金法和传统菌型鉴定比较分析。结果 80例抗酸染色涂片阳性痰标本,液体MGIT培养法阳性率97.5%,固体L-J培养法阳性率93.8.%,符合率96.3%(77/80);液体MGIT培养法平均报阳时间13.2天,固体L-J培养法平均报阳时间26.5天,二者间差异有统计学意义(P<0.05)。分枝杆菌MPB64抗原胶体金法有较高的特异性和灵敏性,方法简便、快速,是分枝杆菌菌种鉴别的有效方法。结论液体MGIT培养法培养联合MPB64免疫肢体金法可作为较为敏感和特异的检测MTB感染的方法,并可以快速有效地区分MTB和NTM。 展开更多
关键词 结核分枝杆菌 非结核分枝杆菌 mpb64 胶体金法 快速鉴定
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结核分枝杆菌分泌蛋白MPB64小鼠单克隆抗体制备、纯化及鉴定 被引量:2
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作者 马荣 陈振 +3 位作者 黑龙 赵志军 徐广贤 戈朝晖 《宁夏医科大学学报》 2015年第9期1013-1016,共4页
目的应用细胞融合技术制备和鉴定抗MPB64单克隆抗体。方法采用重组目的蛋白p ET32aMPB64(680bp)为免疫原,免疫Balb/c小鼠,取免疫小鼠脾细胞与小鼠骨髓瘤Sp2/0细胞融合。间接ELISA法筛选分泌抗体的杂交瘤细胞,采用有限稀释方法对所有筛... 目的应用细胞融合技术制备和鉴定抗MPB64单克隆抗体。方法采用重组目的蛋白p ET32aMPB64(680bp)为免疫原,免疫Balb/c小鼠,取免疫小鼠脾细胞与小鼠骨髓瘤Sp2/0细胞融合。间接ELISA法筛选分泌抗体的杂交瘤细胞,采用有限稀释方法对所有筛选确认的阳性细胞株进行亚克隆,杂交瘤细胞诱导小鼠产生腹水,再用蛋白G亲和层析法纯化抗体,通过间接ELISA、Western Blot鉴定该单克隆抗体。结果通过杂交瘤技术获得10株可稳定分泌抗MPB64单克隆抗体的细胞株。以命名的"1A3"单抗细胞株进行腹水制备,经鉴定腹水效价>1∶720000,经纯化抗体效价约为1∶720000,抗体浓度2.15mg·m L-1。结论成功制备和获得了抗MPB64单克隆抗体的细胞株,为MPB64单克隆抗体制备和鉴定奠定了基础。 展开更多
关键词 结核分枝杆菌 mpb64 单克隆抗体 杂交瘤技术
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结核分枝杆菌三价DNA疫苗在奶牛体内诱导的免疫应答 被引量:2
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作者 张云峰 刘福元 +2 位作者 蔡宏 呼西旦 徐雪萍 《新疆农业科学》 CAS CSCD 北大核心 2011年第7期1317-1323,共7页
【目的】研究结核分枝杆菌Ag85B、MPB64和MPT83抗原DNA疫苗在奶牛体内诱导的免疫应答。【方法】以PJW4303为载体,构建上述3种抗原基因的三价DNA疫苗,免疫6月龄荷斯坦奶牛3次。ELISA法检测免疫奶牛的特异性抗体滴度。利用双抗夹心ELISA... 【目的】研究结核分枝杆菌Ag85B、MPB64和MPT83抗原DNA疫苗在奶牛体内诱导的免疫应答。【方法】以PJW4303为载体,构建上述3种抗原基因的三价DNA疫苗,免疫6月龄荷斯坦奶牛3次。ELISA法检测免疫奶牛的特异性抗体滴度。利用双抗夹心ELISA定量测定免疫奶牛各月IFN-γ浓度。【结果】免疫前奶牛体内特异性抗体为阴性,1免2、免后抗体效价上升较缓,3免后抗体效价上升快。MPT83特异性抗体上升最快,抗体效价1∶3 200持续6个月;Ag85B特异性抗体效价1∶3 200持续2个月;MPT64特异性抗体效价较低。免疫奶牛中MPT83、Ag85B、MPT64三种蛋白诱导产生IFN-γ在3免后6个月到达最高,浓度分别为(1 098.95±165.03)(、711.45±110.43)(、355.06±72.76)pg/mL,阴性对照组PBS刺激IFN-γ浓度为(114.5±27.46)pg/mL。阴性对照与三种抗原相比,差异均极显著(P<0.01)。【结论】多价核酸疫苗能同时诱导机体产生细胞免疫应答和体液免疫应答,可能有利于增强疫苗对抗结核病的抗性。 展开更多
