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人MEPE基因稳定表达细胞系的建立及MEPE蛋白在DNA损伤应答中的功能初探 被引量：1
1
作者 高宁 绳纪坡 +3 位作者 于芳 林宇翔 马祖兴 胡宝成 《军事医学科学院院刊》 CSCD 北大核心 2010年第2期123-126,共4页
目的构建人MEPE基因真核表达载体,稳定转染人胚肾293T细胞,并建立稳定表达细胞株;初步探讨人MEPE蛋白在DNA损伤应答中的作用。方法将人MEPEcDNA克隆至带有HA标签的真核表达载体pREP10上,构建重组质粒;分别将载体pREP10/MEPE-HA和pREP10... 目的构建人MEPE基因真核表达载体,稳定转染人胚肾293T细胞,并建立稳定表达细胞株;初步探讨人MEPE蛋白在DNA损伤应答中的作用。方法将人MEPEcDNA克隆至带有HA标签的真核表达载体pREP10上,构建重组质粒;分别将载体pREP10/MEPE-HA和pREP10/HA转染293T细胞;经潮霉素B加压筛选阳性克隆;用RT-PCR和免疫印迹方法分别在RNA水平和蛋白水平鉴定稳定表达MEPE-HA融合蛋白的阳性细胞株;利用一定浓度的DNA损伤诱导剂喜树碱(camptothecin,CPT)处理细胞,通过MTT比色法检测不同时间点细胞存活率的变化,其趋势即可反映出不同细胞株对DNA损伤诱导剂的敏感性。结果经酶切鉴定及序列分析,人MEPE基因真核表达载体pREP10/MEPE-HA构建正确,转染人293T细胞,筛选出MEPE表达较高的细胞株,并且发现该基因的高表达可以使细胞对DNA损伤诱导剂的耐受性提高。结论成功建立了稳定表达人MEPE的293T细胞株,并对人MEPE蛋白在细胞中对DNA损伤诱导剂敏感性的影响进行了初步探讨,为进一步研究MEPE的功能奠定了基础。 展开更多
关键词 mepe/OF45 基因表达 细胞系 DNA损伤
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细胞外基质磷酸糖蛋白与CHK1相互作用结构域研究
2
作者 刘星吾 刘爽 +4 位作者 吴子昂 韩佳佳 张佳琪 何贯林 魏巍 《中国体视学与图像分析》 2018年第1期88-94,共7页
目的寻找细胞外基质磷酸糖蛋白(matrix extracellular phosphoglycoprotein,osteoblasts/osteocyte factor of 45,MEPE/OF45)与细胞周期检查点激酶(checkpoint kinase,CHK1)之间相互作用的结构域,为进一步研究MEPE/OF45蛋白功能奠定基... 目的寻找细胞外基质磷酸糖蛋白(matrix extracellular phosphoglycoprotein,osteoblasts/osteocyte factor of 45,MEPE/OF45)与细胞周期检查点激酶(checkpoint kinase,CHK1)之间相互作用的结构域,为进一步研究MEPE/OF45蛋白功能奠定基础。方法构建一系列红色荧光蛋白标签的MEPE/OF45蛋白截短突变体,同时与携带绿色荧光蛋白标签CHK1蛋白共同转染成纤维细胞A1-5,利用双色荧光标记共定位方法与免疫共沉淀方法观察上述2种蛋白的相互作用。结果构建的MEPE/OF45蛋白截短突变体与CHK1蛋白共聚焦显微镜下可见共定位,免疫共沉淀实验验证MEPE蛋白与CHK1蛋白存在相互作用,并且MEPE蛋白C端400-418aa缺失后无法与CHK1蛋白共沉淀。结论初步确定MEPE/OF45蛋白与CHK1蛋白存在相互作用,并且相互作用结构域在MEPE/OF45蛋白的C端400~418 aa之间。 展开更多
关键词 mepe/OF45 CHK1 蛋白相互作用
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MEPE／OF45蛋白的抗体制备与细胞内定位研究 被引量：3
3
作者 刘爽 魏巍 +1 位作者 高宁 胡宝成 《中国老年学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2007年第11期1017-1019,共3页
目的研究MEPE/OF45蛋白(Matrix Extracellular PhosphoglycoprotEin/Osteoblast/Osteocyte Factor 45,MEPE/OF45)的功能,制备MEPE/OF45蛋白抗体并检测其定位。方法通过分子克隆方法体外表达MEPE/OF45蛋白片段,获得大量纯蛋白后免疫小鼠... 目的研究MEPE/OF45蛋白(Matrix Extracellular PhosphoglycoprotEin/Osteoblast/Osteocyte Factor 45,MEPE/OF45)的功能,制备MEPE/OF45蛋白抗体并检测其定位。方法通过分子克隆方法体外表达MEPE/OF45蛋白片段,获得大量纯蛋白后免疫小鼠并得到抗体,利用抗体进行免疫荧光染色方法检测MEPE/OF45蛋白在细胞内定位情况。结果得到特异性较高的抗体,并观察到MEPE/OF45蛋白在辐射敏感细胞与抗辐射细胞内定位不同。结论MEPE/OF45蛋白不同辐射敏感型的细胞中定位不同,说明MEPE/OF45蛋白参与细胞辐射后DNA损伤修复过程。 展开更多
关键词 mepe/OF45蛋白 抗体制备
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人MEPE/OF45基因的克隆及序列分析 被引量：1
4
作者 张鸿声 高宁 +4 位作者 绳纪坡 于芳 张宏达 张勇 胡宝成 《生物技术通讯》 CAS 2008年第6期787-790,共4页
目的:克隆人MEPE/OF45全长基因,为进一步研究MEPE/OF45在DNA损伤应答中的作用及特异的信号通路奠定基础。方法:选取人宫颈癌细胞HeLa为靶细胞,从中提取总RNA,设计扩增人MEPE/OF45基因片段的特异引物,进行RT-PCR分析;用蛋白质合成抑制剂... 目的:克隆人MEPE/OF45全长基因,为进一步研究MEPE/OF45在DNA损伤应答中的作用及特异的信号通路奠定基础。方法:选取人宫颈癌细胞HeLa为靶细胞,从中提取总RNA,设计扩增人MEPE/OF45基因片段的特异引物,进行RT-PCR分析;用蛋白质合成抑制剂亚胺环己酮(CHX)对细胞进行处理,观察处理前后MEPE/OF45基因的表达情况。结果:在经CHX处理的HeLa细胞中扩增到了MEPE/OF45基因片段,随后利用重叠PCR方法获得了人MEPE/OF45全长基因,并经序列分析确证。结论:获得了人MEPE/OF45基因片段及全长基因,为阐明MEPE/OF45在细胞中复杂的功能提供了线索。 展开更多
关键词 mepe/OF45基因 克隆 序列分析 亚胺环己酮 HELA细胞
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