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丁酸钠对脂多糖诱导的奶牛乳腺上皮细胞系炎性损伤的修复作用 被引量：5
1
作者 李林 宫彬彬 +4 位作者 许长锋 曹萌 李建嫄 赵梅 唐伟斌 《动物营养学报》 CAS CSCD 北大核心 2022年第2期1276-1284,共9页
本研究拟通过分析丁酸钠对脂多糖(LPS)诱导的奶牛乳腺上皮细胞系(MAC-T细胞)炎性损伤的修复作用,进一步从体外角度阐述丁酸钠对奶牛乳腺健康的调控机制。在MAC-T细胞中添加不同浓度(0、1、10、100、1 000、10 000 ng/mL)的LPS,检测细胞... 本研究拟通过分析丁酸钠对脂多糖(LPS)诱导的奶牛乳腺上皮细胞系(MAC-T细胞)炎性损伤的修复作用,进一步从体外角度阐述丁酸钠对奶牛乳腺健康的调控机制。在MAC-T细胞中添加不同浓度(0、1、10、100、1 000、10 000 ng/mL)的LPS,检测细胞活力,以确定LPS的适宜浓度,建立细胞氧化损伤模型;并进一步在MAC-T细胞中添加不同浓度(0、2、4、8、16、32μmol/L)的丁酸钠,检测细胞凋亡率,以确定丁酸钠的适宜浓度。最终选用1 000 ng/mL LPS和16μmol/L丁酸钠用于本试验。试验分为3组,分别为对照组、LPS处理组和LPS+丁酸钠处理组,分别对其细胞形态、氧化应激指标及凋亡蛋白mRNA表达水平进行检测。结果表明:1)对照组MAC-T细胞呈扁平的无规则形态,贴壁状态良好;而LPS处理组MAC-T细胞核固缩、破裂,并出现大面积死亡脱落现象;LPS+丁酸钠处理组MAC-T细胞边缘清楚,胞内颗粒较少,死亡脱落现象明显减少。2)与对照组相比,LPS处理组MAC-T细胞中超氧化物歧化酶(SOD)活性和总抗氧化力(T-AOC)显著降低(P<0.05),丙二醛(MDA)含量显著升高(P<0.05);与LPS处理组相比,LPS+丁酸钠处理组MAC-T细胞中SOD活性和T-AOC含量显著升高(P<0.05),MDA含量显著降低(P<0.05)。3)与对照组相比,LPS处理组MAC-T细胞中半胱天冬蛋白酶-3(Caspase-3)、半胱天冬蛋白酶-9(Caspase-9)、B细胞淋巴瘤/白血病-2相关X蛋白(Bax) mRNA表达水平显著或极显著升高(P <0.05或P <0.01),B细胞淋巴瘤/白血病-2(Bcl-2)mRNA表达水平极显著降低(P<0.01);与LPS处理组相比,LPS+丁酸钠处理组MAC-T细胞中Caspase-3、Caspase-9 mRNA表达水平显著下降(P<0.05),Bcl-2 mRNA表达水平显著升高(P<0.05)。由此可见,丁酸钠对LPS造成的MAC-T细胞氧化损伤起到了一定的修复作用,减少了细胞凋亡的发生。 展开更多
关键词 丁酸钠 LPS mac-T 氧化应激 细胞凋亡
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PRNP过表达MAC-T细胞的构建及其对细胞黏附侵袭的影响
2
作者 张钊 颜丽娇 +7 位作者 杨宇泽 苟惠天 万学瑞 马小军 丁巨财 彭婕 王川 张小丽 《甘肃农业大学学报》 CAS CSCD 2023年第4期37-45,共9页
【目的】研究PRNP过表达对牛乳腺上皮细胞系(MAC-T)黏附、侵袭的影响。【方法】利用慢病毒载体技术构建PRNP慢病毒过表达载体并建立稳定PRNP过表达MAC-T细胞系;应用实时荧光定量PCR和Western Blot对过表达MAC-T细胞系进行验证;随后用MRS... 【目的】研究PRNP过表达对牛乳腺上皮细胞系(MAC-T)黏附、侵袭的影响。【方法】利用慢病毒载体技术构建PRNP慢病毒过表达载体并建立稳定PRNP过表达MAC-T细胞系;应用实时荧光定量PCR和Western Blot对过表达MAC-T细胞系进行验证;随后用MRSA感染MAC-T细胞和PRNP过表达MAC-T细胞系,比较PRNP过表达MAC-T细胞和野生型MAC-T细胞在黏附侵袭生理特性的差异。【结果】成功构建pLVML-PRNP慢病毒表达载体和稳定的PRNP+-MAC-T细胞系;黏附侵袭结果表明MRSA对过表达PRNP的MAC-T细胞黏附侵袭能力显著低于对照组,值得注意的是,MRSA在感染PRNP+-MAC-T细胞后的6 h内,未发生明显的侵袭现象,直至感染6 h后其侵袭率才明显上升,8 h达到峰值,但是仍显著低于MRSA对MAC-T细胞的侵袭率。【结论】PRNP过表达能够降低MRSA对细胞的黏附侵袭能力。 展开更多
