PI3k/Akt通路在大戟大枣汤抗不同分子表型乳腺癌中的调控作用

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作者 马立威 姚宏玉 +4 位作者 陈哲 倪世宇 陈颂 李京 刘吉成 《中国比较医学杂志》 CAS 北大核心 2024年第3期27-35,共9页

目的探讨PI3k/Akt通路在大戟大枣汤(decoction of Euphorbia fischeriana Steud.and jujuba,DEFSJ)抗雌激素受体(ER)阴性(-)和ER阳性(+)乳腺癌中的调控作用,为乳腺癌的针对性治疗提供参考。方法制备DEFSJ提取液,采用UHPLC-Triple Quad... 目的探讨PI3k/Akt通路在大戟大枣汤(decoction of Euphorbia fischeriana Steud.and jujuba,DEFSJ)抗雌激素受体(ER)阴性(-)和ER阳性(+)乳腺癌中的调控作用,为乳腺癌的针对性治疗提供参考。方法制备DEFSJ提取液,采用UHPLC-Triple Quad仪进行质控分析。DEFSJ含药血清(containing serum,CS)依照体外血清药理学方法进行获取,乳腺癌(ER-)MDA-MB-453和(ER+)MCF-7细胞分别用不同浓度DEFSJ-CS干预48 h。流式细胞术检测细胞周期分布,DNA ladder实验评估细胞凋亡程度,Western blot法检测PI3k/Akt通路相关蛋白表达,实时定量聚合酶链反应(qRT-PCR)法检测FoxO3a、FoxO1a及Bim mRNA表达;激光共聚焦显微镜观察FoxO3a蛋白核转位。结果UPLC对5批DEFSJ提取物进行了分析,结果表明制备工艺可行,质量可控,保证了药理学实验结果的准确性。体外实验中发现,DEFSJ-CS能阻断细胞在G2/M期(P<0.05,P<0.01);DNA ladder实验中呈现典型的细胞凋亡梯带;与阴性对照组比较,DEFSJ-CS能使p-PI3k、p-Akt、p-FoxO3a及p-FoxO1a蛋白表达降低(P<0.05,P<0.01),Bim蛋白表达升高(P<0.05);使FoxO3a、FoxO1a mRNA表达降低(P<0.05,P<0.01),Bim mRNA表达升高(P<0.05,P<0.01);并能使细胞中FoxO3a蛋白呈现显著的核转位变化;且各数据结果均显示DEFSJ-CS对(ER-)MDA-MB-453细胞比对(ER+)MCF-7细胞作用效果更好。结论PI3k/Akt通路参与了大戟大枣汤抗乳腺癌作用的调控,作用效果因乳腺癌表型差异而不同。 展开更多

关键词 狼毒大戟 mda-mb-453细胞 MCF-7细胞 PI3K/AKT通路

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赫赛汀及9-顺式视黄酸对乳腺癌联合抑制作用 被引量：2

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作者 郎海滨 糜漫天 朱俊东 《中国公共卫生》 CAS CSCD 北大核心 2008年第3期311-312,共2页

目的探讨赫赛汀联合9-顺式视黄酸对ErbB2阳性乳腺癌细胞周期进程及分布的影响及其相应的分子机制。方法利用流式细胞仪检测经赫赛汀、9-顺式视黄酸单独和联合作用后,癌基因(ErbB2/neu)阳性的MDA-MB-453乳腺癌细胞周期进程和分布的变化... 目的探讨赫赛汀联合9-顺式视黄酸对ErbB2阳性乳腺癌细胞周期进程及分布的影响及其相应的分子机制。方法利用流式细胞仪检测经赫赛汀、9-顺式视黄酸单独和联合作用后,癌基因(ErbB2/neu)阳性的MDA-MB-453乳腺癌细胞周期进程和分布的变化。在此基础上,利用免疫印记和半定量PCR法对CDK2、CyclinE、P27的表达进行检测,同时利用免疫沉淀法检测CyclinE/CDK2结合力的变化。结果与对照组比较,一定剂量的赫赛汀和9-顺式视黄酸可将MDA-MB-453细胞的周期进程阻遏于G0/G1期从而抑制其增殖活性。经2者联合作用后,CyclinE、CDK2的表达较对照组均有所下降,其中以CDK2的变化最为明显,而P27蛋白表达则明显升高。同时,2者联合作用还能有效降低CyclinE/CDK2的结合能力。结论赫赛汀和9-顺式视黄酸可在体外分别通过改变CyclinE、CDK2和P27的表达和活性起到协同抑制HrbB2/neu阳性乳腺癌的目的。 展开更多

