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红花黄色素对人肝癌细胞凋亡及相关蛋白表达的影响 被引量:7
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作者 黄玲玲 傅缨 +3 位作者 资晓飞 李媛 熊耀斌 曾志涛 《中国中医基础医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2016年第8期1061-1064,共4页
目的:探讨红花黄色素(safflor yellow,SY)对MHCC-97H细胞凋亡及相关蛋白表达的影响。方法:选用MHCC-97H细胞体外培养至对数生长期,加入不同浓度SY(0、0.03125、0.0625、0.125、0.25、0.5 mg/L)进行体外培养,并设顺铂阳性对照组(终浓度0.... 目的:探讨红花黄色素(safflor yellow,SY)对MHCC-97H细胞凋亡及相关蛋白表达的影响。方法:选用MHCC-97H细胞体外培养至对数生长期,加入不同浓度SY(0、0.03125、0.0625、0.125、0.25、0.5 mg/L)进行体外培养,并设顺铂阳性对照组(终浓度0.5μg/ml),分别干预24 h、48 h及72 h后,采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法观察SY对细胞增殖的抑制作用,流式细胞仪观察细胞周期及凋亡率的变化,Western–blotting检测Bax、Bcl-2蛋白表达情况。结果:MTT显示SY对人肝癌细胞MHCC-97H增殖有一定的抑制作用,与SY浓度及作用时间有相关性;流式细胞术显示,细胞凋亡率随SY浓度增加有上升趋势,细胞周期无明显变化;Western-blotting显示,随着SY浓度的增加,Bax表达增加,Bcl-2表达减少,而Bcl-2/bax比值下降。结论:SY对MHCC-97H细胞的生长有一定的抑制作用,但对细胞周期无明显阻滞作用,其可诱导该细胞凋亡,下调Bcl-2/Bax比值,可能为其促凋亡机制之一。 展开更多
关键词 红花黄色素 mhcc-97h细胞 细胞凋亡 细胞周期 BAX BCL-2
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FBXW7/MCM7信号轴介导肝癌细胞增殖的研究
2
作者 李英 王兴 +3 位作者 李永宁 刘鹏 刘松柏 潘耀振 《贵州医科大学学报》 CAS 2024年第2期191-197,共7页
目的 探讨FBXW7靶向调控MCM7表达对肝癌细胞增殖的影响。方法 采用免疫共沉淀法(CoIP)和免疫荧光染色法(IF),分析肝癌细胞系MHCC-97H中FBXW7与MCM7的互作关系;通过慢病毒感染过表达FBXW7和(或) MCM7,小干扰RNA技术下调FBXW7和(或) MCM7... 目的 探讨FBXW7靶向调控MCM7表达对肝癌细胞增殖的影响。方法 采用免疫共沉淀法(CoIP)和免疫荧光染色法(IF),分析肝癌细胞系MHCC-97H中FBXW7与MCM7的互作关系;通过慢病毒感染过表达FBXW7和(或) MCM7,小干扰RNA技术下调FBXW7和(或) MCM7的表达;采用Western blot检测FBXW7对MCM7蛋白表达的影响,CCK-8实验检测肝癌细胞的增殖活性,EdU细胞增殖检测分析肝癌细胞的增殖能力,平板克隆实验分析肝癌细胞的集落形成能力。结果 在MHCC-97H细胞中,FBXW7与MCM7存在互作关系:过表达FBXW7抑制了MCM7的蛋白表达水平、并抑制了肝癌MHCC-97H细胞的增殖(P <0.05),在过表达FBXW7的基础上增加MCM7的表达后,细胞增殖能力提高(P <0.05);下调FBXW7后细胞中MCM7表达增加、细胞增殖能力增强(P <0.05),而下调FBXW7的同时干扰MCM7表达后,细胞增殖能力减弱(P <0.05)。结论 FBXW7能抑制肝癌细胞增殖,其机制与负向调节肝癌细胞中促癌蛋白MCM7的表达水平有关。 展开更多
关键词 肝癌 F-box和WD重复结构域蛋白7 微小染色体维持蛋白-7 细胞增殖 mhcc-97h细胞
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下调EMS1/cortactin对人高转移潜能肝癌细胞株迁移和内吞的影响 被引量:2
3
作者 周家名 陈莉 +3 位作者 叶蕴瑶 孙树刚 王桂兰 吴圆圆 《临床与实验病理学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2012年第11期1235-1238,1242,共5页
目的观察下调人高转移潜能肝癌细胞株(MHCC-97H)中EMS1/cortactin对细胞迁移和内吞的影响,探讨EMS1/cortac-tin在细胞内可能存在的功能。方法构建靶向EMS1的shRNA真核表达质粒(EMS1-PSilencer4.1-GFP-shRNA,EMS1-shR-NA);通过Lipofectam... 目的观察下调人高转移潜能肝癌细胞株(MHCC-97H)中EMS1/cortactin对细胞迁移和内吞的影响,探讨EMS1/cortac-tin在细胞内可能存在的功能。方法构建靶向EMS1的shRNA真核表达质粒(EMS1-PSilencer4.1-GFP-shRNA,EMS1-shR-NA);通过Lipofectamine 2000处理后将EMS1-shRNA转染MHCC-97H细胞,免疫荧光显微镜下观察转染效率;采用RT-qPCR和Westen blot分别检测EMS1 mRNA和cortactin蛋白表达水平;利用划痕、Transwell小室实验、转铁蛋白(transferrin,Tfn)内吞实验分别研究细胞迁移和内吞作用。结果成功构建EMS1-shRNA。免疫荧光显微镜下见转染细胞中明显的绿色荧光蛋白(green fluorescence protein,GFP),荧光强度在48 h达到峰值,其转染效率达84.76%。与未处理组相比,转染EMS1-shRNA细胞中EMS1 mRNA水平下降至19.00%,cortactin蛋白水平下降至36.74%、细胞相对迁移距离下降至55.52%、相对穿膜细胞数下降至27.79%、细胞内吞荧光标记Tfn水平显著减弱(P均<0.05)。结论下调EMS1/cortactin后,MHCC-97H细胞迁移、内吞能力明显下降,提示EMS1/cortactin与原发性肝癌(primary human heptatocellular,HCC)转移的生物学行为有关。 展开更多
