黄芪多糖对小鼠MC-3T3-E1成骨细胞维生素D受体mRNA及蛋白表达的影响 被引量：24

1

作者 柴艺汇 高洁 +5 位作者 陈云志 管连城 田兴中 赵威 王焕珍 吴大梅 《时珍国医国药》 CAS CSCD 北大核心 2018年第6期1281-1283,共3页

目的探讨黄芪多糖对小鼠MC-3T3-E1成骨细胞维生素D受体(VDR)mRNA及蛋白表达的影响。方法采用Real-Time PCR、Western Blot检测黄芪多糖对小鼠MC-3T3-E1成骨细胞维生素D受体(VDR)mRNA及蛋白表达情况。实验分为5组,正常组、维生素D组(10-5... 目的探讨黄芪多糖对小鼠MC-3T3-E1成骨细胞维生素D受体(VDR)mRNA及蛋白表达的影响。方法采用Real-Time PCR、Western Blot检测黄芪多糖对小鼠MC-3T3-E1成骨细胞维生素D受体(VDR)mRNA及蛋白表达情况。实验分为5组,正常组、维生素D组(10-5mmol·L-1)、10μg·ml-1黄芪多糖组、1μg·ml-1L黄芪多糖组、0.1μg·ml-1黄芪多糖组。结果 Real-Time PCR、Western Blot检测结果显示,与正常组比较,不同剂量的黄芪多糖均可上调小鼠MC-3T3-E1成骨细胞VDR mRNA及蛋白相对表达量,且在黄芪多糖剂量为1μg·ml-1时其表达量显著增高(P<0.05)。结论黄芪多糖治疗骨质疏松症重要机制之一可能与上调VDR mRNA及蛋白表达水平有关。 展开更多

关键词 mc-3T3-e1成骨细胞 黄芪多糖 VDR

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黄芪多糖对地塞米松诱导的MC-3T3-E1成骨细胞FGF23、Klotho mRNA及蛋白表达的影响 被引量：3

2

作者 龚华乾 田兴中 +7 位作者 陈雨佳 牛建均 王焕珍 刘春艳 范志梁 李倩 王庆学 柴艺汇 《时珍国医国药》 CAS CSCD 北大核心 2023年第6期1349-1353,共5页

目的通过研究黄芪多糖对MC-3T3-E1成骨细胞成纤维生长因子-23(FGF23)、Klotho、骨钙素(OC)和碱性磷酸酶(ALP)表达的影响,初步探讨黄芪多糖治疗骨质疏松症(OP)的作用机制。方法实验为6组,分别为正常组、模型组、黄芪多糖低、中、高剂量... 目的通过研究黄芪多糖对MC-3T3-E1成骨细胞成纤维生长因子-23(FGF23)、Klotho、骨钙素(OC)和碱性磷酸酶(ALP)表达的影响,初步探讨黄芪多糖治疗骨质疏松症(OP)的作用机制。方法实验为6组,分别为正常组、模型组、黄芪多糖低、中、高剂量组、维生素D3组。MTT法检测不同浓度的黄芪多糖在不同时间(24 h,36 h,48 h)对MC-3T3-E1成骨细胞增殖抑制率的影响;比色法检测MC-3T3-E1成骨细胞ALP的活性;ELISA法检测MC-3T3-E1成骨细胞OC的含量;RT-PCR法和Western Blot法检测MC-3T3-E1成骨细胞FGF23、Klotho mRNA和蛋白表达水平。结果MTT法结果显示,与模型组比较,黄芪多糖低、中、高剂量组及维生素D3组MC-3T3-E1成骨细胞增殖抑制率在24 h、36 h、48 h时显著降低(P<0.01),且与黄芪多糖浓度呈负相关;ELISA法结果显示,与模型组比较,黄芪多糖各剂量组与维生素D3组小鼠MC-3T3-E1成骨细胞OC含量均显著升高(P<0.01);比色法结果显示,与模型组比较,黄芪多糖各剂量组与维生素D3组MC-3T3-E1成骨细胞ALP含量均显著升高(P<0.01);RT-PCR法和Western Blot法结果显示,与模型组比较,黄芪多糖各剂量组与维生素D3组均可显著下调FGF23 mRNA和蛋白表达水平(P<0.01),黄芪多糖中、高剂量组与维生素D3组均可显著上调Klotho mRNA和蛋白表达水平(P<0.01)。结论黄芪多糖可防治骨质疏松症,其机制可能与提高MC-3T3-E1成骨细胞活性及调节FGF23、Klotho mRNA和蛋白表达水平有关。 展开更多

关键词 骨质疏松症 mc-3T3-e1成骨细胞 黄芪多糖 FGF23 KLOTHO

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土鳖虫醇提物制备方法及其制备物对MC3T3-E1成骨细胞促增殖作用活性评价 被引量：12

