敲降低密度脂蛋白受体相关蛋白表达对肝癌血管异常化的影响及其机制

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作者 武强 詹琳琳 +9 位作者 王宇 贺钰超 陈璐 陈子叶 李广涛 刘东明 包旭 刘潇濛 郭华 宋天强 《中华肿瘤杂志》 CAS CSCD 北大核心 2024年第5期399-408,共10页

目的探讨低密度脂蛋白受体相关蛋白(LDLR)表达对肝癌血管异常化的影响及其机制。方法从Oncomine癌症基因芯片数据库提取87例肝癌组织的基因转录组信息,分析肝癌组织中LDLR的表达水平与癌胚抗原(CEA)和CD31表达水平的相关性。采用短发卡... 目的探讨低密度脂蛋白受体相关蛋白(LDLR)表达对肝癌血管异常化的影响及其机制。方法从Oncomine癌症基因芯片数据库提取87例肝癌组织的基因转录组信息,分析肝癌组织中LDLR的表达水平与癌胚抗原(CEA)和CD31表达水平的相关性。采用短发卡RNA靶基因慢病毒转染的方法,构建LDLR敲降的MHCC-97H和HLE肝癌细胞。通过转录组测序、实时荧光定量聚合酶链反应、蛋白免疫印迹法检测LDLR敲降后肝癌细胞的差异基因及其表达水平变化。通过富集分析明确LDLR参与的基因相关信号通路。通过对肝癌细胞条件培养基中CEA含量的检测评估LDLR对CEA的影响。采用血管生成实验检测LDLR对人脐静脉内皮细胞血管生成能力的影响,以及CEA在LDLR调控血管生成过程中的作用。收集2019年1月至2022年12月于天津医科大学肿瘤医院手术切除的肝癌组织标本176例,采用免疫组织化学染色检测176例肝癌组织中LDLR及146例肝癌组织中CEA和CD31的表达水平,分析肝癌组织中LDLR的表达水平与肝癌组织中CEA和CD31的表达水平、血清CEA和丙氨酸氨基转移酶(ALT)水平的相关性。结果Oncomine数据库分析显示,发生门静脉转移的肝癌患者肝癌组织中LDLR和CEA的表达呈负相关(r=-0.64,P=0.001),而CEA和CD31的表达呈正相关(r=0.46,P=0.010);转录组测序结果显示,LDLR敲降组与对照组MHCC-97H细胞的差异表达基因共有1032个,其中517个基因表达上调,515个基因表达下调。CEA相关细胞黏附分子5(CEACAM5)在LDLR敲降组细胞中上调明显。基因本体论功能富集分析显示,差异基因最明显富集在血管生成的功能上。京都基因与基因组百科全书信号通路富集分析显示,涉及的相关通路主要包括细胞粘着斑、细胞外基质受体相互作用等。LDLR敲降组条件培养基中CEA含量为43.75±8.43,高于对照组(1.15±0.14,P<0.001)。血管生成实验结果显示,在5 h,用LDLR敲降组MHCC-97H细胞� 展开更多

关键词 肝细胞癌 低密度脂蛋白受体相关蛋白 癌胚抗原 血管生成

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低密度脂蛋白受体相关蛋白11在结直肠癌组织中的表达及其对SW480细胞增殖与凋亡的影响

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作者 李建凯 朱小辉 +4 位作者 何佳欣 杨晨晖 贾彭松 王嘉毅 李咏 《中国肿瘤生物治疗杂志》 CAS CSCD 北大核心 2023年第9期771-776,共6页