关键词 结核分枝杆菌 AG85B mpb64 MPT83 DNA疫苗 免疫应答
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MPB64免疫胶体金法在新发肺结核患者中的应用 被引量:2
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作者 戴小丽 许燕燕 +1 位作者 刘涛 侯彦强 《国际医药卫生导报》 2021年第3期396-399,共4页
目的对免疫胶体金法、痰涂片抗酸染色法以及上海市疾病预防控制中心结核分枝杆菌复合群(mycobacterium tuberculosis complex,MTC)菌群鉴定等3种检测结果进行比较,评价MPB64免疫胶体金法在疑似新发肺结核患者中的临床应用价值。方法选取... 目的对免疫胶体金法、痰涂片抗酸染色法以及上海市疾病预防控制中心结核分枝杆菌复合群(mycobacterium tuberculosis complex,MTC)菌群鉴定等3种检测结果进行比较,评价MPB64免疫胶体金法在疑似新发肺结核患者中的临床应用价值。方法选取2018年9月至2019年8月经MGIT 960液体分枝杆菌培养仪培养阳性的疑似新发肺结核患者210例,首先进行MPB64免疫胶体金法检测,然后将标本转种至固体中性罗氏培养基中,待菌落在固体培养基中长势良好时,将其送至上海市疾病预防控制中心结核病防治科进行分枝杆菌菌群鉴定(PNB法、TCH法和28℃培养试验)。最后,比较分析胶体金法与传统的痰涂片抗酸染色法在检测抗酸杆菌阳性率方面的差异,并比较胶体金法检测结果与上海市疾病预防控制中心菌群鉴定结果之间的差异,分析胶体金法在菌群鉴定方面的敏感性、特异性以及准确度。结果210例疑似新发患者中,痰涂片抗酸染色阳性率为48.57%(102/210),MPB64免疫胶体金法阳性率为90.00%(189/210)。经上海市疾病预防控制中心菌群鉴定,其中结核分枝杆菌复合群感染187例,阳性率为89.05%(187/210),非结核分枝杆菌复合群23例,占比为10.95%(23/210)。与上海市疾病预防控制中心菌群鉴定结果比较,胶体金法在确诊结核分枝杆菌复合群感染中的敏感性为97.86%(183/187),特异性为73.91%(17/23),准确度为95.24%(200/210)。结论MPB64免疫胶体金法作为一种敏感性、特异性、准确度均较高的结核分枝杆菌快速检测方法,操作简便、快速、无需特殊仪器设备,适合于各基层试验应用于肺结核病的临床诊断。 展开更多
关键词 mpb64 胶体金法 MGIT 960 结核分枝杆菌 快速诊断
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免疫胶体金法检测支气管肺泡灌洗液MPB64对肺结核的诊断价值 被引量:1
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作者 谢贝 方琼 +3 位作者 孟繁荣 郑小凌 高俊文 刘志辉 《现代医院》 2011年第7期76-77,共2页
目的探讨免疫胶体金法检测支气管肺泡灌洗液(BALF)结核杆菌特异性分泌抗原MPB64在肺结核诊断中的应用价值。方法对113例肺结核患者和80例非结核患者的BALF进行免疫胶体金法检测MPB64、荧光定量PCR法检测结核分枝杆菌DNA及改良酸性罗氏... 目的探讨免疫胶体金法检测支气管肺泡灌洗液(BALF)结核杆菌特异性分泌抗原MPB64在肺结核诊断中的应用价值。方法对113例肺结核患者和80例非结核患者的BALF进行免疫胶体金法检测MPB64、荧光定量PCR法检测结核分枝杆菌DNA及改良酸性罗氏培养基法结核分枝杆菌培养,比较分析3种方法的检测结果。