3

作者 张泽峰 王晶 +1 位作者 孙艺茹 王春梅 《辽宁中医药大学学报》 CAS 2018年第7期50-54,共5页

目的：研究土鳖虫最佳醇提物制备工艺。方法：使用浸渍法和匀浆法用50%乙醇以浸提时间（4 h-4 d）、温度（4-60℃）、料液比（4-12倍）和是否搅拌为因素,以提取物总获得率和蛋白获得率为指标提取土鳖虫;使用正交试验法优化浸渍法和匀浆... 目的：研究土鳖虫最佳醇提物制备工艺。方法：使用浸渍法和匀浆法用50%乙醇以浸提时间（4 h-4 d）、温度（4-60℃）、料液比（4-12倍）和是否搅拌为因素,以提取物总获得率和蛋白获得率为指标提取土鳖虫;使用正交试验法优化浸渍法和匀浆法的提取条件;使用MTT法体外评价两种制备方法所得土鳖虫醇提物对MC3T3-E1成骨细胞促增殖作用的影响以探索土鳖虫最佳醇提物的制备工艺。结果：搅拌因素对两种方法制得提取物的获得率均影响甚微;在不搅拌的状态下浸渍法制得的提取物和总蛋白获得率随温度升高而增加,料液比对匀浆法物质获得率影响较大;正交试验优选浸渍法最佳提取方案为以10倍量料液比在60℃条件下静置4 d,其总获得率为11%;匀浆法最佳方案为：以8倍量料液比在50℃条件下静置12 h,其总获得率为10.2%;匀浆法和浸渍法提取土鳖虫的总获得率无统计学差异,但匀浆法制得的提取物对MC3T3-E1成骨细胞的促增殖作用更明显,当用药浓度均为0.2 mg/m L时,匀浆法和浸渍法制备物的促细胞增殖率分别达到171.59%和48.45%。结论：优化后的两种方法制备物获得率差异不显著,但匀浆法所得提取物对MC3T3-E1成骨细胞的促增殖作用优于浸渍法。 展开更多

关键词 土鳖虫 乙醇提取 匀浆法 浸渍法 MTT法 mc3T3-e1成骨细胞

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丹参对小鼠前成骨细胞的增殖分化的影响及其与细胞外信号调节激酶1／2信号通路的关系 被引量：9

4

作者 张晓 王啸 +3 位作者 张鹏 顾伯林 杨帆 徐又佳 《中华实验外科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2017年第1期86-89,共4页

目的观察丹参对于小鼠前成骨细胞（MC3T3-E1）的增殖、分化及成骨活性的影响，探讨与细胞外信号调节蛋白激酶（ERK）细胞信号通路的关系。方法分别用75、150、300 mg/L浓度的丹参注射液干预MC3T3-E1前成骨细胞，并设对照组；用细胞计数... 目的观察丹参对于小鼠前成骨细胞（MC3T3-E1）的增殖、分化及成骨活性的影响，探讨与细胞外信号调节蛋白激酶（ERK）细胞信号通路的关系。方法分别用75、150、300 mg/L浓度的丹参注射液干预MC3T3-E1前成骨细胞，并设对照组；用细胞计数试剂盒（CCK-8）法检测细胞增殖活性的改变，培养21 d后茜素红染色法检测各组钙结节生成，实时荧光定量聚合酶链反应（FQ-PCR）法检测各组骨钙素（BGP）、Runt相关基因2（Runx2）mRNA表达。设300 mg/L浓度的丹参干预组和对照组，Western blot法检测磷酸化ERK1/2蛋白的表达；用ERK1/2细胞信号通路抑制剂PD98059抑制ERK通路后，FQ-PCR检测成骨相关基因BGP、Runx2基因mRNA表达。结果与对照组比较，丹参干预组的MC3T3-E1前成骨细胞增殖活性明显增强，其中300 mg/L浓度组作用最强（P＝0.006）。各浓度丹参干预组钙结节生成较对照组明显增多（P＝0.000），分别为（11.40±2.30）、（21.00±2.24）、（35.60±1.52）个，对照组为（6.40±1.14）个。各浓度丹参干预组的BGP mRNA相对表达量（1.02±0.04、1.11±0.07、1.26±0.05）较对照组增加，其中150 mg/L组以及300 mg/L组差异有统计学意义（P＝0.019，P＝0.000）；各浓度的丹参干预组的RunX2 mRNA相对表达量均有升高（1.38±0.25、2.28±0.13、2.48±0.06），并呈浓度依赖性，其中75 mg/L组差异有统计学意义（P＝0.012），150 mg/L组及300 mg/L组差异有统计学意义（P＝0.000）。经过丹参干预后（300 mg/L），磷酸化ERK1/2蛋白表达相对表达量为0.14±0.01，对照组为0.10±0.01，差异有统计学意义（P＝0.014）。300 mg/L丹参组、300 mg/L丹参＋PD98059组的BGPmRNA相对表达量分别为1.87±0.05、1.39±0.07，两组差异有统计学意义（P＝0.000）；Runx2表达的相对表达量分别为1.57±0.05、1.45±0.05，两组差异有统计学意义（P＝0.000）。结论丹参能促进成骨细胞增殖� 展开更多

关键词 丹参 mc3T3-e1前成骨细胞 细胞外信号调节蛋白激酶 信号通路

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沉默Piezo1机械敏感型离子通道对MC3T3-E1成骨细胞迁移的影响 被引量：7

5

作者 闫亮 姜金 +2 位作者 马崇文 李睿 夏亚一 《中国修复重建外科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2019年第1期28-34,共7页