目的:探讨低密度脂蛋白受体相关蛋白11(LRP11)在结直肠癌(CRC)组织中的表达及其对结肠癌SW480细胞增殖与凋亡的影响。方法:利用生物信息学方法分析TCGA数据库中LRP11在CRC组织中的表达水平。用慢病毒感染技术分别将sh-LRP11及sh-NC质粒... 目的:探讨低密度脂蛋白受体相关蛋白11(LRP11)在结直肠癌(CRC)组织中的表达及其对结肠癌SW480细胞增殖与凋亡的影响。方法:利用生物信息学方法分析TCGA数据库中LRP11在CRC组织中的表达水平。用慢病毒感染技术分别将sh-LRP11及sh-NC质粒转染至SW480细胞,采用qPCR、WB法检测感染后各组细胞中LRP11的mRNA和蛋白的表达,CCK-8法、流式细胞术分别检测细胞的增殖活力、凋亡率及细胞周期分布情况,WB法检测SW480细胞中cyclin D1、BAX、Bcl-2、β-catenin、活化β-catenin等蛋白的表达水平。结果:TCGA数据库数据分析显示,LRP11 mRNA在CRC组织中的表达水平显著高于正常组织(P<0.05)。与sh-NC组比较,sh-LRP11组SW480细胞的增殖活力明显降低、细胞凋亡率显著升高(均P<0.01),细胞中BAX表达显著升高、Bcl-2表达显著降低(均P<0.01);G0/G1期细胞增多、S期细胞明显减少(均P<0.01),cyclin D1的蛋白表达显著降低(P<0.01);Wnt/β-catenin信号通路中β-catenin和活化β-catenin的蛋白表达均显著下降(均P<0.01)。结论:LRP11 mRNA在CRC组织中呈高表达,干扰LRP11表达可抑制结肠癌SW480细胞增殖并促进其凋亡,为CRC提供了一种潜在的治疗靶点。 展开更多

关键词 低密度脂蛋白受体相关蛋白11 结直肠癌 SW480细胞 增殖 凋亡 WNT/Β-CATENIN信号通路

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血浆sLRP-1水平对急性冠状动脉综合征患者预后的预测价值研究 被引量：1

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作者 许皓莉 《罕少疾病杂志》 2024年第1期57-59,共3页

目的研究血浆可溶性低密度脂蛋白受体相关蛋白-1(sLRP-1)判断急性冠状动脉综合征患者预后的价值。方法通过回顾性分析法选择我院2020年8月-2022年5月收住的急性冠状动脉综合征患者157例进入试验,统计并整理所有患者的临床资料,对比不同... 目的研究血浆可溶性低密度脂蛋白受体相关蛋白-1(sLRP-1)判断急性冠状动脉综合征患者预后的价值。方法通过回顾性分析法选择我院2020年8月-2022年5月收住的急性冠状动脉综合征患者157例进入试验,统计并整理所有患者的临床资料,对比不同冠脉狭窄程度患者的sLRP-1水平,同时比较不同sLRP-1水平患者的不良心血管事件的发生率,观察是否发生不良心血管事件患者的临床资料,将有差异项目通过Logistic回归方程计算,分析影响患者预后的风险因素。结果轻度组sLRP-1水平低于中度、重度组(P<0.05)。两组在年龄、患病至就诊时间、sLRP-1、射血分数(LVEF)、低密度脂蛋白(LDL-C)、空腹血糖上存在显著差别(P<0.05),经Logistics回归方程计算,发现上述指标均成为影响患者预后的风险因素。sLRP-1>0.8mg/L组不良心血管事件发生率高于<0.40mg/L组、0.40-0.8mg/L组(P<0.05)。结论sLRP-1成为判断患者预后的重要指标,能够准确评估患者冠脉狭窄程度,预测不良心血管事件发生的风险,值得推广。 展开更多

关键词 急性冠状动脉综合征 可溶性低密度脂蛋白受体相关蛋白-1 预测价值 预后

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光动力治疗宫颈低级别上皮内瘤变的疗效观察 被引量：4

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作者 高娟 王霞 +1 位作者 夏亚芳 华彩凤 《实用临床医药杂志》 CAS 2021年第23期106-109,共4页