关键词 mhcc-97h细胞 EMS1 CORTACTIN 核酸干扰 迁移 内吞
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抑制UHRF1基因表达对肝癌细胞MHCC-97H迁移的影响及相关机制 被引量:1
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作者 杨从容 王军 +4 位作者 张萍 常靓 赵学涛 曹彦坤 边晨峰 《现代中西医结合杂志》 CAS 2017年第21期2284-2286,2301,共4页
目的探讨通过RNA干扰抑制泛素样含PHD和环指域1(UHRF1)基因表达对肝癌MHCC-97H细胞迁移的影响及可能机制。方法合成UHRF1基因特异性小发夹RNA(shRNA),构建稳定干扰UHRF1基因表达的重组慢病毒LV-sh UHRF1(以空载体慢病毒LV-sh NC作为阴... 目的探讨通过RNA干扰抑制泛素样含PHD和环指域1(UHRF1)基因表达对肝癌MHCC-97H细胞迁移的影响及可能机制。方法合成UHRF1基因特异性小发夹RNA(shRNA),构建稳定干扰UHRF1基因表达的重组慢病毒LV-sh UHRF1(以空载体慢病毒LV-sh NC作为阴性对照),并将其感染MHCC-97H细胞。实时荧光定量PCR法检测UHRF1 mRNA在MHCC-97H细胞中表达情况,蛋白质印迹法检测UHRF1、基质金属蛋白酶-9(MMP-9)和血管内皮生长因子(VEGF)蛋白表达情况,Transwell法检测MHCC-97H细胞迁移能力。结果 LV-sh UHRF1组UHRF1mRNA和蛋白表达量及MMP-9、VEGF蛋白表达量均明显低于LV-sh NC组(P均<0.05),迁移细胞数明显少于LV-sh NC组(P<0.05)。结论通过慢病毒介导的RNA干扰技术抑制UHRF1的表达后可抑制MHCC-97H细胞的迁移能力,机制可能与影响MMP-9和VEGF的表达有关。 展开更多
关键词 RNA干扰 UhRF1基因 肝癌 细胞迁移 mhcc-97h细胞
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抑制UHRF1基因表达对肝癌细胞生物学行为的影响
5
作者 杨从容 王军 +2 位作者 吴凤鹏 赵学涛 边晨峰 《现代中西医结合杂志》 CAS 2017年第12期1265-1267,1279,共4页
目的探讨抑制泛素样含PHD和环指域1[ubiquitin-like with plant homeodomain(PHD)and ringfinger domains 1,UHRF1]基因表达对肝癌MHCC-97H细胞增殖、周期分布和凋亡的影响。方法合成UHRF1基因特异性小发夹RNA(small hairpin RNA,shRNA)... 目的探讨抑制泛素样含PHD和环指域1[ubiquitin-like with plant homeodomain(PHD)and ringfinger domains 1,UHRF1]基因表达对肝癌MHCC-97H细胞增殖、周期分布和凋亡的影响。方法合成UHRF1基因特异性小发夹RNA(small hairpin RNA,shRNA),构建稳定干扰UHRF1基因表达的重组慢病毒LV-shUHRF1作为LV-shUHRF1组,并将其感染MHCC-97H细胞;以空载体慢病毒LV-shNC作为阴性对照组即LV-shNC组。采用蛋白质印迹法检测UHRF1蛋白在MHCC-97H细胞中表达情况,采用CCK-8法和流式细胞术检测2组MHCC-97H细胞增殖、周期分布和凋亡情况。结果蛋白质印迹法显示,LV-shUHRF1组细胞UHRF1蛋白表达量为0.018±0.010,LV-shNC组细胞UHRF1蛋白表达量为0.818±0.031,LV-shUHRF1组细胞UHRF1蛋白表达水平明显低于LV-shNC组(P<0.05)。LV-shUHRF1组细胞的增殖能力明显低于LV-shNC组(P<0.05),G0/G1期细胞比例和细胞凋亡率明显高于LV-shNC组(P均<0.05),S期细胞比例明显低于LV-shNC组(P<0.05)。结论通过慢病毒介导的RNA干扰技术抑制UHRF1的表达后可抑制MHCC-97H细胞的增殖,阻滞细胞周期进展,促进细胞凋亡,抑制肝癌的发生和发展。 展开更多
关键词 RNA干扰 UhRF1基因 肝癌 增殖 凋亡 mhcc-97h细胞
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白花蛇舌草总黄酮对TGF-β1诱导的肝癌MHCC97-H细胞EMT的逆转作用及其机制 被引量:22
6
作者 张彦兵 朱娇 +3 位作者 肖菊香 郭亚焕 廖子君 徐瑞 《西安交通大学学报(医学版)》 CAS CSCD 北大核心 2016年第2期279-282,306,共5页
