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构建MHCⅡ类分子反式激活因子基因突变体抑制转染细胞HLAⅡ类分子的表达 被引量：5
1
作者 欧启水 林琳 +2 位作者 黄立东 陆佩华 周光炎 《中华微生物学和免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2002年第3期312-315,共4页
目的　探讨MHCⅡ类分子反式激活因子 (CⅡTA)突变体抑制HLAⅡ类分子表达的可能性。方法　构建不含起始密码子的pcDNA3mCⅡTA2、含起始密码子的pcDNA3mCⅡTA3和含起始密码子及NLS(nuclearlocalizationsignal)的pcDNA3mCⅡTA4突变体。用... 目的　探讨MHCⅡ类分子反式激活因子 (CⅡTA)突变体抑制HLAⅡ类分子表达的可能性。方法　构建不含起始密码子的pcDNA3mCⅡTA2、含起始密码子的pcDNA3mCⅡTA3和含起始密码子及NLS(nuclearlocalizationsignal)的pcDNA3mCⅡTA4突变体。用脂质体转染法将上述 3种突变体及pcDNA3空载体转入HeLa细胞和Raji细胞。用流式细胞术和RT PCR法观察它们对HeLa/Raji细胞HLA DR/DQ分子的诱导性和组成性表达的影响。结果　在细胞和基因水平证实pcDNA3mCⅡTA3和pcDNA3mCⅡTA4对HeLa/Raji细胞HLA DR/DQ的表达起明显抑制作用 ,而pcDNA3mCⅡTA2和pcDNA3空载体无此作用。 展开更多
关键词 mhcⅱ类分子反式激活因子 突变体构建 HLA-DR/DQ 基因转染 流式细胞术 RT-PCR法
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用优化的OE-PCR法构建CⅡTA中间缺失突变体 被引量：3
2
作者 管政 沈茜 《第二军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2006年第9期1014-1017,共4页
目的：以构建缺失第109～226位氨基酸密码子的MHCII类分子反式激活因子（MHCclass Ⅱ molecule transactivator，CIITA）突变体为例探索一种简便、稳定的构建中间缺失突变体的方法。方法：首先按照传统重叠延伸PCR方法的原理扩增缺失片... 目的：以构建缺失第109～226位氨基酸密码子的MHCII类分子反式激活因子（MHCclass Ⅱ molecule transactivator，CIITA）突变体为例探索一种简便、稳定的构建中间缺失突变体的方法。方法：首先按照传统重叠延伸PCR方法的原理扩增缺失片段两端的基因片段，再将两片段混合，在不加入外围引物的情况下进行8次PCR循环以有效完成重叠延伸，然后再加入引物进行目的片段指数扩增，将扩增产物直接克隆至真核表达载体pIRES。结果：成功地构建出缺失第109～226位氨基酸密码子的CⅡTA突变体。结论：优化后的重叠延伸PCR法（OE—PCR）克服了传统方法的诸多弊端，非常适合于构建中间缺失突变体，值得推广。 展开更多
关键词 重叠延伸PCR法 中间缺失突变体 mhcⅱ类分子反式激活因子
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CⅡTA与疾病的关系及潜在应用前景 被引量：1
3
作者 龚玲 赵英仁 《国外医学（流行病学．传染病学分册）》 2003年第4期231-233,共3页
近年来发现的MHCⅡ类分子反式激活因子(MHC classⅡtransactivator, CⅡTA)是对MHCⅡ类分子起严格且专一调控作用的转录激活因子。CⅡTA的表达对维持机体免疫功能的稳定与平衡至关重要,其异常表达与多种感染性疾病及自身免疫病的发生发... 近年来发现的MHCⅡ类分子反式激活因子(MHC classⅡtransactivator, CⅡTA)是对MHCⅡ类分子起严格且专一调控作用的转录激活因子。CⅡTA的表达对维持机体免疫功能的稳定与平衡至关重要,其异常表达与多种感染性疾病及自身免疫病的发生发展密切相关。CⅡTA及其人工修饰构建的突变体在这些疾病的预防和治疗中有着广泛的应用前景。 展开更多
关键词 mhcⅱ类分子反式激活因子 免疫功能 感染性疾病 自身免疫疾病
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小鼠pIV启动子调控CⅡTA突变体重组腺病毒表达选择性抑制MHC Ⅱ类分子的表达
4
作者 龙宪连 管政 +4 位作者 张军 方超平 张薇薇 张倩 沈茜 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2008年第9期781-785,共5页
目的:观察受CⅡTA-pIV启动子驱动的MHCⅡ类分子反式激活因子突变体(CⅡTAm)重组腺病毒对MHC Ⅱ类分子表达的选择性抑制作用,并探讨其相关机制。方法:构建了N-端酸性氨基酸区缺失了118aa的CⅡTA突变体及其CⅡ TA-pIV启动子驱动的重组腺病... 目的:观察受CⅡTA-pIV启动子驱动的MHCⅡ类分子反式激活因子突变体(CⅡTAm)重组腺病毒对MHC Ⅱ类分子表达的选择性抑制作用,并探讨其相关机制。方法:构建了N-端酸性氨基酸区缺失了118aa的CⅡTA突变体及其CⅡ TA-pIV启动子驱动的重组腺病毒Ad-pIV-CⅡTAm,将Ad-pIV-CⅡTAm或对照腺病毒Ad-GFP感染小鼠内皮细胞株SVEC细胞和转染巨噬细胞株J774细胞,并以IFN-γ刺激。用RT-PCR检测野生型和突变型CⅡTA mRNA的表达,用流式细胞术检测MHC Ⅱ类分子在细胞表面的表达。结果:成功构建CⅡTA-pIV启动子调控下的CⅡTA突变体基因重组腺病毒表达载体Ad-pIV-CⅡ TAm;该腺病毒介导的CⅡTA突变体mRNA在SVEC和J774细胞内的表达受到IFN-γ的上调,同时抑制这些细胞上诱导型和组成型MHC Ⅱ类分子的表达。结论:Ad-pIV-CⅡTAm重组腺病毒是一种IFN-γ调控型表达载体,可有效地抑制受感染细胞上 MHC Ⅱ类分子的表达。 展开更多