关键词 慢病毒载体 PRNP mac-T细胞 MRSA
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植物雌激素大豆黄酮对牛乳腺上皮细胞增殖及细胞周期的影响 被引量：3
3
作者 谢娜娜 闫书平 +2 位作者 张崇昊 曹西月 张源淑 《动物营养学报》 CAS CSCD 北大核心 2022年第4期2645-2653,共9页
本试验采用大豆黄酮(DZ)作用于牛乳腺上皮MAC-T细胞,探讨其通过上调雌激素受体β(ERβ)表达对细胞体外增殖及细胞周期的影响,为DZ改善乳腺发育提供依据。采用不同浓度DZ(0~160.0μmol/L)处理MAC-T细胞24 h,通过检测细胞活力确定DZ作用浓... 本试验采用大豆黄酮(DZ)作用于牛乳腺上皮MAC-T细胞,探讨其通过上调雌激素受体β(ERβ)表达对细胞体外增殖及细胞周期的影响,为DZ改善乳腺发育提供依据。采用不同浓度DZ(0~160.0μmol/L)处理MAC-T细胞24 h,通过检测细胞活力确定DZ作用浓度;然后采用不同浓度DZ(0、2.5、5.0和10.0μmol/L)处理MAC-T细胞12、24、36和48 h,通过检测细胞活力确定DZ作用时间;再用生理剂量的雌二醇(E2)作为阳性对照,对各处理细胞进行细胞计数,采用Western blot分析细胞内细胞周期相关蛋白、ERβ蛋白相对表达量,并用流式细胞技术分析细胞周期变化。结果表明:1)与对照组相比,2.5和5.0μmol/L DZ处理细胞均能提高MAC-T细胞活力,其中5.0μmol/L DZ处理显著提高细胞活力(P<0.05);而在浓度高于10.0μmol/L后,细胞活力均有下降,因此确定了DZ作用的低、中和高浓度分别为2.5、5.0和10.0μmol/L;而与对照组相比,处理12 h后,5.0μmol/L DZ处理使得细胞活力显著提高(P<0.05),其他2个浓度处理对细胞活力无显著影响(P>0.05),因此确认DZ作用时间为12 h。2)与对照组相比,5.0μmol/L DZ处理使得细胞数量显著增加(P<0.05);2.5μmol/L DZ处理使得细胞数量有所增加,但差异不显著(P>0.05);E2处理使得细胞数量略低于各DZ处理,但差异不显著(P>0.05)。3)Western blot结果显示,与对照组相比,3个浓度DZ处理均可上调增殖细胞核抗原(PCNA)、细胞周期蛋白D1(CyclinD1)、细胞周期蛋白D3(CyclinD3)和ERβ的蛋白相对表达量,其中5.0μmol/L DZ处理显著上调PCNA、CyclinD1和ERβ的蛋白相对表达量(P<0.05)。4)与对照组相比,5.0μmol/L DZ处理极显著提高了G2-M期细胞占比(P<0.01),同时极显著提高了S期细胞占比(P<0.01);E2处理与5.0μmol/L DZ处理趋势相同,均极显著提高了G2-M期细胞占比(P<0.01),同时提高了S期细胞占比(P>0.05)。结果提示,植物雌激素DZ具有类雌激素样作用,可通过上调ERβ蛋白表达,提高G2-M� 展开更多
关键词 mac-T细胞 植物雌激素 大豆黄酮 细胞增殖 细胞周期
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槲皮素通过Nrf2信号通路缓解LPS诱导的牛乳腺上皮细胞氧化应激
4
作者 任晓丽 皇甫和平 +4 位作者 米俊宪 宋予震 靳双星 王俊东 石冬梅 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2023年第12期2590-2596,共7页