目的探讨白花蛇舌草总黄酮(FOD)对TGF-β1诱导肝癌细胞MHCC97-H上皮细胞间质转化(EMT)的逆转作用及其相关机制。方法用TGF-β1诱导MHCC97-H细胞建立EMT模型,再将其分为5组:正常对照组、TGF-β1组、TGF-β1+FOD组、TGF-β1+5-FU组及TGF-... 目的探讨白花蛇舌草总黄酮(FOD)对TGF-β1诱导肝癌细胞MHCC97-H上皮细胞间质转化(EMT)的逆转作用及其相关机制。方法用TGF-β1诱导MHCC97-H细胞建立EMT模型,再将其分为5组:正常对照组、TGF-β1组、TGF-β1+FOD组、TGF-β1+5-FU组及TGF-β1+FOD+5-FU组,分别干预48h,Transwell侵袭小室法检测细胞体外侵袭能力,Western blot法检测各组细胞中E-cadherin、vimentin蛋白的表达。结果与正常细胞形态相比,TGF-β1诱导后细胞呈现明显的长梭形,且侵袭能力增强(P=0.02);给予药物处理后,TGF-β1+FOD组、TGF-β1+5-FU组细胞的穿透能力较TGF-β1组减弱(P=0.03、P=0.02),且联合用药组减弱程度更加明显(P=0.01);Western blot结果显示,TGF-β1组细胞中E-cadherin蛋白表达显著降低(P=0.01),vimentin蛋白的表达显著增加(P=0.01),TGF-β1+FOD组、TGF-β1+5-FU组E-cadherin蛋白表达有所上调(P=0.03、P=0.02),vimentin蛋白的表达有所下调(P=0.04、P=0.03),且联合组变化更为显著(P=0.01)。结论 FOD能够逆转TGF-β1诱导的肝癌MHCC97-H细胞的上皮间质转化,其机制可能与其抑制TGF-β1诱导的E-cadherin蛋白下调及上皮细胞间质转化相关。 展开更多
关键词 mhcc97-h细胞 TGF-Β1 上皮间质转化 白花蛇舌草总黄酮 侵袭 E-CADhERIN VIMENTIN
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黄芪甲苷对肝癌细胞增殖和侵袭能力的影响及其机制研究 被引量:17
7
作者 马鹏飞 阮柏 +1 位作者 王德盛 窦科峰 《现代肿瘤医学》 CAS 2014年第5期1012-1015,共4页
目的:研究黄芪甲苷对肝癌细胞系MHCC97-H增殖和侵袭能力的影响。方法:MTT法检测5、10、20、40、80、100μg/ml不同终浓度和24、48、72h作用时间下黄芪甲苷对MHCC97-H细胞增殖的影响。Transwell侵袭实验检测100μg/ml黄芪甲苷处理48小时... 目的:研究黄芪甲苷对肝癌细胞系MHCC97-H增殖和侵袭能力的影响。方法:MTT法检测5、10、20、40、80、100μg/ml不同终浓度和24、48、72h作用时间下黄芪甲苷对MHCC97-H细胞增殖的影响。Transwell侵袭实验检测100μg/ml黄芪甲苷处理48小时对MHCC97-H细胞侵袭能力的影响。选择100μg/ml黄芪甲苷处理48小时作为处理条件,实时定量PCR、Western blot检测黄芪甲苷处理后MHCC97-H细胞MMP-2、9 mRNA和蛋白质表达水平的变化,明胶酶谱法检测黄芪甲苷处理后MHCC97-H细胞培养上清中MMP-2、9分泌水平的变化。结果:各浓度和作用时间下黄芪甲苷对MHCC97-H细胞增殖均无明显抑制作用。100μg/ml黄芪甲苷处理48小时后,MHCC97-H细胞侵袭能力降低,MMP-2、9分子mRNA和蛋白质表达水平均下降,且细胞培养上清中分泌的MMP-2、9减少。结论:体外黄芪甲苷对MHCC97-H细胞增殖无明显抑制作用,但黄芪甲苷可以通过降低MHCC97-H细胞MMP-2、9分子的表达起到降低其细胞侵袭能力的作用。 展开更多
关键词 黄芪甲苷 肝癌 mhcc97-h细胞 增殖 侵袭
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穿心莲内酯对人肝癌细胞MHCC97H增殖的影响及其机制研究 被引量:11
8
作者 刘红英 王协奇 +4 位作者 袁丽娜 刘影 彭燕 罗碧怡 何青莲 《广州中医药大学学报》 CAS 2019年第3期395-402,共8页
【目的】观察穿心莲内酯(Andro)对人肝癌细胞MHCC97H增殖的影响及作用机制,探讨其体外抗肝癌作用。【方法】采用四甲基偶氮唑盐(MTT)法检测Andro不同浓度(5、10、20、30、40、50μmol/L)及不同处理时间(24、48、72 h)对MHCC97H细胞增殖... 【目的】观察穿心莲内酯(Andro)对人肝癌细胞MHCC97H增殖的影响及作用机制,探讨其体外抗肝癌作用。【方法】采用四甲基偶氮唑盐(MTT)法检测Andro不同浓度(5、10、20、30、40、50μmol/L)及不同处理时间(24、48、72 h)对MHCC97H细胞增殖的影响;采用Annexin V—碘化丙啶(PI)双染法、Hoechst 33342染色法观察细胞凋亡;采用流式细胞术检测细胞周期分布;采用蛋白免疫印迹(Western blot)方法检测凋亡相关蛋白如Bax、B淋巴细胞瘤2(Bcl-2)、裂解型胱天蛋白酶3(cleaved-caspase-3)、剪切型聚腺苷二磷酸核糖聚合酶(cleaved-PAPR),周期相关蛋白如周期素B1(cyclin B1)、周期素依赖性激酶1(CDK1)及哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)信号通路相关蛋白如m TOR、p70核糖体蛋白S6激酶(p70S6K)的表达。【结果】穿心莲内酯5、10、20、30、40、50μmol/L组24、48、72 h MHCC97H细胞增殖率下降,且随着Andro浓度、处理时间的增加而逐渐降低。Andro 25、50μmol/L组12、24、48 h MHCC97H细胞凋亡率均升高,呈浓度和时间依赖性。Andro 50μmol/L组48 h MHCC97H细胞发生G2/M期阻滞。与溶剂对照组比较,Andro 50μmol/L组中促凋亡蛋白Bax、cleaved-caspase-3、cleaved-PARP表达升高(P<0.05或P<0.01),抗凋亡蛋白Bcl-2表达降低(P<0.01),周期蛋白cyclin B1和CDK1表达及mTOR信号通路蛋白mTOR、p70S6K的磷酸化水平均下降(P<0.05或P<0.01或P<0.001)。【结论】Andro可能通过调控MHCC97H细胞凋亡相关蛋白Bax、cleaved-caspase-3、cleaved-PARP、Bcl-2及周期相关蛋白cyclin B1、CDK1的表达及抑制mTOR-p70S6K信号通路的激活,促进细胞凋亡及细胞周期阻滞,从而发挥体外抗肝癌作用。 展开更多