关键词 mhcⅱ类分子反式激活因子突变体 pIV启动子 腺病毒科 mhc ⅱ类分子
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腺病毒介导MHC Ⅱ类分子反式激活因子突变体基因治疗小鼠实验性自身免疫性甲状腺炎
5
作者 龙宪连 管政 +4 位作者 张军 方超平 张薇薇 张倩 沈茜 《第二军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2008年第1期42-47,共6页
目的:观察腺病毒介导MHC Ⅱ类分子(major histocompatibility complex classⅡmolecules)反式激活因子突变体(CⅡTAm)基因治疗小鼠实验性自身免疫性甲状腺炎(experi mental autoi mmune thyroiditis,EAT)的效果,并探讨其可能的作用机制... 目的:观察腺病毒介导MHC Ⅱ类分子(major histocompatibility complex classⅡmolecules)反式激活因子突变体(CⅡTAm)基因治疗小鼠实验性自身免疫性甲状腺炎(experi mental autoi mmune thyroiditis,EAT)的效果,并探讨其可能的作用机制。方法:31只健康雌性CBA/J小鼠随机分成EAT模型组(n=8)、CⅡTAm治疗组(n=9)、GFP对照组(n=9)和正常对照组(n=5)。除正常对照组不作特殊处理外,其余3组均以猪甲状腺球蛋白(porcine thyroglobulin,pTg)+弗氏佐剂(com-plete or incomplete Freund adjuvant,CFA/IFA)建立EAT小鼠模型,CⅡTAm治疗组和GFP对照组分别静脉注射重组腺病毒Ad-CMV-CⅡTAm及Ad-GFP进行治疗,EAT模型组注射等量生理盐水。首次免疫后第29日处死小鼠,进行H-E染色观察甲状腺病理形态;免疫组织化学染色测定甲状腺MHCⅡ类分子表达;分析pTg刺激下脾脏淋巴细胞的增殖及其上清液中IFN-γ的分泌水平;ELISA法检测血浆中抗-pTg自身抗体滴度;流式细胞术分析外周血和脾脏淋巴细胞中CD4+T淋巴细胞上可诱导共刺激分子(inducible costi mulator,ICOS)的表达水平。结果:H-E染色结果表明,CⅡTAm治疗组甲状腺淋巴细胞浸润指数(0.3±0.5)低于EAT模型组(1.4±0.4)和GFP对照组(1.5±0.2,P<0.01)。免疫组化结果显示,EAT模型组和GFP对照组甲状腺组织有弥漫性MHC Ⅱ类分子表达,而CⅡTAm治疗组未见明显表达,正常对照组表达呈阴性。80μg/mlpTg刺激下,CⅡTAm治疗组小鼠淋巴细胞刺激指数(SI)明显低于EAT模型组或GFP对照组(P<0.05);培养上清各组IFN-γ分泌水平与SI结果类似(P<0.01)。CⅡTAm治疗组血浆抗-pTg自身抗体滴度显著低于EAT模型组或GFP对照组(P<0.01);CⅡTAm治疗组外周血和脾脏CD4+T细胞ICOS分子阳性表达率亦显著低于EAT模型组或GFP对照组(P<0.01)。结论:重组腺病毒Ad-CMV-CⅡTAm能抑制EAT小鼠甲状腺组织MHCⅡ类分子表达,抑制自身反应性T细胞增殖,减轻甲状腺炎性细胞浸润,降低� 展开更多
关键词 mhcⅱ类分子反式激活因子突变体 腺病毒科 自身免疫性甲状腺炎 基因疗法
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CⅡTA基因的应用研究进展 被引量：1
6
作者 刘刚 赵承梅 《中国实用医药》 2013年第36期252-253,共2页
人 MHC-Ⅱ类分子反式激活因子（MHC classⅡtransactivator, CⅡTA）基因全长4,543bp,含有一个3,390bp长的开放读码框,编码一个含1,130个氨基酸的蛋白（分子量为123.5kDa）。它的表达水平直接影响着MHC-Ⅱ分子的表达量,是后者表达的主... 人 MHC-Ⅱ类分子反式激活因子（MHC classⅡtransactivator, CⅡTA）基因全长4,543bp,含有一个3,390bp长的开放读码框,编码一个含1,130个氨基酸的蛋白（分子量为123.5kDa）。它的表达水平直接影响着MHC-Ⅱ分子的表达量,是后者表达的主要调控因子,此外,它还参与激活MHC-Ⅰ类基因和多种抗原递呈相关基因［1,2］。本文就CⅡTA的主要应用研究进展进行综述。 展开更多
关键词 CⅱTA mhc-ⅱ类分子反式激活因子 A基因 应用 开放读码框 mhc-Ⅰ 调控因子 相关基因
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Ⅱ类分子反式激活因子与MHC表达 被引量：1
7
作者 范荣 《国外医学（临床生物化学与检验学分册）》 2003年第1期24-25,共2页
MHC Ⅱ类分子反式激活因子 (CⅡTA)是参与MHC Ⅱ类基因转录的关键调节蛋白 ,它的调节基本上决定了MHC Ⅱ类分子的存在与否及表达程度 ,也决定了免疫应答的本质 ,因而被看作是MHC Ⅱ类基因表达的主宰调节者。
关键词 mhc-ⅱ类分子反式激活因子 mhc-ⅱ类基因转录
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