旨在探究槲皮素(quercetin,QU)通过Nrf2信号通路对脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)诱导的牛乳腺上皮细胞氧化应激的作用及其机制。以牛乳腺上皮细胞系MAC-T细胞为研究对象,用2.5、5.0和10.0μmol/L QU预处理MAC-T细胞12 h后加入1 mg/L ... 旨在探究槲皮素(quercetin,QU)通过Nrf2信号通路对脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)诱导的牛乳腺上皮细胞氧化应激的作用及其机制。以牛乳腺上皮细胞系MAC-T细胞为研究对象,用2.5、5.0和10.0μmol/L QU预处理MAC-T细胞12 h后加入1 mg/L LPS处理12 h后;利用试剂盒分别检测LDH活性、活性氧(reactive oxygen species,ROS)、脂质过氧化物丙二醛(malondialdehyde,MDA)的含量、超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)、谷胱甘肽过氧物酶(glutathione peroxidase,GSH-Px)、过氧化氢酶(catalase,CAT)活性。Western blot和RT-qPCR方法分别检测核转录因子Nrf2相关因子(nuclear factor E2-related factor,Nrf2)、血红素加氧酶1(heme oxygenase-1,HO-1)和醌氧化还原酶NADH1(NADPH quinone oxidoreductase 1,NQO1)基因和蛋白表达变化。结果显示,与对照组相比,1 mg/L LPS组中ROS和MDA的含量显著升高(P<0.05),SOD、GSH-Px和CAT活性显著降低(P<0.05),Nrf2、HO-1和NQO1基因和蛋白相对表达水平显著降低(P<0.05);与LPS组相比,QU预处理能显著降低ROS和MDA的含量(P<0.05),而SOD和GSH-px活性显著升高,且呈剂量依赖性;此外,QU+LPS组能显著上调MAC-T细胞内Nrf2、HO-1和NQO1基因和蛋白相对表达水平(P<0.05)。结果表明,QU通过激活Nrf2信号通路缓解LPS诱导的牛乳腺上皮细胞的氧化应激。 展开更多
关键词 槲皮素 LPS mac-T细胞 氧化应激 Nrf2信号通路
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圣草酚促进miR-128缓解金黄色葡萄球菌引起的奶牛乳腺上皮细胞炎性损伤 被引量：3
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作者 陈鹏举 史迎迎 +1 位作者 赵庆枫 张光辉 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2020年第10期2045-2051,共7页
奶牛乳腺炎是危害奶牛养殖业的常发病之一,可由多种因素引起,其中金黄色葡萄球菌(金葡菌)是常见的致病菌。圣草酚是一种多酚黄酮类化合物,参与炎症等多种疾病的发生发展。MicroRNAs(miRNAs)是一类非编码RNA,参与多种疾病的发生发展。本... 奶牛乳腺炎是危害奶牛养殖业的常发病之一,可由多种因素引起,其中金黄色葡萄球菌(金葡菌)是常见的致病菌。圣草酚是一种多酚黄酮类化合物,参与炎症等多种疾病的发生发展。MicroRNAs(miRNAs)是一类非编码RNA,参与多种疾病的发生发展。本试验探讨圣草酚与miR-128在金葡菌诱导的MAC-T细胞炎症中的作用机理,首先通过RT-qPCR分析显示,金葡菌抑制miR-128的表达,圣草酚促进miR-128的表达;miR-128显著降低金葡菌诱导的TNF-α、IL-1β和IL-6的表达水平,圣草酚增强其对炎性因子的抑制作用;最后通过双荧光素酶试验证实髓样分化因子(MyD88)是miR-128的靶基因。由于miR-128是通过作用于靶基因进而发挥作用,通过敲低MyD88,结果显示其显著降低TNF-α、IL-1β和IL-6蛋白表达水平,且圣草酚进一步增强对炎性因子在蛋白水平的抑制作用。结果表明,圣草酚通过增强miR-128缓解金葡菌所引起的MAC-T细胞的炎性损伤。 展开更多
关键词 圣草酚 miR-128 mac-T细胞 金黄色葡萄球菌 炎症
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维生素E对H_(2)O_(2)诱导的奶牛乳腺上皮细胞氧化损伤及紧密连接相关基因表达的影响 被引量：2