结果 MPB64免疫胶体金法与荧光定量PCR法、改良酸性罗氏培养基法的符合率分别为58.03%和57.51%;以临床诊断结果为参照,免疫胶体金法检测MPB64的敏感度、特异度与准确度分别为61.95%、87.50%、72.54%。以荧光定量PCR法为参照,免疫胶体金法检测MPB64的敏感度、特异度与准确度分别为49.30%、63.11%、58.03%;以改良酸性罗氏培养基法为参照,免疫胶体金法检测MPB64的敏感度、特异度与准确度分别为48.21%、61.31%、57.51%。结论免疫胶体金法检测MPB64应用于支气管肺泡灌洗液对肺结核的临床诊断有辅助诊断价值,但检测的假阳性、假阴性值得进一步分析研究。 展开更多
关键词 支气管肺泡灌洗液 免疫胶体金法 结核分枝杆菌 mpb64
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非结核分枝杆菌快速检测技术用于口岸检疫的研究 被引量:1
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作者 马艳艳 李静 +1 位作者 马晓光 李辉 《中国卫生检验杂志》 CAS 2010年第5期1086-1087,共2页
目的:研究快速检测非结核分枝杆菌(Nontuberculous mycobacteria,NTM)方法在口岸卫生检疫中的应用。方法:针对结核分枝杆菌复合群(Mycobacterium tuberculosiscomplex,MTC)MPB64抗原检测的非分枝杆菌快速方法与传统的硝基苯酸(PNB)生长... 目的:研究快速检测非结核分枝杆菌(Nontuberculous mycobacteria,NTM)方法在口岸卫生检疫中的应用。方法:针对结核分枝杆菌复合群(Mycobacterium tuberculosiscomplex,MTC)MPB64抗原检测的非分枝杆菌快速方法与传统的硝基苯酸(PNB)生长实验比较。结果:检测结核分枝杆菌(M.tuberculosis)H37Rv、蟾蜍分枝杆菌(M.xenopi)、偶然分枝杆菌(M.fortuitum)和102例临床分离菌株,非结核分枝杆菌快速检测与PNB方法符合率100%。结论:非结核分枝杆菌快速检测方法有较高的特异性和灵敏性,而且操作简便、时间短,适于口岸卫生检疫。 展开更多
关键词 非结核杆菌 结核杆菌 mpb64 口岸 检验
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MPB64在杆状病毒系统中的表达纯化及免疫原性鉴定 被引量:1
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作者 徐丹 姜潮 +3 位作者 陈昱 艾君 王晓艳 李校堃 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2014年第7期921-926,共6页
目的:在杆状病毒昆虫细胞表达系统中表达结核分枝杆菌蛋白MPB64,并鉴定其免疫原性。方法:目的基因MPB64连接到pFastBac载体,获得pFastBac-MPB64质粒转化DH10 Bac感受态,通过Tn7转座片段将目的基因转座到Bacmid中,得到Bacmid-MPB6... 目的:在杆状病毒昆虫细胞表达系统中表达结核分枝杆菌蛋白MPB64,并鉴定其免疫原性。方法:目的基因MPB64连接到pFastBac载体,获得pFastBac-MPB64质粒转化DH10 Bac感受态,通过Tn7转座片段将目的基因转座到Bacmid中,得到Bacmid-MPB64穿梭载体,脂质体包被后转染Sf 9细胞收获P1代病毒,重复转染Sf 9细胞三次获得高滴度的P4代病毒,收集细胞上清通过Q Sepharose FF和Ni亲和层析柱两步层析纯化得到目的蛋白MPB64。纯化的蛋白免疫BALB/c小鼠并检测血清中抗体滴度,ELISA检测MPB64蛋白刺激脾脏细胞产生IFN-γ的浓度,MTT法检测目的蛋白对免疫后小鼠脾脏细胞的增殖作用。结果:MPB64在昆虫细胞中成功表达,纯化后蛋白纯度达90%以上,蛋白产量为35 mg/L,纯化蛋白能有效刺激BALB/c小鼠产生抗体,提高小鼠脾脏细胞培养基中IFN-γ的含量,目的蛋白在0.2~100μg/ml之间对脾脏细胞有明显的促增殖作用。结论:成功在杆状病毒昆虫细胞表达系统中表达了具有免疫原性的MPB64蛋白,为生产结核病疫苗奠定了基础。 展开更多