目的研究Piezo1机械敏感型离子蛋白在小鼠MC3T3-E1成骨细胞迁移中的作用。方法取第5～10代小鼠MC3T3-E1成骨细胞,分为Piezo1-小干扰RNA(small interfering RNA,siRNA)转染组(A组)、阴性对照组(B组)和空白对照组(C组)。A、B组分别采用si... 目的研究Piezo1机械敏感型离子蛋白在小鼠MC3T3-E1成骨细胞迁移中的作用。方法取第5～10代小鼠MC3T3-E1成骨细胞,分为Piezo1-小干扰RNA(small interfering RNA,siRNA)转染组(A组)、阴性对照组(B组)和空白对照组(C组)。A、B组分别采用siRNA转染试剂将Piezo1-siRNA或阴性对照siRNA转染入小鼠MC3T3-E1成骨细胞,C组仅加入siRNA转染试剂,在倒置相差显微镜及荧光显微镜下观察细胞形态并计算转染效率。采用免疫荧光染色和Western blot检测各组Piezo1蛋白表达水平;采用Transwell细胞迁移实验和细胞划痕实验检测Piezo1-siRNA转染后MC3T3-E1成骨细胞迁移能力的变化。结果转染48 h后,A组可见细胞体积较未转染细胞略有增大,细胞突变长增粗,但细胞集落有所减少,悬浮细胞较未转染增多,细胞碎片增多。荧光显微镜下可见B组小鼠MC3T3-E1成骨细胞中出现绿色荧光,转染效率为68.56%±4.12%。免疫荧光染色及Western blot检测示,A组细胞内Piezo1蛋白表达水平均显著低于B、C组,差异有统计学意义(P<0.05);B、C组间差异无统计学意义(P>0.05)。Transwell细胞迁移实验及细胞划痕实验检测示,A组每孔迁移细胞数及培养1～4 d的细胞划痕愈合率均明显低于B、C组,差异有统计学意义(P<0.05);B、C组间差异无统计学意义(P>0.05)。结论沉默Piezo1基因能显著抑制小鼠MC3T3-E1成骨细胞的迁移能力。 展开更多

关键词 Piezo1 小干扰RNA mc3T3-e1成骨细胞 细胞迁移

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淫羊藿含药血清对MC3T3-E1成骨细胞增殖及分化的影响 被引量：7

6

作者 曲雷鸣 龚伟 《中国药房》 CAS CSCD 2013年第35期3283-3285,共3页

目的:研究淫羊藿含药血清对体外培养小鼠MC3T3-E1成骨细胞增殖、分化的影响。方法:大鼠灌胃给予淫羊藿后制备含药血清。取MC3T3-E1成骨细胞,分别加入正常血清(对照组)和含10%、15%、20%的淫羊藿含药血清(淫羊藿含药血清低、中、高浓度组... 目的:研究淫羊藿含药血清对体外培养小鼠MC3T3-E1成骨细胞增殖、分化的影响。方法:大鼠灌胃给予淫羊藿后制备含药血清。取MC3T3-E1成骨细胞,分别加入正常血清(对照组)和含10%、15%、20%的淫羊藿含药血清(淫羊藿含药血清低、中、高浓度组)的培养基培养,MTT法检测MC3T3-E1成骨细胞增殖情况,ELISA法检测细胞中碱性磷酸酶(ALP)骨钙素(BGP)活性。结果:与对照组比较,在24、48、72 h时间点淫羊藿含药血清高、中、低浓度组MC3T3-E1成骨细胞增殖程度显著升高(P<0.05);与对照组比较,在24、48、72 h时间点淫羊藿含药血清高、中、低浓度组ALP活性显著增强,在6、9、12 d时间点淫羊藿含药血清高、中、低浓度组BGP活性显著增强(P<0.05)。结论:淫羊藿能促进体外培养的MC3T3-E1成骨细胞增殖与骨向分化。 展开更多

关键词 淫羊藿 含药血清 mc3T3-e1成骨细胞 增殖 分化

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金属钴、铬离子对成骨细胞增殖及Ⅰ型胶原蛋白表达功能的影响 被引量：6

7

作者 袁晓军 舒敏锐 +4 位作者 李刚 傅宇 徐文华 李俊宁 曹盛生 《实验与检验医学》 CAS 2016年第2期158-160,共3页

目的观察钴、铬离子对小鼠成骨细胞(MC3T3-E1)的细胞毒性及Ⅰ型胶原蛋白合成的影响,探讨钴、铬离子对骨代谢功能的影响机制。方法钴、铬离子分别与小鼠成骨样MC3T3-E1细胞体外培养,噻唑蓝(MTT)法测定细胞活力。ELISA法检测培养上清液中... 目的观察钴、铬离子对小鼠成骨细胞(MC3T3-E1)的细胞毒性及Ⅰ型胶原蛋白合成的影响,探讨钴、铬离子对骨代谢功能的影响机制。方法钴、铬离子分别与小鼠成骨样MC3T3-E1细胞体外培养,噻唑蓝(MTT)法测定细胞活力。ELISA法检测培养上清液中Ⅰ型胶原蛋白含量、RT-PCR检测成骨细胞Ⅰ型胶原蛋白m RNA的表达。结果 MTT结果显示,与对照组相比,钴、铬离子能明显抑制成骨细胞的细胞活力;成骨细胞暴露在钴铬离子下,与对照组相比,24h、48h后:Ⅰ型胶原蛋白的分泌分别下降45.3%、49.2%(P<0.05);Ⅰ型胶原蛋白m RNA表达分别下降26.8%、32.6%(P<0.05)。结论钴、铬离子可抑制成骨细胞Ⅰ型胶原蛋白的分泌及其m RNA的表达,提示其对MC3T3-El细胞可能存在细胞毒性。 展开更多