关键词 穿心莲内酯 肝癌 细胞增殖 细胞周期 细胞凋亡 MTOR信号通路 mhcc97h细胞
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Effects of KAI1 gene on growth and invasion of human hepatocellular carcinoma MHCC97-H cells 被引量:12
9
作者 Sui-HaiSi Jian-MinYang Zhi-HongPeng Yuan-HuiLuo PingZhou 《World Journal of Gastroenterology》 SCIE CAS CSCD 2004年第14期2019-2023,共5页
AIM: To study the effects of sense and antisense KAI1 genes on the growth and invasion of human hepatocellular carcinoma (HCC) cell line MHCC97-H.METHODS: KAI1 sense and antisense eukaryotic expression plasmids were c... AIM: To study the effects of sense and antisense KAI1 genes on the growth and invasion of human hepatocellular carcinoma (HCC) cell line MHCC97-H.METHODS: KAI1 sense and antisense eukaryotic expression plasmids were constructed using subclone technique and transfected into MHCC97-H cells respectively by DOTAP liposome. After successful transfection was confirmed, in vitro growth curve, cell cycles, plate clone formation efficiency, invasive ability in Boyden Chamber assay and ultrastructural morphology were studied.RESULTS: KAI1 sense and antisense genes had no significant effects on the cell growth curve and cell cycles.After transfection with sense KAI1 gene, decreased invasive ability in Boyden Chamber assay and decreased amount of mitochondria, but no significant changes of plate clone formation efficiency were observed in MHCC97-H-S cells.The plate clone formation efficiency and invasive ability in Boyden Chamber assay were significantly increased in MHCC97-H-AS cells, after transfection with antisense KAI1 gene. Furthermore, increased amount of mitochondria,rough endoplasmic reticulum, Golgi apparatus and expanded endoplasmic reticulum were also noted in MHCC97-H-AS cells.CONCLUSION: Changes of KAI1 expression in HCC cells may alter their invasive and metastasis ability of the tumor. 展开更多
关键词 KAI1基因 基因生长 基因入侵 细胞 肿瘤 mhcc97-h细胞 hCC
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猫爪草皂苷对高转移肝癌细胞株HCCLM3及MHCC97-H增殖的影响 被引量:10
10
作者 刘帅 梁铁军 +1 位作者 王爱武 高桂新 《山东医药》 CAS 北大核心 2015年第6期8-10,共3页