关键词 mpb64 杆状病毒表达系统 Sf 9细胞 结核分枝杆菌
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MPB64免疫胶体金快速检测法在分枝杆菌菌种鉴定中的应用 被引量:1
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作者 施旭东 张文海 《临床检验杂志》 CAS CSCD 北大核心 2009年第5期376-377,共2页
目的研究MPB64免疫胶体金快速检测法在分枝杆菌菌种鉴定中的应用价值。方法用MPB64免疫胶体金快速检测法对7种分枝杆菌标准菌株和分枝杆菌快速荧光培养法培养阳性标本进行菌种鉴定,并同时与传统的PNB改良罗氏(L-J)法鉴定结果进行比较。... 目的研究MPB64免疫胶体金快速检测法在分枝杆菌菌种鉴定中的应用价值。方法用MPB64免疫胶体金快速检测法对7种分枝杆菌标准菌株和分枝杆菌快速荧光培养法培养阳性标本进行菌种鉴定,并同时与传统的PNB改良罗氏(L-J)法鉴定结果进行比较。结果结核杆菌标准菌株H37Rv、牛结核杆菌MPB64胶体金法与L-J法均为阳性,其余5种非结核分枝杆菌均为阴性;40株临床分离菌株两法结果符合率为100%。MPB64胶体金法在培养结果报告的当天即可作出鉴定结果,较传统方法提前了28d。结论MPB64免疫胶体金法在分枝杆菌菌种鉴定中能快速有效地区分结核杆菌与非结核分枝杆菌。 展开更多
关键词 免疫胶体金法 分枝杆菌 菌种鉴定 mpb64
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肺癌组织中结核分枝杆菌L-型及MPB64基因的检测
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作者 张淑杰 田艳生 +5 位作者 崔幸琨 扬宝才 李红光 郝彤 王江勇 张卫 《中国综合临床》 2009年第9期977-979,共3页
目的调查肺癌组织、结核病肺癌组织中结核分枝杆菌L-型(MTB-L)的感染状况,以分析MTB—L在肺癌形成过程中的作用。方法选择肺癌组(187例)、结核病组(32例)及非肺癌、非结核病对照组(50例,对照组),对各组的手术切除肺组织标本... 目的调查肺癌组织、结核病肺癌组织中结核分枝杆菌L-型(MTB-L)的感染状况,以分析MTB—L在肺癌形成过程中的作用。方法选择肺癌组(187例)、结核病组(32例)及非肺癌、非结核病对照组(50例,对照组),对各组的手术切除肺组织标本,采用IK抗酸染色检测MTB—L,Ziehl—Neelsen染色检测MTB-杆菌型,原位杂交检测MPB64基因的表达。结果肺癌组和对照组MTB—L阳性率分剐为66.8%(125/187)、5%(2/40),差异有统计学意义(P〈0.05)。肺癌组和对照组MPB64基因阳性率分别为80.7%(151/187))、8.1%(3/40),差异有统计学意义(P〈0.05)。肺癌组各组织类型、各组织学分级、各病理分期及淋巴结有、无转移与MTB—L结果之间,差异均无统计学意义(P〉0.05),MPB64基因检测结果之间,差异均无统计学意义(P均〉0.05)。肺癌组织中MTB-L与MTB检出率比较,差异有统计学意义(P〈0.05)。结论结核分枝杆菌是以L型为主要形式存在于肺癌组织中;MTB—L的MPB64基因在肺癌组织的癌细胞核内高度表达,提示MTB-L可能与肺癌的发生相关。 展开更多
关键词 结核分枝杆菌L-型 mpb64 肺癌
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