MDCC-MSB1细胞酵母双杂交cDNA表达文库的构建与鉴定 被引量：5

1

作者 崔鹏鹏 高宏雷 +4 位作者 李凯 高立 高玉龙 祁小乐 王笑梅 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2013年第5期22-25,共4页

提取生长状态良好的MDCC-MSB1细胞的mRNA,以5′端标记有生物素的Oligo dT primer为引物反转录,合成双链后连接Adapter。分级纯化后,通过BP重组反应构建入门文库,滴度为1×105 CFU/mL,文库总容量为1.1×106 CFU,平均插入片段长度... 提取生长状态良好的MDCC-MSB1细胞的mRNA,以5′端标记有生物素的Oligo dT primer为引物反转录,合成双链后连接Adapter。分级纯化后,通过BP重组反应构建入门文库,滴度为1×105 CFU/mL,文库总容量为1.1×106 CFU,平均插入片段长度为1190bp,阳性重组率为100%。入门文库扩增后提取质粒,通过LR重组反应转化为表达文库,平均滴度为1×105 CFU/mL,文库总容量为1.2×106 CFU,平均插入片段长度为1087bp,重组率为100%。构建的表达文库具有较高的质量,为研究鸡传染性贫血病毒的受体及其细胞嗜性奠定了基础。 展开更多

关键词 mdcc-msb1细胞 CDNA文库 鸡传染性贫血 酵母双杂交

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鸡TGFβ1对MDCC-MSB1细胞增殖、凋亡、迁移与侵袭的影响 被引量：3

2

作者 余祖华 丁轲 +13 位作者 贾艳艳 郁川 何雷 廖成水 李静 张春杰 李银聚 吴庭才 程相朝 门凯凯 张瑾 余祖玲 周子誉 罗俊 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2020年第10期2567-2575,共9页

旨在探讨鸡TGFβ1对MDCC-MSB1细胞增殖、凋亡、迁移与侵袭的影响。作者将构建的鸡TGFβ1过表达载体、干扰表达载体以及相应阴性对照转染MDCC-MSB1细胞,然后检测转染后各组细胞鸡TGFβ1的表达水平、细胞增殖能力、细胞周期与凋亡,细胞的... 旨在探讨鸡TGFβ1对MDCC-MSB1细胞增殖、凋亡、迁移与侵袭的影响。作者将构建的鸡TGFβ1过表达载体、干扰表达载体以及相应阴性对照转染MDCC-MSB1细胞,然后检测转染后各组细胞鸡TGFβ1的表达水平、细胞增殖能力、细胞周期与凋亡,细胞的迁移与侵袭能力。结果显示,与相应阴性对照相比,转染TGFβ1过表达质粒可显著上调MDCC-MSB1细胞的TGFβ1表达水平,显著抑制MDCC-MSB1细胞的增殖,且使G1期细胞增加、S和G2期细胞减少,同时增加细胞凋亡率,降低细胞的迁移与侵袭能力;转染TGFβ1干扰表达质粒可显著下调MDCC-MSB1细胞的TGFβ1表达水平,显著促进MDCC-MSB1细胞的增殖,G1期细胞减少、S和G2期细胞增加,同时降低细胞凋亡率,增加细胞的迁移与侵袭能力。结果表明,鸡TGFβ1可抑制MDCC-MSB1细胞增殖、迁移与侵袭,促进其凋亡。 展开更多

关键词 TGFΒ1 mdcc-msb1细胞 细胞增殖 细胞凋亡 迁移 侵袭

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gga-miR-155对MDCC-MSB1细胞生物学行为的影响 被引量：3

3

作者 余祖华 丁轲 +11 位作者 郁川 贾艳艳 何雷 廖成水 李静 张春杰 李银聚 吴庭才 程相朝 张梦珂 邱静静 罗俊 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2018年第11期2496-2504,共9页