目的观察猫爪草皂苷(RRTS)对人高转移肝癌细胞株HCCLM3、MHCC97-H增殖的影响。方法将对数生长期HCCLM3、MHCC97-H细胞分为两组。RRTS组分别采用50、100、200、400μg/m L浓度的RRTS干预,每浓度5个复孔;5-FU组采用50μg/m L的5-FU干预,... 目的观察猫爪草皂苷(RRTS)对人高转移肝癌细胞株HCCLM3、MHCC97-H增殖的影响。方法将对数生长期HCCLM3、MHCC97-H细胞分为两组。RRTS组分别采用50、100、200、400μg/m L浓度的RRTS干预,每浓度5个复孔;5-FU组采用50μg/m L的5-FU干预,作用后72 h采用MTT法测定两组细胞增殖情况,倒置显微镜下观察细胞形态变化。结果 RRTS组各浓度对HCCLM3、MHCC97-H肿瘤细胞株的生长均有不同程度的抑制作用,随RRTS浓度增加,抑制作用明显增强,呈量—效依赖关系(P均<0.05);400μg/m L对两种细胞的生长抑制率与5-FU组比较差异无统计学意义。倒置显微镜下观察,两种细胞株经RRTS处理后,细胞密度降低,细胞相互分离,贴壁脱落,出现片状无细胞生长区,并见细胞碎片,细胞变圆,体积减小,核固缩,核颜色加深,折光性增强,随着RRTS剂量增加,这种变化更加明显。400μg/m L浓度的RRTS对肿瘤细胞的生长抑制作用与5-FU组相似。结论RRTS对HCCLM3、MHCC97-H细胞生长均有抑制作用。 展开更多
关键词 猫爪草 皂苷 细胞 hCCLM3细胞 mhcc97-h细胞 细胞增殖
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联苯双酯抗人高转移肝癌细胞株MHCC97-H侵袭转移的作用及其机制研究 被引量:8
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作者 孙华 刘耕陶 《癌症》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2006年第12期1464-1469,共6页
背景与目的:侵袭转移是肝细胞肝癌(hepatocellularcarcinoma,HCC)预后差,死亡率高的重要原因之一。抑制肝癌细胞的侵袭转移是降低HCC发展和死亡率的重要策略。联苯双酯(dimethyldicarboxylatebiphenyl,DDB)是临床用于治疗肝炎的老药,本... 背景与目的:侵袭转移是肝细胞肝癌(hepatocellularcarcinoma,HCC)预后差,死亡率高的重要原因之一。抑制肝癌细胞的侵袭转移是降低HCC发展和死亡率的重要策略。联苯双酯(dimethyldicarboxylatebiphenyl,DDB)是临床用于治疗肝炎的老药,本研究旨在观察DDB对人肝癌细胞的粘附和侵袭是否具有抑制潜力,并分析其可能的作用机制。方法:以人高转移肝癌细胞株MHCC97-H细胞为研究对象,MTT法检测DDB对MHCC97-H细胞的细胞毒作用及其对细胞与层粘连蛋白(laminin,LN)、纤维粘连蛋白(fibronectin,FN)粘附的影响;Transwell细胞培养小室观察DDB对细胞侵袭能力的影响;逆转录聚合酶链反应(reversetranscription-polymerasechainreaction,RT-PCR)分析DDB对血管内皮生长因子(vascularendothelialgrowthfactor,VEGF)、尿激酶型纤溶酶原激活物受体(urokinase-typeplasminogenactivatorreceptor,uPAR)、nm23-H1mRNA表达的影响;ELISA法分析DDB对甲胎蛋白(alphafetoprotein,AFP)分泌的影响;流式细胞仪观察DDB对AFP表达的影响。结果:DDB在对细胞无明显毒性的浓度下(10、50和100μmol/L),能够明显抑制高转移人肝癌细胞MHCC97-H与FN、LN的粘附;50和100μmol/LDDB能够抑制MHCC97-H细胞穿透人工基底膜的侵袭能力,抑制率分别为25.8%和32.3%,并能降低MHCC97-H细胞VEGF、nm23-H1及uPARmRNA的表达,50、100和200μmol/LDDB对MHCC97-H细胞AFP的分泌有明显抑制作用,抑制率分别为16.5%、17.5%和48.5%,DDB亦能降低AFP的表达。结论:DDB在无毒浓度下,对人高转移肝癌细胞株MHCC97-H细胞的侵袭转移有明显的抑制作用,该作用可能与其抑制VEGF和uPAR基因表达有关。 展开更多
关键词 联苯双酯(DDB) 肝肿瘤 mhcc97-h细胞 侵袭 转移
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紫花牡荆素通过miR-148a-3p/Wnt1信号通路抑制肝癌MHCC97H细胞的迁移和侵袭 被引量:2
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作者 娄磊 王靓厚 +1 位作者 王智 李翔 《中国药理学通报》 CAS CSCD 北大核心 2023年第5期868-875,共8页
目的用紫花牡荆素(casticin,CAS)处理MHCC97H细胞,观察其迁移和侵袭能力的变化,并初步探讨CAS的分子作用机制。方法CCK-8试剂盒检测不同浓度CAS对MHCC97H细胞活力的影响;分组开展细胞迁移和侵袭实验,评估MHCC97H细胞的迁移和侵袭能力;... 目的用紫花牡荆素(casticin,CAS)处理MHCC97H细胞,观察其迁移和侵袭能力的变化,并初步探讨CAS的分子作用机制。方法CCK-8试剂盒检测不同浓度CAS对MHCC97H细胞活力的影响;分组开展细胞迁移和侵袭实验,评估MHCC97H细胞的迁移和侵袭能力;逆转录荧光定量PCR(RT-qPCR)检测CAS处理后,MHCC97H细胞的miR-148a-3p和Wnt1 mRNA表达变化;迁移侵袭相关蛋白(MMP2、MMP9)和Wnt1蛋白表达量采用Western blot检测;Dual-Luciferase报告基因检测miR-148a-3p与Wnt13′-UTR的结合情况。结果CAS明显抑制MHCC97H细胞的生存活力,其对这种细胞的IC_(50)约为10.0μmol·L^(-1),亚细胞毒浓度的CAS(3.0μmol·L^(-1))可减弱这种细胞的迁移和侵袭能力;miR-148a-3p mimic或CAS均能抑制MHCC97H细胞迁移和侵袭能力,且两者联合处理后的抑制作用强于单独使用;过表达Wnt1能有效减弱CAS的抑制作用;CAS能明显上调MHCC97H细胞miR-148a-3p表达,同时Wnt1、MMP2和MMP9的表达呈现下降;Dual-Luciferase报告基因发现,miR-148a-3p可以直接靶向Wnt13′-UTR。结论CAS可通过miR-148a-3p/Wnt1信号通路减弱肝癌细胞的迁移和侵袭。 展开更多