6
作者 张雅 白鸽 +4 位作者 王涛 秦贵信 孙喆 张学峰 甄玉国 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2021年第5期1558-1565,共8页
试验通过研究维生素E(VE)对H_(2)O_(2)诱导的奶牛乳腺上皮细胞(MAC-T cells)氧化损伤及紧密连接相关基因表达的影响,旨在揭示维生素E对缓解奶牛乳腺细胞氧化应激的作用。试验设对照组(完全培养基处理组)、H_(2)O_(2)组和H_(2)O_(2)+VE... 试验通过研究维生素E(VE)对H_(2)O_(2)诱导的奶牛乳腺上皮细胞(MAC-T cells)氧化损伤及紧密连接相关基因表达的影响,旨在揭示维生素E对缓解奶牛乳腺细胞氧化应激的作用。试验设对照组(完全培养基处理组)、H_(2)O_(2)组和H_(2)O_(2)+VE组。利用MTT法检测奶牛乳腺细胞存活率,比色法检测奶牛乳腺细胞培养液中超氧化物歧化酶(SOD)和过氧化氢酶(CAT)活性、丙二醛(MDA)和活性氧(ROS)含量;通过实时荧光定量PCR检测紧密连接基因ZO-1、occludin、claudin-1的相对表达量。结果显示,与对照组相比,H_(2)O_(2)组的奶牛乳腺上皮细胞存活率显著下降(P<0.05),ROS和MDA含量显著增加(P<0.05),SOD和CAT活性显著下降(P<0.05);与H_(2)O_(2)组相比,H_(2)O_(2)+20μmol/L VE组的细胞存活率显著上升(P<0.05),ROS和MDA含量显著下降(P<0.05),SOD和CAT活性显著增加(P<0.05)。此外,与对照组相比,H_(2)O_(2)组极显著抑制了紧密连接基因的相对表达量(P<0.01);而与H_(2)O_(2)组相比,添加维生素E极显著缓解了H_(2)O_(2)对紧密连接基因相对表达的抑制作用(P<0.01)。本研究结果证明,维生素E不仅能够减轻H_(2)O_(2)诱导的奶牛乳腺上皮细胞氧化损伤,还能缓解H_(2)O_(2)对紧密连接基因相对表达的抑制作用。 展开更多
关键词 维生素E 奶牛 氧化应激 乳腺上皮细胞 紧密连接
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FoxO3a基因缺失致小鼠脾脏进行性慢性炎性反应的观察 被引量：1
7
作者 邱红 陈晨 +2 位作者 王若立 罗红 赵宝霞 《中国生物制品学杂志》 CAS CSCD 2012年第12期1650-1652,1657,共4页
目的观察FoxO3a基因缺失致小鼠脾脏进行性慢性炎性反应。方法分别于16周、24周和12个月称取FoxO3a基因敲除小鼠和对照小鼠体重;于16、24和38周处死各组小鼠,取脾脏,肉眼观察脾脏变化,并制备脾细胞悬液,进行细胞计数,同时取各组小鼠卵巢... 目的观察FoxO3a基因缺失致小鼠脾脏进行性慢性炎性反应。方法分别于16周、24周和12个月称取FoxO3a基因敲除小鼠和对照小鼠体重;于16、24和38周处死各组小鼠,取脾脏,肉眼观察脾脏变化,并制备脾细胞悬液,进行细胞计数,同时取各组小鼠卵巢、肺及皮下等组织,观察其炎性变化。流式细胞术检测24周的FoxO3a基因敲除小鼠和对照小鼠脾细胞中T、B淋巴细胞和Mac-1+细胞数量及百分率;Real-time PCR检测脾细胞中炎性细胞因子S100A8和S100A9基因mRNA的表达水平。结果与对照小鼠相比,FoxO3a基因敲除小鼠脾脏明显肥大,且随年龄增加更加显著,卵巢、肺及皮下等组织内可见大量炎性细胞浸润,脾细胞数明显升高;基因敲除组老年小鼠的体重明显低于对照小鼠;FoxO3a基因敲除小鼠的脾细胞中T、B淋巴细胞数增加明显,但所占脾细胞的百分率无明显增加,Mac-1+细胞数和百分率均明显增加;S100A8和S100A9基因mRNA的表达水平明显高于对照小鼠。结论 FoxO3a基因缺失致小鼠脾脏进行性慢性炎性反应。 展开更多
关键词 转录调节因子 FoxO3a基因 mac-1+细胞 炎性反应 免疫调节
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