为了解gga-miR-155对MDCC-MSB1细胞生物学行为的影响,将人工合成的gga-miR-155模拟物、gga-miR-155抑制物以及阴性对照瞬时转染MDCC-MSB1细胞。然后采用实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测MDCC-MSB1细胞中gga-miR-155的表达水平,CCK-8法检测... 为了解gga-miR-155对MDCC-MSB1细胞生物学行为的影响,将人工合成的gga-miR-155模拟物、gga-miR-155抑制物以及阴性对照瞬时转染MDCC-MSB1细胞。然后采用实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测MDCC-MSB1细胞中gga-miR-155的表达水平,CCK-8法检测转染后细胞增殖能力的变化,流式细胞术检测MDCC-MSB1细胞的细胞周期与凋亡的变化,Transwell检测MDCC-MSB1细胞的迁移、侵袭能力的变化。结果显示,gga-miR-155模拟物可显著上调MDCC-MSB1细胞gga-miR-155表达水平,促进MDCC-MSB1细胞增殖,细胞G1期细胞减少,S和G2期细胞增加,同时凋亡减少,迁移、侵袭能力增加;gga-miR-155抑制物可显著下调MDCCMSB1细胞gga-miR-155表达水平,抑制MDCC-MSB1细胞增殖,细胞G1期细胞增加、S和G2期细胞减少,同时凋亡增加,迁移、侵袭能力下降。结果表明,gga-miR-155可促进MDCC-MSB1细胞增殖、迁移和侵袭,抑制其凋亡。 展开更多

关键词 gga-miR-155 mdcc-msb1细胞 细胞增殖 细胞凋亡 迁移 侵袭

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三氧化二砷诱导鸡MD肿瘤细胞凋亡及对细胞内钙离子浓度的影响 被引量：3

4

作者 张久丽 王金涛 +1 位作者 肖银霞 徐世文 《中国家禽》 北大核心 2008年第10期21-24,共4页

为探讨As2O3诱导MD肿瘤细胞株凋亡的机制,采用MTT法检测As2O3对MDCC-MSB1的抑制作用,采用荧光显微镜观察细胞形态学变化,DNA Ladder法检测细胞凋亡,Fura-2/AM负载双波长荧光分光光度计检测细胞内游离钙离子浓度([Ca2+]i)变化,观察As2O3... 为探讨As2O3诱导MD肿瘤细胞株凋亡的机制,采用MTT法检测As2O3对MDCC-MSB1的抑制作用,采用荧光显微镜观察细胞形态学变化,DNA Ladder法检测细胞凋亡,Fura-2/AM负载双波长荧光分光光度计检测细胞内游离钙离子浓度([Ca2+]i)变化,观察As2O3对鸡MD肿瘤细胞株MDCC-MSB1的影响。结果显示:As2O3能抑制鸡MD肿瘤细胞株MDCC-MSB1的生长,呈剂量依赖关系(P<0.05或P<0.01);在荧光显微镜下可见As2O3作用后MDCC-MSB1细胞呈现典型的凋亡特征,并出现典型的DNA Ladder,双波长荧光分光光度计检测结果显示:As2O3作用后的MDCC-MSB1细胞内[Ca2+]i升高(P<0.05或P<0.01),呈剂量依赖关系。As2O3能明显抑制鸡MD肿瘤细胞株MDCC-MSB1细胞的生长,并诱导其发生凋亡,细胞内[Ca2+]i升高可能是其诱导细胞凋亡的机制之一。 展开更多

关键词 三氧化二砷 mdcc—msb1细胞 凋亡 钙离子浓度

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硝酸镧对MDCC-MSB1细胞形态及细胞周期的影响 被引量：1