关键词 紫花牡荆素 肝癌 mhcc97h细胞 miR-148a-3p/Wnt1信号通路 细胞迁移 细胞侵袭
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雌激素通过调节AKT信号通路活性抑制肝癌细胞的侵袭和转移 被引量:6
13
作者 田长印 张欣 +3 位作者 赵文学 党双锁 靳耀锋 纪泛扑 《南方医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2016年第12期1621-1625,共5页
目的探讨雌激素对MHCC97H肝癌细胞侵袭转移的作用及其相应机制。方法利用划痕试验检测雌激素对MHCC97H肝癌细胞迁移能力的影响。Transwell小室法检测雌激素对MHCC97H肝癌细胞侵袭能力的影响。利用Western blotting法检测雌激素对MHCC97... 目的探讨雌激素对MHCC97H肝癌细胞侵袭转移的作用及其相应机制。方法利用划痕试验检测雌激素对MHCC97H肝癌细胞迁移能力的影响。Transwell小室法检测雌激素对MHCC97H肝癌细胞侵袭能力的影响。利用Western blotting法检测雌激素对MHCC97H肝癌细胞中MMP-2和MMP-9表达水平的影响。检测雌激素对MHCC97H肝癌细胞中AKT和p-AKT蛋白表达水平的影响。结果雌激素能够有效抑制MHCC97H肝癌细胞的迁移和侵袭能力,随着浓度的升高抑制能力逐渐增强,0.1μmol/L和1μmol/L浓度组MHCC97H肝癌细胞穿过基质胶到达小室底端的细胞数目分别为对照组的(68.99±15.74)%和(34.28±8.17)%(P<0.05)。雌激素能够有效抑制MHCC97H肝癌细胞中MMP-2和MMP-9的表达,当浓度为1μmol/L时,差异具有统计学意义(P<0.05)。雌激素能够有效抑制MHCC97H肝癌细胞AKT的磷酸化水平,当浓度为1μmol/L时,磷酸化水平为对照组的(90±2)%(P<0.05)。结论雌激素能够有效抑制MHCC97H肝癌细胞的迁移和侵袭,这种作用可能部分与调节AKT信号通路的活性进一步调节MMP-2和MMP-9的表达有关。然而,需要进一步的深入研究以证实这种作用关系。 展开更多
关键词 雌激素 mhcc97h细胞 侵袭 AKT信号通路 基质金属蛋白酶
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IGF-1R阻断剂抑制人肝癌细胞MHCC97-H增殖转移的研究 被引量:6
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作者 姬媛媛 王志东 +4 位作者 王宝太 杨正安 周晓荣 史敏 徐慧荔 《现代肿瘤医学》 CAS 2016年第5期681-685,共5页
目的:探讨IGF-1R阻断剂在人肝癌细胞MHCC97-H增殖转移中的作用。方法:培养人肝癌细胞株MHCC97-H,预先给予IGF-1R阻断剂鬼臼苦素(picropodophyllin,PPP)10μmol/L干预1h,然后给予IGF-II 50ng/ml作用48h,观察各组细胞形态变化,噻唑兰(MTT... 目的:探讨IGF-1R阻断剂在人肝癌细胞MHCC97-H增殖转移中的作用。方法:培养人肝癌细胞株MHCC97-H,预先给予IGF-1R阻断剂鬼臼苦素(picropodophyllin,PPP)10μmol/L干预1h,然后给予IGF-II 50ng/ml作用48h,观察各组细胞形态变化,噻唑兰(MTT)法分析细胞生长情况,Brdu法检测细胞增殖潜能,平板克隆实验观察并计算细胞克隆形成率,Real-time PCR及Western blot法观察细胞增殖核抗原(PCNA)、基质金属蛋白酶-9、-2(MMP-9、MMP-2)mRNA及蛋白表达情况,进一步分析细胞增殖转移情况。结果:IGF-1R阻断剂PPP可使MHCC97-H细胞形态发生明显改变;IGF-1R阻断剂PPP显著抑制MHCC97-H细胞存活率、细胞增殖及克隆形成(P<0.05);与对照组相比,IGF-II组MHCC97-H细胞中PCNA、MMP-9及MMP-2的mRNA和蛋白表达显著升高(P<0.05),而与IGF-II组相比,IGF-1R阻断剂PPP可明显抑制MHCC97-H细胞中PCNA、MMP-9及MMP-2的mRNA和蛋白表达(P<0.05)。结论:IGF-1R阻断剂通过抑制人肝癌细胞MHCC97-H生长增殖,下调PCNA、MMP-9及MMP-2的表达,发挥阻碍人肝癌细胞MHCC97-H增殖转移的功效。 展开更多
关键词 IGF-1R阻断剂 增殖 转移 mhcc97-h细胞
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转录共激活子TAZ对肝癌细胞株MHCC97H增殖能力的影响 被引量:5
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作者 张雷 王林 +3 位作者 耿智敏 万永 孟凡迪 孟宪魁 《实用癌症杂志》 2017年第8期1219-1223,共5页