关键词 钴 铬离子 mc3T3-e1成骨细胞 Ⅰ-型胶原蛋白

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土家传统药刺老苞总皂苷对H_2O_2诱导的MC3T3-E1成骨细胞损伤改善 被引量：5

8

作者 王萌萌 崔箭 裴凌鹏 《中国民族医药杂志》 2016年第6期43-46,共4页

目的:在H2O2胁迫下,研究刺老苞总皂苷增强MC3T3-E1成骨细胞抗自由基损伤的作用。方法:用H2O2作用MC3T3-E1成骨细胞,建立自由基损伤细胞模型。培养的成骨细胞分为对照组、模型组、刺老苞总皂苷低剂量组(1×10-8mol/L)、刺老苞总皂苷... 目的:在H2O2胁迫下,研究刺老苞总皂苷增强MC3T3-E1成骨细胞抗自由基损伤的作用。方法:用H2O2作用MC3T3-E1成骨细胞,建立自由基损伤细胞模型。培养的成骨细胞分为对照组、模型组、刺老苞总皂苷低剂量组(1×10-8mol/L)、刺老苞总皂苷中剂量组(1×10-7mol/L)和刺老苞总皂苷高剂量组(1×10-6mol/L)。测定不同处理组细胞活力、超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)活性、活性自由氧(reactive oxygen species,ROS)含量、脂质过氧化物(lipid oxygen,LPO)含量,同时利用荧光偏振法测定细胞膜流动性。结果:模型组细胞活力、SOD活性、细胞膜流动性均比不同刺老苞总皂苷组有显著降低(P﹤0.01),而ROS含量、LPO含量均比不同刺老苞总皂苷组有显著升高(P﹤0.01)。结论:H2O2摄入会导致MC3T3-E1成骨细胞的氧化损伤,而刺老苞总皂苷可以预防或降低此类损伤对细胞的影响。 展开更多

关键词 mc3T3-e1成骨细胞 自由基 刺老苞土家药 总皂苷

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芹菜素对小鼠成骨细胞MC3T3-E1细胞增殖、分化和矿化的影响 被引量：5

9

作者 许周媚 张雪 +2 位作者 查旋 周晨慧 徐道华 《广东医学院学报》 2016年第2期109-112,共4页

目的探讨芹菜素对小鼠成骨细胞MC3T3-E1细胞增殖、分化和矿化的影响。方法分别采用MTT法、碱性磷酸酶活性、茜素红染色测定不同浓度芹菜素对MC3T3-E1细胞增殖、成骨分化、矿化作用的影响。结果芹菜素在5～100μmol/L浓度范围内对MC3T3-E... 目的探讨芹菜素对小鼠成骨细胞MC3T3-E1细胞增殖、分化和矿化的影响。方法分别采用MTT法、碱性磷酸酶活性、茜素红染色测定不同浓度芹菜素对MC3T3-E1细胞增殖、成骨分化、矿化作用的影响。结果芹菜素在5～100μmol/L浓度范围内对MC3T3-E1细胞增殖无显著影响,在10～100μmol/L浓度范围内能显著增加MC3T3-E1细胞碱性磷酸酶活性（P〈0.01）以及促进其矿化作用。结论芹菜素可促进MC3T3-E1细胞成骨分化和矿化。 展开更多

关键词 芹菜素 mc3T3-e1小鼠成骨细胞 骨质疏松 成骨分化

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活化蛋白1在高糖诱导MC3T3-E1成骨细胞凋亡中的作用 被引量：4

10

作者 王小菊 冯正平 +2 位作者 邓华聪 姜蓉 杜佳 《中华骨质疏松和骨矿盐疾病杂志》 2014年第3期258-262,共5页

目的观察活化蛋白1(AP-1)在高糖诱导MC3T3-E1成骨细胞凋亡中的作用。方法将体外培养的MC3T3-E1细胞分为正常对照组和实验组,实验组包括22.0 mmol/L D-葡萄糖组(高糖组)、P38MAPK-shRNA慢病毒转染组、P38MAPK信号转导阻断剂组、无关shRN... 目的观察活化蛋白1(AP-1)在高糖诱导MC3T3-E1成骨细胞凋亡中的作用。方法将体外培养的MC3T3-E1细胞分为正常对照组和实验组,实验组包括22.0 mmol/L D-葡萄糖组(高糖组)、P38MAPK-shRNA慢病毒转染组、P38MAPK信号转导阻断剂组、无关shRNA转染组、AP-1抑制剂SP600125组。采用TUNEL和流式细胞术检测细胞凋亡,用EMSA检测MC3T3-E1细胞AP-1的活性。结果与正常对照组相比,高糖组MC3T3-E1成骨细胞P38MAPK表达、AP-1活性、细胞凋亡显著增加。P38MAPK-shRNA慢病毒转染组和P38MAPK信号转导阻断剂组MC3T3-E1细胞AP-1活性较高糖组分别下降57.9%(P<0.01)和45.6%(P<0.05)。AP-1抑制剂组MC3T3-E1细胞凋亡率较高糖组下降39.7%(P<0.01)。结论高糖通过激活P38MAPK增加AP-1活性,诱导MC3T3-E1成骨细胞凋亡,抑制AP-1活性后高糖诱导的MC3T3-E1细胞凋亡显著下降。 展开更多