5

作者 林洪金 丁岚峰 +1 位作者 李金龙 徐世文 《中国兽医科学》 CAS CSCD 北大核心 2009年第1期70-74,共5页

以体外培养的MDCC-MSB1细胞为研究对象,分别经终浓度为0、8、32、64μg/mL的硝酸镧作用24、48、72 h后,采用台盼蓝染色测定细胞活性,荧光显微镜观察细胞的形态学变化,流式细胞术测定细胞周期。研究了硝酸镧对鸡MD肿瘤细胞株MDCC-MSB1细... 以体外培养的MDCC-MSB1细胞为研究对象,分别经终浓度为0、8、32、64μg/mL的硝酸镧作用24、48、72 h后,采用台盼蓝染色测定细胞活性,荧光显微镜观察细胞的形态学变化,流式细胞术测定细胞周期。研究了硝酸镧对鸡MD肿瘤细胞株MDCC-MSB1细胞形态及细胞周期的影响,进而探讨硝酸镧对MDCC-MSB1细胞的影响机制。结果表明,硝酸镧能够降低MDCC-MSB1的细胞活性,能够引起典型的凋亡形态学变化及细胞周期的改变,并呈现细胞凋亡的细胞型,变化均呈现时间-剂量效应。证实,一定浓度的硝酸镧具有诱导体外培养MDCC-MSB1细胞凋亡的作用。 展开更多

关键词 硝酸镧 mdcc—msb1细胞 细胞周期 细胞凋亡

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gga-miR-155对MDCC-MSB1细胞转录组的影响

6

作者 余祖华 贾艳艳 +7 位作者 何雷 廖成水 李静 魏颖 陈建 陈松彪 尚珂 丁轲 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2023年第2期663-672,共10页

旨在探讨gga-miR-155对马立克病病毒转化的肿瘤细胞系MDCC-MSB1细胞转录组水平变化的影响。本研究以MDCC-MSB1细胞为研究对象,首先将gga-miR-155模拟物及其阴性对照转染MDCC-MSB1细胞,在转染后48 h提取总RNA,用安捷伦2100核酸检测仪分... 旨在探讨gga-miR-155对马立克病病毒转化的肿瘤细胞系MDCC-MSB1细胞转录组水平变化的影响。本研究以MDCC-MSB1细胞为研究对象,首先将gga-miR-155模拟物及其阴性对照转染MDCC-MSB1细胞,在转染后48 h提取总RNA,用安捷伦2100核酸检测仪分析各组细胞总RNA的完整性,采用RT-qPCR分析gga-miR-155在MDCC-MSB1细胞中的过表达情况;然后利用高通量测序技术,分析gga-miR-155过表达后MDCC-MSB1细胞转录水平的变化,筛选差异表达基因,结合生物信息学分析预测差异表达基因中gga-miR-155靶mRNA。结果显示:制备了gga-miR-155在MDCC-MSB1细胞过表达样本并构建了高通量测序文库;与对照组相比,gga-miR-155过表达组的差异表达基因有87个,其中,上调表达的基因有47个,下调表达的基因有40个;GO与KEGG分析显示,这些差异表达基因显著富集于代谢和蛋白结合过程/信号通路;通过Targetscan和miRada软件预测下调表达基因中鸡BACH1为gga-miR-155的靶mRNA(P<0.05)。综上,过表达gga-miR-155可调控MDCC-MSB1细胞的转录组水平,差异表达基因中BACH1基因可能在gga-miR-155的作用下参与了MDCC-MSB1细胞的代谢过程。 展开更多

关键词 gga-miR-155 马立克病 mdcc-msb1细胞 转录组

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gga-miRNA-155对MDCC-MSB1细胞增殖的影响

7

作者 余祖华 丁轲 +8 位作者 郁川 贾艳艳 何雷 廖成水 李静 张梦珂 邱静静 张春杰 程相朝 《西北农林科技大学学报（自然科学版）》 CSCD 北大核心 2019年第2期1-6,共6页