关键词 赫赛汀 9-顺式视黄酸 ERBB2 细胞周期 mda-mb-453细胞 乳腺癌

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Herceptin联合9-顺式视黄酸对ErbB2阳性乳腺癌细胞的抑制作用及其相关分子机制的研究

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作者 郎海滨 糜漫天 朱俊东 《免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2007年第6期627-630,635,共5页

目的探讨Herceptin联合9-顺式视黄酸对ErbB2阳性乳腺癌细胞的协同增殖抑制效应及其分子机制。方法利用MTT法检测经Herceptin、9-顺式视黄酸单独和联合作用后HER2/neu阳性的MDA-MB-453乳腺癌细胞的增殖活性的变化,在此基础上,利用免疫印... 目的探讨Herceptin联合9-顺式视黄酸对ErbB2阳性乳腺癌细胞的协同增殖抑制效应及其分子机制。方法利用MTT法检测经Herceptin、9-顺式视黄酸单独和联合作用后HER2/neu阳性的MDA-MB-453乳腺癌细胞的增殖活性的变化,在此基础上,利用免疫印记和半定量PCR法对HER2/neu、RXR以及COX-2的表达进行检测,同时利用ELISA法检测细胞培养上清内PGE-2的水平变化。结果一定剂量的Herceptin和9-顺式视黄酸能够有效协同抑制MDA-MB-453细胞的增殖活性。经二者联合作用后,磷酸化、非磷酸化的ErbB2以及COX-2的表达较对照组均显著下降,而RXRα的表达则无明显变化。同时,二者联合作用还能有效降低细胞PGE-2的分泌水平。结论Herceptin和9-顺式视黄酸可在体外分别通过抑制HER2/neu和COX-2的表达和活性来达到协同抑制HER2/neu阳性乳腺癌的作用。 展开更多

关键词 HERCEPTIN 9-顺式视黄酸 ERBB2 环氧化酶-2 前列腺素E-2 mda—mb-453细胞 乳腺癌

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Herceptin和9-顺式视黄酸对MDA-MB-453乳腺癌细胞协同抑制作用的研究

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作者 柴雅明 糜漫天 郎海滨 《第三军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2006年第22期2234-2236,共3页

目的 探讨Herceptin和9-顺式视黄酸联合用药对MDA—MB-453乳腺癌细胞的协同抑制效应。方法用Herceptin、9-顺式视黄酸单独和联合处理MDA—MB-453细胞24～72h，用MTT法观察其对乳腺癌细胞的增殖抑制效应，通过流式细胞仪法检测乳腺癌细... 目的 探讨Herceptin和9-顺式视黄酸联合用药对MDA—MB-453乳腺癌细胞的协同抑制效应。方法用Herceptin、9-顺式视黄酸单独和联合处理MDA—MB-453细胞24～72h，用MTT法观察其对乳腺癌细胞的增殖抑制效应，通过流式细胞仪法检测乳腺癌细胞周期相的分布，用TUNEL法检测细胞凋亡的情况。结果 Herceptin和9-顺式视黄酸联合作用组较对照和单独作用组能够显著抑制HER2／neu阳性乳腺癌细胞的增殖活性，并将其细胞周期进程阻遏于G0／G1期，同时还能有效诱导其发生凋亡。结论 Herceptin和9-顺式视黄酸联合用药可有效协同抑制HER2／neu阳性乳腺癌细胞的增殖活性。 展开更多

关键词 HERCEPTIN 9-顺式视黄酸 HER2 细胞周期 细胞凋亡 mda—mb-453细胞

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从表型差异探讨大戟大枣汤含药血清抗乳腺癌的作用

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作者 马立威 陈哲 +4 位作者 王文豹 张金玲 张洪涛 葛鹏玲 刘吉成 《中成药》 CAS CSCD 北大核心 2023年第7期2373-2378,共6页