关键词 活化蛋白1 mc3T3-e1成骨细胞 RNA干扰 细胞凋亡

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锁阳含药血清对MC3T3-E1成骨细胞增殖分化及矿化的影响 被引量：4

11

作者 武海燕 张灵莉 冯雪梅 《中药与临床》 2019年第1期23-26,共4页

目的:研究锁阳含药血清对体外培养小鼠成骨细胞的增殖、分化以及矿化的影响。方法:小鼠灌胃14天后摘眼球取血制备含药血清,分别将10%浓度的各组含药血清及对照组血清(生理盐水组血清)分别加入细胞培养液中培养成骨细胞。采用CCK8法检测... 目的:研究锁阳含药血清对体外培养小鼠成骨细胞的增殖、分化以及矿化的影响。方法:小鼠灌胃14天后摘眼球取血制备含药血清,分别将10%浓度的各组含药血清及对照组血清(生理盐水组血清)分别加入细胞培养液中培养成骨细胞。采用CCK8法检测成骨细胞增殖能力,钙钴法检测其碱性磷酸酶活性,0.2%茜素红染色法观察成骨细胞钙化结节情况。结果:同一时间点,与生理盐水血清组比较,锁阳含药血清各组均能促进MC3T3-E1成骨细胞增殖,其中,锁阳含药血清中剂量组与高剂量组在三个时间点均能够显著促进细胞增殖(p<0.01);锁阳含药血清能够增强MC3T3-E1成骨细胞分泌碱性磷酸酶(ALP),且有一定的浓度依赖性;随着锁阳含药血清浓度的增加,钙化结节数量也呈现增加的趋势。结论:锁阳含药血清能够促进MC3T3-E1成骨细胞增殖分化与矿化,且在一定浓度范围内,浓度越高,促进作用愈明显。 展开更多

关键词 锁阳含药血清 mc3T3-e1成骨细胞 增殖分化 矿化

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灵芝多糖对地塞米松诱导的MC3T3-E1成骨细胞凋亡的影响及可能机制 被引量：2

12

作者 薛春阳 崔煦 +2 位作者 郭胜洋 崔崟 王秀会 《解剖科学进展》 CAS 2023年第2期157-160,共4页

目的探讨灵芝多糖(GLP)对地塞米松(DEX)诱导的MC3T3-E1成骨细胞凋亡的影响及可能的作用机制。方法采用CCK-8法检测不同浓度GLP对DEX诱导的MC3T3-E1成骨细胞凋亡的保护作用,选出GLP最佳浓度;实验分为空白对照组(Control)、地塞米松组(DEX... 目的探讨灵芝多糖(GLP)对地塞米松(DEX)诱导的MC3T3-E1成骨细胞凋亡的影响及可能的作用机制。方法采用CCK-8法检测不同浓度GLP对DEX诱导的MC3T3-E1成骨细胞凋亡的保护作用,选出GLP最佳浓度;实验分为空白对照组(Control)、地塞米松组(DEX)与灵芝多糖+地塞米松组(GLP+DEX)。试剂盒检测各组细胞半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3(Caspase-3)和半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-9(Caspase-9)的活性;Hoechst染色及流式细胞仪检测各组细胞的凋亡情况;Western blot检测Bcl-2、BAX、caspase-3、JAK2、p-JAK2、STAT3、p-STAT3的表达。结果DEX可上调MC3T3-E1成骨细胞caspase-3和caspase-9活性,诱导MC3T3-E1成骨细胞凋亡,上调凋亡相关蛋白Bax、caspase-3的表达,下调抗凋亡蛋白Bcl-2的表达,上调JAK2-STAT3信号通路相关蛋白p-JAK2、p-STAT3的表达,灵芝多糖干预可逆转以上变化的发生。结论灵芝多糖可能通过抑制JAK2/STAT3通路抑制地塞米松诱导的MC3T3-E1成骨细胞凋亡。 展开更多

关键词 灵芝多糖 地塞米松 mc3T3-e1成骨细胞 JAK2-STAT3信号通路

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慢病毒介导p38MAPK基因沉默对高糖诱导成骨细胞凋亡的影响 被引量：3