【目的】构建gga-miRNA-155前体基因(pre-gga-miRNA-155)真核表达载体,验证gga-miRNA-155在MDCC-MSB1细胞中的表达效果,探究其对MDCC-MSB1细胞增殖的影响。【方法】采用PCR方法从鸡肝脏基因组DNA中扩增gga-miRNA-155前体基因片段pre-gga... 【目的】构建gga-miRNA-155前体基因(pre-gga-miRNA-155)真核表达载体,验证gga-miRNA-155在MDCC-MSB1细胞中的表达效果,探究其对MDCC-MSB1细胞增殖的影响。【方法】采用PCR方法从鸡肝脏基因组DNA中扩增gga-miRNA-155前体基因片段pre-gga-miRNA-155,并将其克隆入pMD-18T载体,构建克隆载体pMD-18T-pre-gga-miRNA-155。用EcoRⅠ和XhoⅠ双酶切pcDNA6.2-GW/EmGFP-miRNA真核表达载体和pMD-18T-pre-gga-miRNA-155,将pre-gga-miRNA-155酶切回收片段与pcDNA6.2-GW/EmGFP-miRNA的酶切回收片段进行连接,构建重组真核表达载体pcDNA6.2-pre-gga-miRNA-155,对其进行PCR、EcoRⅠ和XhoⅠ双酶切及DNA测序鉴定。将重组载体转染到MDCC-MSB1细胞中,应用实时荧光定量PCR (Real-time PCR)检测gga-mi-RNA-155的表达水平,利用MTT法检测细胞增殖能力的变化。【结果】PCR扩增获得了长度约154bp的鸡pre-gga-mi-RNA-155基因。成功构建了pre-gga-miRNA-155的真核表达载体pcDNA6.2-pre-gga-miRNA-155,瞬时转染MD-CC-MSB1细胞后gga-miRNA-155表达水平显著增加,且MDCC-MSB1细胞的体外增殖能力增强。【结论】成功构建了pre-gga-miRNA-155的真核表达载体,其可在MDCC-MSB1细胞中过表达gga-miRNA-155,且可促进MDCC-MSB1细胞的体外增殖。 展开更多

关键词 gga-miRNA-155 表达载体 mdcc-msb1细胞 细胞增殖

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鸡传染性贫血病病毒在MDCC-MSB1细胞的传代致弱研究

8

作者 李鸿鑫 吴波良 +4 位作者 张新珩 杨瑞杰 蔺文成 陈伟国 谢青梅 《中国家禽》 北大核心 2017年第15期26-29,共4页

为研究鸡传染性贫血病(Chicken infectious anemia,CIA)减毒活疫苗,试验将鸡传染性贫血病病毒(CIAV)在鸡淋巴细胞MDCC-MSB1上进行37℃和40℃传代致弱。结果显示:40℃条件下传至60代和37℃下传至90代,病毒的VP1氨基酸分别有2个和3个突变... 为研究鸡传染性贫血病(Chicken infectious anemia,CIA)减毒活疫苗,试验将鸡传染性贫血病病毒(CIAV)在鸡淋巴细胞MDCC-MSB1上进行37℃和40℃传代致弱。结果显示:40℃条件下传至60代和37℃下传至90代,病毒的VP1氨基酸分别有2个和3个突变,两种条件下有2个突变是在同一位置;VP2和VP3很稳定,在试验中未发生氨基酸突变;致病性试验发现,突变毒株仍具有致病性,但有降低的趋势。试验表明,鸡淋巴细胞传代CIAV可以引发包含中和抗原表位的VP1突变,且提高温度能促进变异速度,为进一步研究CIAV的变异特征、弱毒疫苗研发提供了参考依据。 展开更多

关键词 鸡传染性贫血病病毒 mdcc-msb1细胞 传代致弱 疫苗

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牛磺酸对MDCC-MSB1细胞端粒酶表达水平及其活性的影响 被引量：1