目的探讨大戟大枣汤含药血清抗雌激素受体(ER)阴性(-)和ER阳性(+)乳腺癌作用的差异性。方法制备大戟大枣汤含药血清,作用于体外培养乳腺癌(ER-)MDA-MB-453和(ER+)MCF-7细胞48 h。乳酸脱氢酶(LDH)试剂盒检测细胞毒性,流式细胞仪检测细胞... 目的探讨大戟大枣汤含药血清抗雌激素受体(ER)阴性(-)和ER阳性(+)乳腺癌作用的差异性。方法制备大戟大枣汤含药血清,作用于体外培养乳腺癌(ER-)MDA-MB-453和(ER+)MCF-7细胞48 h。乳酸脱氢酶(LDH)试剂盒检测细胞毒性,流式细胞仪检测细胞线粒体膜电位及细胞凋亡率变化,ELISA法检测caspase3、caspase9酶活性,RT-qPCR法检测caspase3、caspase9、Bax、Bcl-2 mRNA表达,Western blot法检测c-caspase-3、c-caspase-9、Bax、Bcl-2蛋白表达。结果与阴性对照组比较,大戟大枣汤含药血清均能使2种不同表型的乳腺癌细胞中LDH释放量增加(P<0.05,P<0.01),细胞线粒体膜电位降低(P<0.05,P<0.01),细胞凋亡率升高(P<0.05,P<0.01),caspase3和caspase9的酶活性、mRNA及蛋白表达升高(P<0.05,P<0.01),Bax mRNA及蛋白表达升高(P<0.05,P<0.01),Bcl-2 mRNA及蛋白表达降低(P<0.05,P<0.01)。大戟大枣汤含药血清对乳腺癌(ER-)MDA-MB-453细胞的作用效果优于乳腺癌(ER+)MCF-7细胞。结论大戟大枣汤含药血清体外有抗乳腺癌的作用,且作用效果因乳腺癌表型差异而不同,细胞内线粒体通路可能参与调控。 展开更多

关键词 大戟大枣汤 含药血清 (ER-)mda-mb-453细胞 (ER+)MCF-7细胞 线粒体通路

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TIMP-3基因真核表达载体的构建及其对乳腺癌MDA-MB-453细胞生长及侵袭的抑制作用 被引量：1

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作者 王丹 王振宇 +1 位作者 石光 尹光浩 《吉林大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2016年第1期89-93,共5页

目的:构建组织基质金属蛋白酶抑制剂3(TIMP-3)真核表达载体并转染乳腺癌MDA-MB-453细胞,探讨TIMP-3对MDA-MB-453细胞生长及侵袭的抑制作用。方法:采用RT-PCR法从人新鲜胎盘组织中获得TIMP-3cDNA,连接至pMD18-T载体,EcoRⅠ、XbaⅠ双酶切p... 目的:构建组织基质金属蛋白酶抑制剂3(TIMP-3)真核表达载体并转染乳腺癌MDA-MB-453细胞,探讨TIMP-3对MDA-MB-453细胞生长及侵袭的抑制作用。方法:采用RT-PCR法从人新鲜胎盘组织中获得TIMP-3cDNA,连接至pMD18-T载体,EcoRⅠ、XbaⅠ双酶切pMD18-T-TIMP3重组质粒及pcDNA3.1载体并连接,构建pcDNA-TIMP-3真核载体,酶切鉴定、测序。将乳腺癌MDA-MB-453细胞分为正常对照组、pcDNA空载体组(只转染pcDNA空载体)和pcDNA-TIMP-3组(转染pcDNA-TIMP-3)。Western blotting法测定蛋白表达,采用MTT法和Boyden小室侵袭实验测定各组细胞的增殖活性及侵袭能力。结果:重组载体经过EcoRⅠ和XbaⅠ酶切后,产生633bp的TIMP-3目的片段和pcDNA 3.1线性化载体,经自动测序仪测定TIMP-3序列完全正确。转染重组载体后MDA-MB-453细胞稳定表达了TIMP-3,与正常对照组和pcDNA空载体组比较,pcDNA-TIMP-3组细胞增殖活性明显降低(P<0.05),穿透以Ⅰ型胶原(ColⅠ)、层黏连蛋白(LN)、纤维连接蛋白(FN)和玻璃连接蛋白(VN)包被的Matrigel膜的侵袭细胞数明显减少(P<0.05)。结论:成功构建pcDNA3.1-TIMP-3真核表达载体,可在MDA-MB-453细胞中高表达TIMP-3蛋白,并对MDAMB-453细胞生长及侵袭性有抑制作用。 展开更多