13

作者 冯正平 邓华聪 +3 位作者 姜蓉 杜佳 陈丹燕 梁小燕 《中华内分泌代谢杂志》 CAS CSCD 北大核心 2011年第6期518-522,共5页

目的观察p38丝裂原活化的蛋白激酶（MAPK）在高糖诱导的MC3T3-E1成骨细胞凋亡中的作用，并探讨其对凋亡相关信号分子caspase-3、bax及bcl-2表达的影响。方法构建靶向p38MAPK的shRNA慢病毒载体，将体外培养的MC3T3-El成骨细胞分为正常对... 目的观察p38丝裂原活化的蛋白激酶（MAPK）在高糖诱导的MC3T3-E1成骨细胞凋亡中的作用，并探讨其对凋亡相关信号分子caspase-3、bax及bcl-2表达的影响。方法构建靶向p38MAPK的shRNA慢病毒载体，将体外培养的MC3T3-El成骨细胞分为正常对照组（A组）、高糖组（B组）、p38MAPK-hRNA慢病毒转染组（c组）、信号转导阻断剂组（D组）和尢关shRNA转染组（E组）。RT-PCR检测细胞p38MAPKmRNA的表达，流式细胞术检测细胞凋亡，Western印迹检测p38MAPK、p-p38MAPK、caspase-3、bax、bcl-2蛋白水平，透射电镜观察细胞超微结构。结果构建靶向p38MAPK的shRNA慢病毒载体，并成功导入MC3T3-E1成骨细胞。与高糖组和无关转染组相比，p38MAPK-shRNA转染能显著抑制高糖诱导的MC3T3-El细胞p38MAPK过度活化，明显减少细胞的凋亡（P〈0．01）；同时，p38MAPK-shRNA转染及p38MAPK阻断剂明显降低MC3T3-E1细胞中p38MAPK、p-p38MAPK、caspase-3及促凋亡基因bax蛋白表达，上调捌亡抑制基因bcl-2，与高糖组和无关转染组相比，差异有统计学意义（P〈0．01，P〈0．05）。结论慢病毒介导p38MAPK靶向RNAT扰可通过抑制p38MAPK信号通路的活化，降低p-p38MAPK、caspase-3、bax表达，上凋bcl-2表达，最终抑制高糖所诱导的MC3T3-E1成骨细胞的凋亡。 展开更多

关键词 p38丝裂原活化的蛋白激酶 mc3T3-e1成骨细胞 RNA干扰 高糖 细胞凋亡

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克老素抑制地塞米松诱导的MC3T3-E1成骨细胞凋亡 被引量：3

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作者 黄倩 李宝善 +2 位作者 梁霄 刘丹 马厚勋 《中国药理学通报》 CAS CSCD 北大核心 2018年第4期570-576,共7页

目的探究体外转染克老素(Klotho,KL)基因对地塞米松(dexamethason,DEX)诱导的MC3T3-E1成骨细胞凋亡的影响。方法用携带KL基因的重组腺病毒(Ad-KL)及携带绿色荧光蛋白基因的重组腺病毒(Ad-GFP)感染细胞,并建立DEX诱导凋亡的细胞模型。运... 目的探究体外转染克老素(Klotho,KL)基因对地塞米松(dexamethason,DEX)诱导的MC3T3-E1成骨细胞凋亡的影响。方法用携带KL基因的重组腺病毒(Ad-KL)及携带绿色荧光蛋白基因的重组腺病毒(Ad-GFP)感染细胞,并建立DEX诱导凋亡的细胞模型。运用荧光倒置显微镜观察重组腺病毒的转染效果,qPCR与Western blot法分析KL mRNA和蛋白表达情况;CCK-8法检测不同浓度DEX作用于MC3T3-E1细胞后的存活率及各研究组细胞的生存情况;流式细胞仪分析各研究组细胞的凋亡率;qPCR与Western blot分析凋亡标志物的mRNA、蛋白表达;免疫荧光分析caspase-9的荧光蛋白表达情况。结果重组腺病毒成功感染MC3T3-E1成骨细胞,KL组和KL+DEX组的KL mRNA与蛋白表达量较非转染组明显升高。CCK-8法检测出DEX的适宜干预浓度为2.0 mmol·L^(-1)。DEX组、GFP+DEX组较其余组细胞存活率明显降低、凋亡率明显增加,Bax、Bcl-2的mRNA与蛋白表达分别表现出增加和降低趋势;KL组细胞存活率、凋亡率,以及Bcl-2、Bax mRNA与蛋白表达较DEX组及KL+DEX组均明显改善。结论大剂量DEX的运用能够诱发MC3T3-E1成骨细胞凋亡,上调KL表达具有抵抗DEX诱导成骨细胞凋亡的作用,提示上调KL表达可改善糖皮质激素诱导性骨质疏松,为大剂量使用糖皮质激素所致医源性骨质疏松的治疗提供新的靶点。 展开更多

关键词 克老素 地塞米松 mc3T3-e1成骨细胞 凋亡 Bcl-2 BAX CASPASe-9

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6-姜酚对MC3T3-E1成骨细胞增殖及分化的影响 被引量：3

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作者 刘斌 张琼 《中国生化药物杂志》 CAS 2016年第7期25-27,共3页