9

作者 于洋洋 陈涛 +3 位作者 邱淑敏 林淑梅 胡建民 汉丽梅 《饲料工业》 北大核心 2014年第5期17-19,共3页

为探讨牛磺酸对鸡MDCC-MSB1肿瘤细胞系增殖的影响及其可能的作用机理,研究在牛磺酸应用适宜浓度范围内,使用添加0%、0.5%、1.0%、2.0%牛磺酸的RPMI1640培养基,培养MDCCMSB1细胞系,探讨牛磺酸对鸡MD肿瘤细胞chTERT的表达及其端粒酶活性... 为探讨牛磺酸对鸡MDCC-MSB1肿瘤细胞系增殖的影响及其可能的作用机理,研究在牛磺酸应用适宜浓度范围内,使用添加0%、0.5%、1.0%、2.0%牛磺酸的RPMI1640培养基,培养MDCCMSB1细胞系,探讨牛磺酸对鸡MD肿瘤细胞chTERT的表达及其端粒酶活性的影响。结果显示,与对照组相比,各牛磺酸组MD肿瘤细胞chTERT转录水平和端粒酶活性均降低,其中1%、2%牛磺酸浓度组的chTERT转录水平和端粒酶活性显著低于对照组(P<0.05)。牛磺酸对chTERT转录水平及端粒酶活性的下调,可能抑制肿瘤细胞的增殖。 展开更多

关键词 牛磺酸 端粒酶 mdcc—msb1细胞系

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MDCC-MSB-1细胞增殖抑制机制研究进展

10

作者 张佩琪 李真诚 +3 位作者 王宜平 岑美珍 刘进辉 纪春晓 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2018年第7期1445-1450,共6页

MDCC-MSB-1细胞是鸡马立克氏病毒（MDV）诱导产生的T淋巴细胞增生性肿瘤细胞系之一，已被作为模型广泛应用于抗肿瘤药物的研究中。本文旨在探讨与MDCC—MSB-1细胞周期被阻滞在G1期的调控因子作用机制，以及诱导MDCC-MSB-1细胞凋亡的信... MDCC-MSB-1细胞是鸡马立克氏病毒（MDV）诱导产生的T淋巴细胞增生性肿瘤细胞系之一，已被作为模型广泛应用于抗肿瘤药物的研究中。本文旨在探讨与MDCC—MSB-1细胞周期被阻滞在G1期的调控因子作用机制，以及诱导MDCC-MSB-1细胞凋亡的信号传导通路。MDV所致瘤细胞增殖抑制机制的深入研究，为人类肿瘤病的治疗研究提供良好的动物模型展望，也为新型药物的开发开辟出新的思路。 展开更多

关键词 mdcc-msb-1细胞 细胞周期 凋亡通路

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二烯丙基二硫化物对MDCC-MSB-1细胞凋亡的影响

11

作者 张佩琪 周鹏飞 +3 位作者 叶正钦 刘进辉 王宜平 纪春晓 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2021年第7期1354-1358,1406,共6页

以50,100,150μmol/L二烯丙基二硫化物(diallyl disulfide, DADS)处理MDCC-MSB-1细胞24 h后,利用吖啶橙(acridine orange, AO)染色法对细胞凋亡的形态进行初步观察;Annexin V-FITC/PI双染法检测细胞凋亡率;JC-1染色法检测线粒体膜电位... 以50,100,150μmol/L二烯丙基二硫化物(diallyl disulfide, DADS)处理MDCC-MSB-1细胞24 h后,利用吖啶橙(acridine orange, AO)染色法对细胞凋亡的形态进行初步观察;Annexin V-FITC/PI双染法检测细胞凋亡率;JC-1染色法检测线粒体膜电位的变化;Western blot检测P53的蛋白表达;蛋白活性检测试剂盒检测Caspase-3和Caspase-9的活性变化;Q-PCR检测Caspase-3和Caspase-9 mRNA的表达情况。结果显示,与空白组相比,DADS诱导MDCC-MSB-1细胞发生凋亡形态变化,增加细胞凋亡率,同时诱导p53蛋白表达量和线粒体膜电位下降,上调Caspase-3和Caspase-9基因表达水平和蛋白活性。 展开更多

关键词 二烯丙基二硫化物 鸡马立克病 mdcc-msb-1细胞 线粒体凋亡途径

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