关键词 组织基质金属蛋白酶抑制剂3 真核表达载体 mda-mb-453细胞系

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AR/let-7信号通路抑制三阴性乳腺癌增殖的实验研究和临床意义 被引量：5

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作者 陆翔 陈彩萍 《中华内分泌外科杂志》 CAS 2019年第5期378-382,共5页

目的探讨AR/let-7信号通路抑制三阴性乳腺癌(triple-negative breast cancer,TNBC)增殖的机制及其对患者生存的影响。方法体外培养MDA-MB-453细胞,分为实验组和对照组,实验组加入二氢睾酮(dihydrotestosterone,DHT),对照组不加药。CCK-... 目的探讨AR/let-7信号通路抑制三阴性乳腺癌(triple-negative breast cancer,TNBC)增殖的机制及其对患者生存的影响。方法体外培养MDA-MB-453细胞,分为实验组和对照组,实验组加入二氢睾酮(dihydrotestosterone,DHT),对照组不加药。CCK-8检测细胞增殖率、流式细胞仪检测细胞周期、蛋白质印迹检测AR表达、实时荧光定量PCR检测let-7表达。从美国癌症基因组图谱(The Cancer Genomes Atlas,TCGA)数据库下载TNBC患者数据,分析AR、let-7在癌组织、正常乳腺组织间的表达差异及与患者生存间的关系。结果加入DHT后实验组癌细胞增殖率显著低于对照组,差异有统计学意义(1.22±0.11 vs 2.26±0.23,t=7.065,P<0.05),实验组G1/S比值大于对照组(1.08±0.03 vs 0.68±0.03,t=17.321,P=0.000),实验组AR和let-7a、b、c、d过表达。TCGA数据分析发现乳腺癌组织中AR、let-7a-1、let-7a-2、let-7a-3、let-7c分别低于正常乳腺组织(P<0.05),而let-7d高于正常乳腺组织(P=0.033)。以AR、let-7a-1、let-7a-2、let-7a-3、let-7c为变量进行聚类分析,将患者分为高表达组和低表达组,发现高表达组的总生存率较高,但差异无统计学意义(P=0.163)。结论AR/let-7信号通路经DHT激活后表达上调,使细胞受阻于G1期,抑制细胞增殖。AR、let-7a-1、let-7a-2、let-7a-3、let-7c高表达患者可能存在更好的总生存,提示AR/let-7信号通路可能成为TNBC新的治疗靶点。 展开更多

关键词 三阴性乳腺癌 雄激素受体 微小RNA LET-7 mda-mb-453癌细胞 TCGA数据库

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赫赛汀与阿霉素序贯联合应用对乳腺癌细胞抑制作用的研究 被引量：3

8

作者 吴志勇 孙胜杰 焦顺昌 《军医进修学院学报》 CAS 2012年第4期391-392,395,共3页

目的探讨体外实验中赫赛汀(HER)与阿霉素(ADM)联合的最佳序贯方式;赫赛汀对于阿霉素作用的影响及机制。方法利用MTT法及流式细胞技术测定HER、ADM不同序贯联合应用对人乳腺癌细胞(MDA-MB453)的抑制率及细胞周期的影响。结果不同序贯方... 目的探讨体外实验中赫赛汀(HER)与阿霉素(ADM)联合的最佳序贯方式;赫赛汀对于阿霉素作用的影响及机制。方法利用MTT法及流式细胞技术测定HER、ADM不同序贯联合应用对人乳腺癌细胞(MDA-MB453)的抑制率及细胞周期的影响。结果不同序贯方式联合应用组抑制率明显高于单药化疗组(P<0.01),在化疗后12h或更长时间使用赫赛汀可取得协同作用。随着HER与ADM序贯方式的改变,G0/G1、S期比例逐渐下降,G2/M期比例逐渐升高。结论应用阿霉素12h后使用赫赛汀可取得协同作用;序贯应用的差异与细胞周期的变化有一定关系。 展开更多

