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人MEPE基因稳定表达细胞系的建立及MEPE蛋白在DNA损伤应答中的功能初探
被引量：
1
1
作者
高宁
绳纪坡
+3 位作者
于芳
林宇翔
马祖兴
胡宝成
《军事医学科学院院刊》
CSCD
北大核心
2010年第2期123-126,共4页
目的构建人MEPE基因真核表达载体,稳定转染人胚肾293T细胞,并建立稳定表达细胞株;初步探讨人MEPE蛋白在DNA损伤应答中的作用。方法将人MEPEcDNA克隆至带有HA标签的真核表达载体pREP10上,构建重组质粒;分别将载体pREP10/MEPE-HA和pREP10...
目的构建人MEPE基因真核表达载体,稳定转染人胚肾293T细胞,并建立稳定表达细胞株;初步探讨人MEPE蛋白在DNA损伤应答中的作用。方法将人MEPEcDNA克隆至带有HA标签的真核表达载体pREP10上,构建重组质粒;分别将载体pREP10/MEPE-HA和pREP10/HA转染293T细胞;经潮霉素B加压筛选阳性克隆;用RT-PCR和免疫印迹方法分别在RNA水平和蛋白水平鉴定稳定表达MEPE-HA融合蛋白的阳性细胞株;利用一定浓度的DNA损伤诱导剂喜树碱(camptothecin,CPT)处理细胞,通过MTT比色法检测不同时间点细胞存活率的变化,其趋势即可反映出不同细胞株对DNA损伤诱导剂的敏感性。结果经酶切鉴定及序列分析,人MEPE基因真核表达载体pREP10/MEPE-HA构建正确,转染人293T细胞,筛选出MEPE表达较高的细胞株,并且发现该基因的高表达可以使细胞对DNA损伤诱导剂的耐受性提高。结论成功建立了稳定表达人MEPE的293T细胞株,并对人MEPE蛋白在细胞中对DNA损伤诱导剂敏感性的影响进行了初步探讨,为进一步研究MEPE的功能奠定了基础。
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关键词
mepe
/OF
45
基因表达
细胞系
DNA损伤
原文传递
人MEPE/OF45基因的克隆及序列分析
被引量：
1
2
作者
张鸿声
高宁
+4 位作者
绳纪坡
于芳
张宏达
张勇
胡宝成
《生物技术通讯》
CAS
2008年第6期787-790,共4页
目的:克隆人MEPE/OF45全长基因,为进一步研究MEPE/OF45在DNA损伤应答中的作用及特异的信号通路奠定基础。方法:选取人宫颈癌细胞HeLa为靶细胞,从中提取总RNA,设计扩增人MEPE/OF45基因片段的特异引物,进行RT-PCR分析;用蛋白质合成抑制剂...
目的:克隆人MEPE/OF45全长基因,为进一步研究MEPE/OF45在DNA损伤应答中的作用及特异的信号通路奠定基础。方法:选取人宫颈癌细胞HeLa为靶细胞,从中提取总RNA,设计扩增人MEPE/OF45基因片段的特异引物,进行RT-PCR分析;用蛋白质合成抑制剂亚胺环己酮(CHX)对细胞进行处理,观察处理前后MEPE/OF45基因的表达情况。结果:在经CHX处理的HeLa细胞中扩增到了MEPE/OF45基因片段,随后利用重叠PCR方法获得了人MEPE/OF45全长基因,并经序列分析确证。结论:获得了人MEPE/OF45基因片段及全长基因,为阐明MEPE/OF45在细胞中复杂的功能提供了线索。
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关键词
mepe
/OF
45
基因
克隆
序列分析
亚胺环己酮
HELA细胞
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职称材料
题名
人MEPE基因稳定表达细胞系的建立及MEPE蛋白在DNA损伤应答中的功能初探
被引量：
1
1
作者
高宁
绳纪坡
于芳
林宇翔
马祖兴
胡宝成
机构
军事医学科学院生物工程研究所医学分子生物学实验室
出处
《军事医学科学院院刊》
CSCD
北大核心
2010年第2期123-126,共4页
基金
国家自然科学基金项目(30770651
30670616
+3 种基金
30370441)