目的研究6-姜酚对MC3T3-E1成骨细胞增殖及分化的影响。方法取MC3T3-E1成骨细胞培养,培养基加入含有1×10^(-9)、1×10^(-8)、1×10^(-7)mol/L的6-姜酚及15 mmol/L的高浓度葡萄糖作为实验组,仅加入15 mmol/L的高浓度葡萄糖... 目的研究6-姜酚对MC3T3-E1成骨细胞增殖及分化的影响。方法取MC3T3-E1成骨细胞培养,培养基加入含有1×10^(-9)、1×10^(-8)、1×10^(-7)mol/L的6-姜酚及15 mmol/L的高浓度葡萄糖作为实验组,仅加入15 mmol/L的高浓度葡萄糖作为对照组,MTT法检测MC3T3-E1成骨细胞增殖情况,ELISA法检测细胞中碱性磷酸酶(alkaline phosphatase,ALP)、骨钙素(bone gla protein,BGP)活性。结果 1×10^(-9)~1×10^(-7)mol/L的6-姜酚均能够显著地增加15 mmol/L高糖作用下的MC3T3-E1细胞生长并提升ALP活性,并能够明显地增强细胞骨钙素的分泌,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论 6-姜酚能促进体外培养的MC3T3-E1成骨细胞增殖与骨向分化,这可能为其防治骨质疏松的机制之一。 展开更多

关键词 6-姜酚 高浓度葡萄糖 mc3T3-e1成骨细胞 增殖 分化 碱性磷酸酶 骨钙素

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刺老苞根皮黄酮对H2O2诱导的MC3T3-E1成骨细胞损伤改善 被引量：3

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作者 裴凌鹏 尹霞 +2 位作者 崔箭 李莉 朱嘉 《南京师大学报（自然科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2010年第1期107-111,共5页

在H2O2胁迫下,研究刺老苞根皮(Aralia echinocauIis)黄酮增强MC3T3-E1成骨细胞抗自由基损伤的作用.为此用H2O2作用MC3T3-E1成骨细胞,建立自由基损伤细胞模型.培养的成骨细胞分为对照组、模型组、刺老苞根皮黄酮低剂量组(1×10-8mol... 在H2O2胁迫下,研究刺老苞根皮(Aralia echinocauIis)黄酮增强MC3T3-E1成骨细胞抗自由基损伤的作用.为此用H2O2作用MC3T3-E1成骨细胞,建立自由基损伤细胞模型.培养的成骨细胞分为对照组、模型组、刺老苞根皮黄酮低剂量组(1×10-8mol/L)、刺老苞根皮黄酮中剂量组(1×10-7mol/L)和刺老苞根皮黄酮高剂量组(1×10-6mol/L).测定不同处理组细胞活力、超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)活性、活性自由氧(reactive oxygen species,ROS)含量、脂质过氧化物(lipid oxygen,LPO)含量,同时利用荧光偏振法测定细胞膜流动性.结果显示与模型组相比,刺老苞根皮黄酮组细胞活力、SOD活性、细胞膜流动性均显著升高(P<0.01),而ROS含量、LPO含量则显著降低(P<0.01),并呈现一定的量效关系.可以认为H2O2摄入会导致MC3T3-E1成骨细胞的氧化损伤,而刺老苞根皮黄酮可以预防或降低此类损伤对细胞的影响. 展开更多

关键词 mc3T3-e1成骨细胞 自由基 刺老苞根皮 黄酮类化合物

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刺老苞根皮黄酮类化合物对MC3TE-E1成骨细胞OPG和RANKL mRNA基因表达影响的实验研究 被引量：3

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作者 裴凌鹏 尹霞 +1 位作者 崔箭 朱嘉 《中国民族医药杂志》 2009年第6期44-46,共3页

目的：探讨刺老苞根皮黄酮类化合物对MC3T3-E1成骨细胞骨保护素（OPG）和核因子κB受体激活因子配体（RANKL）mRNA基因表达的影响。方法：体外培养MC3T3-E1成骨细胞,分别加入含0 mol.L^-1、10^-8mol.L^-1、10^-7mol.L^-1、10^-6mol.L^-... 目的：探讨刺老苞根皮黄酮类化合物对MC3T3-E1成骨细胞骨保护素（OPG）和核因子κB受体激活因子配体（RANKL）mRNA基因表达的影响。方法：体外培养MC3T3-E1成骨细胞,分别加入含0 mol.L^-1、10^-8mol.L^-1、10^-7mol.L^-1、10^-6mol.L^-1刺老苞根皮黄酮类化合物的培养液,48h及96h后分别提取细胞总mRNA,用RT-PCR方法分析OPG/RANKL的mRNA的表达,进行半定量分析。结果：培养48h后,与对照组比较,刺老苞根皮黄酮类化合物增强了OPG mRNA的表达,有显著性差异（P〈0.05或P〈0.01）,VOPG/VRANKL比值增大;96h后,刺老苞根皮黄酮类化合物明显增强了OPG mR-NA的表达,各浓度组与对照组相比,均有显著性差异（P〈0.05或P〈0.01）,各浓度组VOPG/VRANKL比值增大,有显著性差异（P〈0.05或P〈0.01）。结论：刺老苞根皮黄酮类化合物可能通过增加成骨细胞OPG的表达来抑制破骨细胞的分化和成熟,从而抑制骨吸收,达到治疗骨质疏松症的目的。 展开更多

关键词 刺老苞根皮 黄酮类化合物 mc3T3-e1成骨细胞 OPG RANKL

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格列苯脲在高糖环境下对MC3T3-E1成骨细胞增殖、分化和凋亡的影响 被引量：3

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作者 张娟 张会娟 +2 位作者 靳爽 张维 周浩峰 《中华内分泌代谢杂志》 CAS CSCD 北大核心 2015年第5期462-464,共3页