关键词 赫赛汀 化疗 阿霉素 mda-mb453细胞株 细胞周期

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曲妥珠单抗与顺铂序贯联合应用对乳腺癌细胞抑制作用的研究 被引量：2

9

作者 吴志勇 孙胜杰 焦顺昌 《中国药物应用与监测》 CAS 2012年第1期26-28,共3页

目的:探讨曲妥珠单抗(HER)与顺铂(DDP)联合抑制作用最佳序贯方式以及HER对于DDP作用的影响及机制。方法:利用MTT法及流式细胞技术测定HER、DDP以及不同序贯联合应用对人乳腺癌细胞(MDA-MB453)的抑制率及细胞周期的影响。结果:两药联合... 目的:探讨曲妥珠单抗(HER)与顺铂(DDP)联合抑制作用最佳序贯方式以及HER对于DDP作用的影响及机制。方法:利用MTT法及流式细胞技术测定HER、DDP以及不同序贯联合应用对人乳腺癌细胞(MDA-MB453)的抑制率及细胞周期的影响。结果:两药联合应用对乳腺癌细胞的抑制效果均好于单药顺铂组(P<0.01);其中以同时使用时效果最好。使用DDP前应用HER组G0/G1、S期细胞所占比例减少,G2/M期细胞增多。结论 :曲妥珠单抗与顺铂同时应用时,可最大程度增强顺铂的抑制作用。序贯应用的差异与细胞周期的变化有关。 展开更多

关键词 曲妥珠单抗 化疗 顺铂 mda-mb453细胞珠 细胞周期

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曲妥珠单抗与依托泊苷序贯联合应用对乳腺癌细胞抑制作用的研究

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作者 吴志勇 孙胜杰 焦顺昌 《中国药物应用与监测》 CAS 2010年第2期85-87,共3页

目的:探讨体外试验中曲妥珠单抗(HER)与依托泊苷(VP16)联合的最佳序贯方式、HER对VP16作用的影响及机制。方法:利用MTT法及流式细胞技术分别测定HER、VP16及不同序贯方式联合应用对人乳腺癌细胞的抑制率及细胞周期的影响。结果:VP16化... 目的:探讨体外试验中曲妥珠单抗(HER)与依托泊苷(VP16)联合的最佳序贯方式、HER对VP16作用的影响及机制。方法:利用MTT法及流式细胞技术分别测定HER、VP16及不同序贯方式联合应用对人乳腺癌细胞的抑制率及细胞周期的影响。结果:VP16化疗前应用HER组及两药同时应用组对乳腺癌细胞抑制率均明显高于单药VP16组(P<0.01),为相加作用,其中以HER作用6h后应用VP16组效果最好。细胞周期检测提示:VP16化疗前应用HER组及两药同时应用组对细胞S期的阻滞增强。结论:VP16化疗前6h应用HER对乳腺癌细胞的抑制率最高,为最佳序贯联合方式,其内在机制可能与细胞周期的变化有关。 展开更多

关键词 曲妥珠单抗 化疗 依托泊苷 mda-mb453细胞株 细胞周期

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染料木黄酮对MDA-MB-453乳腺癌细胞VEGF表达的影响 被引量：9

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作者 余小平 糜漫天 朱俊东 《营养学报》 CAS CSCD 北大核心 2005年第4期322-325,共4页

目的:观察染料木黄酮(genistein,Gen)对MDA-MB-453乳腺癌细胞血管内皮生长因子(vascularendothelialgrowthfactor,VEGF)表达的影响,探讨Gen抗HER-2/neu高表达乳腺癌血管生成的分子机制。方法:5×10-5mol/LGen处理MDA-MB-453细胞24... 目的:观察染料木黄酮(genistein,Gen)对MDA-MB-453乳腺癌细胞血管内皮生长因子(vascularendothelialgrowthfactor,VEGF)表达的影响,探讨Gen抗HER-2/neu高表达乳腺癌血管生成的分子机制。方法:5×10-5mol/LGen处理MDA-MB-453细胞24、48、72h后,应用免疫组织化学、Westernblot及RT-PCR法检测MDA-MB-453乳腺癌细胞VEGF的表达变化。结果:Gen处理MDA-MB-453细胞24、48、72h后,VEGF的mRNA和蛋白表达量随着处理时间的延长逐渐下降。结论:Gen能在转录和翻译水平下调HER-2/neu高表达乳腺癌细胞VEGF的表达,这可能是Gen抑制HER-2/neu高表达乳腺癌血管生成的机制之一。 展开更多