目的观察转录共激活子TAZ对肝癌细胞株MHCC97H的增殖能力的影响,以期对阐明原发性肝细胞癌(HCC)的发生发展机制提供1个新的研究思路。方法应用细胞转染、RNA干扰(RNAi)以及过表达技术,在肝癌细胞株MHCC97H中干预TAZ的表达。在转染后提... 目的观察转录共激活子TAZ对肝癌细胞株MHCC97H的增殖能力的影响,以期对阐明原发性肝细胞癌(HCC)的发生发展机制提供1个新的研究思路。方法应用细胞转染、RNA干扰(RNAi)以及过表达技术,在肝癌细胞株MHCC97H中干预TAZ的表达。在转染后提取细胞RNA和总蛋白,应用qRT-PCR和Western blot等方法检测TAZ、Nek7的表达。选用细胞计数kit-8(CCK-8)法检测细胞活性和增殖能力。结果与NC组相比,转染了TAZ特异性靶向干扰片段之后,TAZ的mRNA与蛋白表达水平均出现下调,差异具有统计学意义(P<0.0001);Nek7表达也出现下降,差异具有统计学意义(P<0.0001);功能实验(CKK8)发现MHCC97H细胞活性和增殖能力也降低,差异具有统计学意义(P<0.001)。另一方面,过表达了TAZ之后,Nek7表达水平也相应上调了,差异具有统计学意义(P<0.0001);MHCC97H细胞活性和增殖能力也提高,差异具有统计学意义(P<0.001)。结论转录共激活子TAZ能通过调控Nek7的表达对肝癌细胞MHCC97H的增殖能力产生影响,该发现对于阐明TAZ在肝癌发生发展过程中的作用提供一定的实验基础。 展开更多
关键词 TAZ Nek7 肝癌 mhcc97h细胞 增殖
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KAI1基因对人肝癌细胞MHCC97-H粘附作用的影响 被引量:4
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作者 于有 韩德恩 刘伟 《癌症》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2007年第5期498-503,共6页
背景与目的:研究表明,KAI1基因对多种恶性肿瘤细胞具有转移抑制作用。本研究旨在通过探讨KAI1基因对具有高转移潜能的人肝癌细胞株MHCC97-H粘附作用的影响,揭示其转移抑制的分子生物学机制。方法:将载有KAI1基因的质粒转染入具有高转移... 背景与目的:研究表明,KAI1基因对多种恶性肿瘤细胞具有转移抑制作用。本研究旨在通过探讨KAI1基因对具有高转移潜能的人肝癌细胞株MHCC97-H粘附作用的影响,揭示其转移抑制的分子生物学机制。方法:将载有KAI1基因的质粒转染入具有高转移潜能的MHCC97-H细胞,观察细胞的生长状态,运用ELISA、Western blot等方法测定细胞产生的可溶性细胞间粘附因子-1(sICAM-1)和E-钙粘连蛋白的变化,并通过集落形成实验、细胞粘附实验判定细胞的粘附特点。结果:转染KAI1基因的MHCC97-H细胞形态与转染前无明显差别,但胞浆内黑染颗粒增加;同时细胞分泌的sICAM-1以及细胞内E-钙粘连蛋白较转染前减少,在传代后第4天分别减少24.28%和26.02%。3h及4h的细胞粘附率分别下降11.34%和24.00%,克隆形成率则没有明显变化。结论:KAI1基因改变了MHCC97-H细胞的生长方式和细胞增殖情况,使细胞分泌的sICAM-1以及细胞内E-钙粘连蛋白的量明显减少,使细胞粘附率降低。 展开更多
关键词 肝肿瘤 mhcc97-h细胞 粘附作用 KAI1基因
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骨髓间充质干细胞对经转化生长因子β1、骨桥蛋白基因沉默肝癌细胞MHCC97-H的影响 被引量:5
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作者 李天然 黄晓斌 +2 位作者 黄楚恒 卢光明 李延军 《中国组织工程研究》 CAS 北大核心 2017年第5期687-692,共6页
背景:骨髓间充质干细胞对肝癌增殖能力和转移能力的影响是研究的热点,可通过基因工程技术对肝癌细胞进行改造,使其降低生物活性因子的表达,从而寻找合适的干预靶点,提高骨髓间充质干细胞的干预效能。目的:经转化生长因子β1、骨桥蛋白... 背景:骨髓间充质干细胞对肝癌增殖能力和转移能力的影响是研究的热点,可通过基因工程技术对肝癌细胞进行改造,使其降低生物活性因子的表达,从而寻找合适的干预靶点,提高骨髓间充质干细胞的干预效能。目的:经转化生长因子β1、骨桥蛋白基因沉默的高转移潜能肝癌细胞(MHCC97-H)与骨髓间充质干细胞共培养,观察MHCC97-H细胞侵袭能力的变化,并通过动物模型荧光成像观察骨髓间充质干细胞对MHCC97-H肝癌组织动物模型的干预作用。方法:(1)将MHCC97-H细胞细胞分为4组,MHCC97-H设为空白对照组,MHCC97-H基因沉默转染阴性对照为阴性对照组,MHCC97-H-转化生长因子β1为转化生长因子β1基因沉默组,MHCC97-H-骨桥蛋白为骨桥蛋白基因沉默组;(2)Transwells法进行各组细胞与骨髓间充质干细胞共培养实验,48 h后结晶紫染色,随机取3个视野,计数;(3)结合有红色荧光蛋白基因的各组MHCC97-H细胞株,分别自裸鼠右侧腋下接种复制皮下移植瘤模型。肿瘤体积到50 mm3开始瘤内注射骨髓间充质干细胞,4周后进行荧光强度分析;肝癌组织冰冻切片二脒基苯基吲哚细胞核染色后行荧光显微镜观察。结果与结论:(1)细胞计数结果表明,骨髓间充质干细胞使经基因沉默后的MHCC97-H细胞迁移数量明显减少;结晶紫染色病理图片显示,经基因修饰的MHCC97-H细胞迁移能力明显降低;(2)体内荧光成像结果显示,骨桥蛋白基因沉默组肿瘤体积明显缩小,荧光亮度低于其他组别,定量结果显示骨桥蛋白基因沉默组吸光度值明显降低,表明骨髓间充质干细胞对经骨桥蛋白干扰的MHCC97-H高转移潜能肝癌动物模型干预效能最佳;(3)病理切片荧光观察结果显示,骨髓间充质干细胞主要分布在肿瘤坏死区附近,骨桥蛋白基因沉默组荧光表达较转化生长因子β1基因沉默组和空白对照组多,表明MHCC97-H细胞经骨桥蛋白基因沉默后骨髓间充� 展开更多
关键词 细胞 间质干细胞 骨髓 肝肿瘤 模型 动物 骨髓干细胞 肿瘤 骨髓间充质干细胞 转化生长因子Β1 骨桥蛋白 mhcc97-h细胞 动物模型 国家自然科学基金