国家重点基础研究发展计划项目(2005CB522506
2007CB914604)
国家"十一五"支撑项目(2006BAI23B02)
文摘
目的构建人MEPE基因真核表达载体,稳定转染人胚肾293T细胞,并建立稳定表达细胞株;初步探讨人MEPE蛋白在DNA损伤应答中的作用。方法将人MEPEcDNA克隆至带有HA标签的真核表达载体pREP10上,构建重组质粒;分别将载体pREP10/MEPE-HA和pREP10/HA转染293T细胞;经潮霉素B加压筛选阳性克隆;用RT-PCR和免疫印迹方法分别在RNA水平和蛋白水平鉴定稳定表达MEPE-HA融合蛋白的阳性细胞株;利用一定浓度的DNA损伤诱导剂喜树碱(camptothecin,CPT)处理细胞,通过MTT比色法检测不同时间点细胞存活率的变化,其趋势即可反映出不同细胞株对DNA损伤诱导剂的敏感性。结果经酶切鉴定及序列分析,人MEPE基因真核表达载体pREP10/MEPE-HA构建正确,转染人293T细胞,筛选出MEPE表达较高的细胞株,并且发现该基因的高表达可以使细胞对DNA损伤诱导剂的耐受性提高。结论成功建立了稳定表达人MEPE的293T细胞株,并对人MEPE蛋白在细胞中对DNA损伤诱导剂敏感性的影响进行了初步探讨,为进一步研究MEPE的功能奠定了基础。
关键词
mepe
/OF
45
基因表达
细胞系
DNA损伤
Keywords
mepe
/OF
45
gene
expression
cell
line
DNA
damage
分类号
Q78 [生物学—分子生物学]
原文传递
题名
人MEPE/OF45基因的克隆及序列分析
被引量：
1
2
作者
张鸿声
高宁
绳纪坡
于芳
张宏达
张勇
胡宝成
机构
军事医学科学院生物工程研究所
福建农林大学生物农药与化学生物学教育部重点实验室
福建农林大学农产品品质研究所
出处
《生物技术通讯》
CAS
2008年第6期787-790,共4页
基金
国家自然科学基金(30770651
30670616
+3 种基金
30370441)
国家重点基础研究发展计划(2005CB522506
2007CB914604)
国家"十一五"科技支撑项目(2006BAI23B02)
文摘
目的:克隆人MEPE/OF45全长基因,为进一步研究MEPE/OF45在DNA损伤应答中的作用及特异的信号通路奠定基础。方法:选取人宫颈癌细胞HeLa为靶细胞,从中提取总RNA,设计扩增人MEPE/OF45基因片段的特异引物,进行RT-PCR分析;用蛋白质合成抑制剂亚胺环己酮(CHX)对细胞进行处理,观察处理前后MEPE/OF45基因的表达情况。结果:在经CHX处理的HeLa细胞中扩增到了MEPE/OF45基因片段,随后利用重叠PCR方法获得了人MEPE/OF45全长基因,并经序列分析确证。结论:获得了人MEPE/OF45基因片段及全长基因,为阐明MEPE/OF45在细胞中复杂的功能提供了线索。
关键词
mepe
/OF
45
基因
克隆
序列分析
亚胺环己酮
HELA细胞
Keywords
mepe
/OF
45
gene
cloning
sequencing
analysis
cycloheximide
HeLa
cells
分类号
Q78 [生物学—分子生物学]
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职称材料
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
人MEPE基因稳定表达细胞系的建立及MEPE蛋白在DNA损伤应答中的功能初探
高宁
绳纪坡
于芳
林宇翔
马祖兴
胡宝成
《军事医学科学院院刊》
CSCD
北大核心
2010
1
原文传递
2
人MEPE/OF45基因的克隆及序列分析
张鸿声
高宁
绳纪坡
于芳
张宏达
张勇
胡宝成
《生物技术通讯》
CAS
2008
1
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职称材料
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