关键词 染料木黄酮 血管内皮生长因子 mda-mb-453乳腺癌细胞

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染料木黄酮对MDA-MB-453乳腺癌细胞uPA表达及PTK活性的影响研究 被引量：5

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作者 余小平 糜漫天 朱俊东 《营养学报》 CAS CSCD 北大核心 2004年第3期211-215,共5页

目的: 观察染料木黄酮(亦称三羟异黄酮,genistein,Gen)对MDA-MB-453乳腺癌细胞尿激酶型纤维蛋白溶酶原激活剂(urokinase-type plasminogen activator,uPA)表达及蛋白酪氨酸激酶(protein tyrosine kinase,PTK)活性的影响,探讨Gen抗HER-2... 目的: 观察染料木黄酮(亦称三羟异黄酮,genistein,Gen)对MDA-MB-453乳腺癌细胞尿激酶型纤维蛋白溶酶原激活剂(urokinase-type plasminogen activator,uPA)表达及蛋白酪氨酸激酶(protein tyrosine kinase,PTK)活性的影响,探讨Gen抗HER-2/neu高表达乳腺癌血管生成的分子机制。方法: 5×10-5mol/L Gen处理MDA-MB-453细胞24、48、72 h后,应用Western blot、免疫沉淀、RT-PCR及激酶活性分析法检测Gen对MDA-MB-453乳腺癌细胞uPA表达、HER-2/neu受体蛋白磷酸化水平及PTK活性变化。结果: Gen处理MDA-MB-453细胞后,uPA的mRNA和蛋白表达量下调,HER-2/neu受体蛋白磷酸化水平降低,PTK活性下降,且这种作用具有时效性。结论: Gen能有效抑制乳腺癌细胞HER-2/neu受体的PTK活性和蛋白磷酸化水平,在转录和翻译水平下调uPA的表达,从而抑制HER-2/neu高表达乳腺癌血管生成。 展开更多

关键词 三羟异黄酮 尿激酶型纤维蛋白溶酶原激活剂 蛋白酪氨酸激酶 mda-mb-453乳腺癌细胞

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基于PI3K/Akt通路研究山莴苣苦素对三阴性乳腺癌细胞增殖和迁移的影响

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作者 叶银松 雷毅 +3 位作者 康金森 宁金鹰 马晓丽 杨建 《新疆医科大学学报》 CAS 2023年第2期234-237,共4页

目的研究山莴苣苦素对三阴性乳腺癌MDA-MB-453细胞增殖和迁移的影响。方法采用CellTiter-Glo发光法测定山莴苣苦素对三阴性乳腺癌MDA-MB-453细胞增殖的影响;通过Transwell细胞迁移实验观察山莴苣苦素对三阴性乳腺癌MDA-MB-453细胞迁移... 目的研究山莴苣苦素对三阴性乳腺癌MDA-MB-453细胞增殖和迁移的影响。方法采用CellTiter-Glo发光法测定山莴苣苦素对三阴性乳腺癌MDA-MB-453细胞增殖的影响;通过Transwell细胞迁移实验观察山莴苣苦素对三阴性乳腺癌MDA-MB-453细胞迁移的影响;以蛋白质印迹法测定乳腺癌细胞中PI3K/Akt信号通路相关蛋白表达水平。结果山莴苣苦素对三阴性乳腺癌MDA-MB-453细胞的IC_(50)为2.879μmol/L。与对照组比较,随着山莴苣苦素浓度的升高,其对三阴性乳腺癌细胞增殖和迁移能力的抑制作用明显增强,经山莴苣苦素处理的MDA-MB-453乳腺癌细胞的p-Akt随着山莴苣苦素处理浓度的升高,其表达水平明显下降,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论山莴苣苦素通过抑制PI3K/Akt信号通路,达到抑制MDA-MB-453乳腺癌细胞增殖和迁移的作用。 展开更多

关键词 mda-mb-453乳腺癌细胞 山莴苣苦素 PI3K/AKT信号通路

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