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靶向整合于MHCC97-H细胞的HBx基因shRNA表达载体的构建和鉴定 被引量:4
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作者 王文龙 孙会卿 +3 位作者 杨旭 贺兴鄂 雷建华 童明 《中国医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2008年第4期445-447,451,共4页
目的构建靶向整合于人肝癌MHCC97-H细胞乙型肝炎病毒x基因(HBxgene)基因的shRNA真核载体。方法依据从人肝癌细胞株MHCC97-H中克隆的HBx基因序列,设计合成X169、X220及MOCK(无关对照)3对寡核酸,经退火成互补双链并克隆至pGenesil-Ⅰ载体... 目的构建靶向整合于人肝癌MHCC97-H细胞乙型肝炎病毒x基因(HBxgene)基因的shRNA真核载体。方法依据从人肝癌细胞株MHCC97-H中克隆的HBx基因序列,设计合成X169、X220及MOCK(无关对照)3对寡核酸,经退火成互补双链并克隆至pGenesil-Ⅰ载体;经酶切、PCR和测序鉴定;将鉴定的shRNA质粒脂质体转染MHCC97-H细胞,流式细胞分析转染效率。结果酶切、PCR及测序证实pshRNA-X169/X220/MOCK质粒构建符合设计,转染48h后MHCC97-H细胞可激发绿色荧光,pshRNA-X220转染效率最低。结论成功构建靶向整合于人肝癌细胞HBVx基因特异性shRNA表达载体,并成功转染人肝癌细胞株MHCC97-H细胞,为沉默HBx基因实验性肝癌基因治疗奠定基础。 展开更多
关键词 RNA干扰 短发夹RNA 乙型肝炎病毒X基因 mhcc97-h细胞 整合
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狼毒大戟提取物对人肝癌细胞上皮间质化的影响 被引量:3
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作者 杨勤 杨德全 龚伟 《现代医药卫生》 2018年第17期2625-2628,共4页
目的探讨不同提取部位的狼毒大戟对人肝癌细胞MHCC97H上皮间质化(EMT)的影响。方法采用乙醇回流提取法对狼毒大戟进行萃取,获得乙酸乙酯、正丁醇、石油醚、氯仿等4个提取部位。采用四甲基偶氮唑盐法筛选抗肿瘤有效部位。利用划痕试验和T... 目的探讨不同提取部位的狼毒大戟对人肝癌细胞MHCC97H上皮间质化(EMT)的影响。方法采用乙醇回流提取法对狼毒大戟进行萃取,获得乙酸乙酯、正丁醇、石油醚、氯仿等4个提取部位。采用四甲基偶氮唑盐法筛选抗肿瘤有效部位。利用划痕试验和Transwell小室试验检测有效提取部位对人高转移肝癌细胞MHCC97H迁移和侵袭能力的影响。利用蛋白质印迹法检测狼毒大戟提取物对MHCC97H肝癌细胞中E-cadherin和Vimentin蛋白表达水平的影响。结果狼毒大戟乙酸乙酯、正丁醇提取部位对MHCC97H均有抑制作用,且呈现一定的时间和剂量依赖性。乙酸乙酯提取部位对细胞的抑制作用强于正丁醇。而石油醚和氯仿提取部位对MHCC97H无明显的抑制作用。划痕试验和Transwell小室试验显示,狼毒大戟乙酸乙酯和正丁醇提取部位能够有效抑制MHCC97H肝癌细胞的迁移和侵袭能力;两者的抑制能力随着浓度升高而逐渐增强;两者能提高MHCC97H肝癌细胞中E-cadherin蛋白的表达,抑制细胞中Vimentin蛋白的表达。结论狼毒大戟乙酸乙酯提取部位是抗肝癌增殖和侵袭转移作用的主要活性部位,其作用可能与调节E-cadherin和Vimentin表达有关。 展开更多
关键词 狼毒大戟 mhcc97h细胞 上皮间质化 E-钙黏蛋白 波形蛋白
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KAI1基因对MHCC97-H细胞裸鼠成瘤及转移的影响 被引量:3
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作者 彭志红 杨建民 +3 位作者 唐波 司遂海 房殿春 罗元辉 《世界华人消化杂志》 CAS 2004年第4期778-781,共4页
目的:研究肿瘤转移抑制基因KAI1对MHCC97-H细胞裸鼠成瘤及转移的影响. 方法:将已转染KAIl正、反义核苷酸的高转移潜能肝癌细胞MHCC97-H接种裸鼠皮下,观察皮下肿瘤生长情况, 再将皮下肿瘤组织进行裸鼠原位肝接种,观察接种后肿瘤肺转移情... 目的:研究肿瘤转移抑制基因KAI1对MHCC97-H细胞裸鼠成瘤及转移的影响. 方法:将已转染KAIl正、反义核苷酸的高转移潜能肝癌细胞MHCC97-H接种裸鼠皮下,观察皮下肿瘤生长情况, 再将皮下肿瘤组织进行裸鼠原位肝接种,观察接种后肿瘤肺转移情况.其中,转染空载体及未转染的MHCC97-H亲本细胞作为实验对照组. 结果:正义组、反义组、空载体组及亲本细胞组裸鼠皮下均成瘤,肿瘤出现的时间、肿瘤块生长的速度无明显差异, 生长方式上反义组表现出明显的侵袭性.原位肝接种6 wk 后裸鼠肺部均出现癌巢,AFP染色可见癌巢中肿瘤细胞质有黄色颗粒沉着,证实为肝癌转移至肺形成的转移灶.与MHCC97-H亲本细胞组比较,反义组转移灶数目明显增加(P=0.00158),正义组转移灶数目明显减少(P=0.00465),差异均有显著性,而载体组传移灶数目无明显变化(P=0.15166). 结论:肿瘤转移抑制基因KAI1对MHCC97-H细胞裸鼠成瘤性及肿瘤生长无明显影响,但上调KAI1蛋白的表达水平能在一定程度上降低肿瘤的侵袭性、抑制转移的发生.这为肝癌的抗转移治疗研究提供了重要线索. 展开更多
关键词 KAl1基因 mhcc97-h细胞 裸鼠 肿瘤组织 肿瘤细胞
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