以1、10、20μmoL／L格列苯脲处理MC3T3-E1细胞48h后，利用CCK-8比色法检测细胞的增殖率，流式细胞术检测凋亡率，实时荧光定量PCR检测I型胶原蛋白（COL-1）、骨桥蛋白（OPN）的表达。Western印迹法检测凋亡相关蛋白Bax、Bcl-2的表达。... 以1、10、20μmoL／L格列苯脲处理MC3T3-E1细胞48h后，利用CCK-8比色法检测细胞的增殖率，流式细胞术检测凋亡率，实时荧光定量PCR检测I型胶原蛋白（COL-1）、骨桥蛋白（OPN）的表达。Western印迹法检测凋亡相关蛋白Bax、Bcl-2的表达。结果显示与对照组相比，随着格列苯脲浓度的升高，MC3T3-E1细胞的增殖率逐渐上升（P〈0．05），凋亡率逐渐下降（P〈0．05），COL-1、OPNmRNA和Bcl-2蛋白表达逐步升高（均P〈0．05），Bax蛋白的表达逐步下降（P〈0．05）。提示格列苯脲能够在高糖环境下促进MC3T3-E1细胞的增殖和分化，并抑制其凋亡，且在一定范围内具有浓度依赖性。 展开更多

关键词 格列苯脲 mc3T3-e1成骨细胞 增殖 分化 凋亡

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IGF-1对MC3T3-E1细胞凋亡及凋亡调控蛋白Bax、Bcl-2表达的影响 被引量：2

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作者 郑丽 董进 《中西医结合心脑血管病杂志》 2008年第6期688-689,共2页

目的 探讨胰岛素样生长因子-1（IGF-1）对小鼠前成骨样MC3T3-E1细胞凋亡基因相关蛋白Bax／Bcl-2表达的影响。方法 MC3T3-E1细胞分组培养，应用4个浓度的IGF-1（1ng／mL、10ng／mL、30ng／mL、50ng／mL）干预24h。观察MC3T3-E1细胞动态... 目的 探讨胰岛素样生长因子-1（IGF-1）对小鼠前成骨样MC3T3-E1细胞凋亡基因相关蛋白Bax／Bcl-2表达的影响。方法 MC3T3-E1细胞分组培养，应用4个浓度的IGF-1（1ng／mL、10ng／mL、30ng／mL、50ng／mL）干预24h。观察MC3T3-E1细胞动态生长状况：流式细胞技术检测细胞凋亡率；免疫组织化学法检测凋亡蛋白Pax／Bcl-2的表达水平。结果 与正常血清对照组相比，无血清对照组MC3T3-E1细胞凋亡率增加（P〈0．05）；与无血清组相比，IGF-1组MC3T3-E1细胞凋亡率降低（P〈0．05），Bax表达减弱（P〈0．05），Bcl-2表达增强（P〈0．05）；各浓度组间比较，（1～50）ng／mL浓度范围内MC3T3-E1细胞凋亡率随IGF-1浓度加大而逐渐降低（P〈0．05），Bax表达逐渐减弱（P〈0．05），50ng／mL浓度组Bcl-2表达明显增强（P〈0．01），Bcl-2／Bax灰度比与细胞凋亡率呈显著正相关（r=0.917，P〈0．01）。结论 一定浓度的IGF-1同时调节Bax和Bcl-2表达，抑制无血清培养诱导的细胞凋亡。并存在剂量依赖性效应。 展开更多

关键词 胰岛素样生长因子-1 mc3T3-e1成骨细胞 无血清 凋亡

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胰岛素样生长因子-1对MC3T3-E1细胞增殖及Ⅰ型胶原蛋白合成的影响 被引量：3

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作者 张娟 董进 《中西医结合心脑血管病杂志》 2009年第6期705-707,共3页

目的观察胰岛素样生长因子-1(IGF-1)对体外培养的小鼠前成骨样MC3T3-E1细胞增殖及I型胶原蛋白合成的影响,探讨IGF-1对骨代谢可能的影响机制。方法不同浓度rhIGF-1刺激体外培养的MC3T3-E1,用噻唑蓝(MTT)法测定细胞增殖能力。结果一定浓度... 目的观察胰岛素样生长因子-1(IGF-1)对体外培养的小鼠前成骨样MC3T3-E1细胞增殖及I型胶原蛋白合成的影响,探讨IGF-1对骨代谢可能的影响机制。方法不同浓度rhIGF-1刺激体外培养的MC3T3-E1,用噻唑蓝(MTT)法测定细胞增殖能力。结果一定浓度IGF-1能明显增加成骨细胞数量(P<0.05),在1 ng/mL～100 ng/mL这种作用与IGF-1的浓度呈正相关;经rhIGF-1的刺激,成骨细胞I型胶原蛋白的表达明显高于对照组(P<0.05);半定量RT-PCR显示在rhIGF-1干预48h后,I型胶原蛋白mRNA表达较对照组明显增加。结论IGF-1对MC3T3-E1细胞有明显的促增殖作用,在0.1 ng/mL～100 ng/mL之间呈浓度依赖性,IGF-1能促进成骨细胞I型胶原蛋白的合成及其mRNA的表达。 展开更多

关键词 胰岛素样生长因子-1 mc3T3-e1成骨细胞 增殖 I型胶原蛋白

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