目的观察光动力疗法(PDT)治疗低级别宫颈鳞状上皮内病变(LSIL)的效果及对血清低密度脂蛋白受体相关蛋白-6(LRP-6)、透明质酸(HA)表达的影响。方法研究纳入90例LSIL患者,采用随机数字表法分为2组,每组45例。对照组采用CO;激光治疗,观察... 目的观察光动力疗法(PDT)治疗低级别宫颈鳞状上皮内病变(LSIL)的效果及对血清低密度脂蛋白受体相关蛋白-6(LRP-6)、透明质酸(HA)表达的影响。方法研究纳入90例LSIL患者,采用随机数字表法分为2组,每组45例。对照组采用CO;激光治疗,观察组采用PDT治疗,每月治疗1次,治疗3次后观察6个月。比较2组治疗效果、血清LRP-6和HA水平、不良反应及复发情况。结果观察组治疗3个月时整体治疗效果优于对照组,且治疗总有效率高于对照组(P<0.05);治疗结束时,2组血清LRP-6、HA水平均较治疗前降低,且观察组低于对照组,差异有统计学意义(P<0.05);2组治疗期间不良反应发生率比较,差异无统计学意义(P>0.05);观察组治疗结束随访6个月时的复发率低于对照组,但差异无统计学意义(P>0.05)。结论LSIL患者采用PDT治疗有较好的临床效果,并可调节患者血清LRP、HA水平。 展开更多

关键词 宫颈鳞状上皮内病变 光动力疗法 CO 激光 疗效 低密度脂蛋白受体相关蛋白-6 透明质酸 不良反应

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银杏叶片对遗忘型轻度认知功能障碍患者的临床疗效及对可溶性糖基化终末产物受体、可溶性低密度脂蛋白受体相关蛋白1的影响 被引量：4

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作者 顾卫霞 徐俊 +3 位作者 庄志清 叶兴荣 王谟兰 朱军 《实用临床医药杂志》 CAS 2017年第24期27-29,33,共4页

目的探讨银杏叶片对遗忘型轻度认知功能障碍(a MCI)患者的临床疗效及对可溶性糖基化终末产物受体(sRAGE)和可溶性低密度脂蛋白受体相关蛋白1(s LRP-1)的影响。方法将124例a MCI患者分为观察组62例与对照组62例,对照组口服尼莫地平片,观... 目的探讨银杏叶片对遗忘型轻度认知功能障碍(a MCI)患者的临床疗效及对可溶性糖基化终末产物受体(sRAGE)和可溶性低密度脂蛋白受体相关蛋白1(s LRP-1)的影响。方法将124例a MCI患者分为观察组62例与对照组62例,对照组口服尼莫地平片,观察组在对照组基础上联合银杏叶片。比较2组患者治疗前后Mo CA评分、sRAGE和s LRP-1变化及不良反应发生情况。结果 2组治疗后Mo CA评分均提高,且观察组治疗后提高更显著(P<0.05)。2组患者治疗前血浆sRAGE、s LRP-1水平比较无显著差异(P>0.05);2组患者治疗后血浆sRAGE显著升高而s LRP-1显著降低(P<0.05);观察组患者治疗后血浆sRAGE显著高于对照组,而s LRP-1显著低于对照组(P<0.05)。结论银杏叶片对a MCI患者的临床疗效明显,可升高血浆sRAGE,降低s LRP-1。 展开更多

关键词 银杏叶片 遗忘型轻度认知功能障碍 可溶性糖基化终末产物受体 可溶性低密度脂蛋白受体相关蛋白1

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丝氨酸蛋白酶抑制剂通过细胞内吞作用参与调控细胞信号通路的机制的研究现状 被引量：4

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作者 陈双双 武靖 +3 位作者 王愉靖 张明秀 杨瑞 李雪连 《中国临床药理学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2021年第22期3189-3192,3203,共5页

丝氨酸蛋白酶抑制剂(SerpinE2)是丝氨酸蛋白酶抑制剂超家族中的一员,由多种细胞分泌,可作用于多种蛋白酶、蛋白激酶及参与调控细胞信号通路。SerpinE2在血液凝结、免疫反应、纤溶、血管生成、炎症和肿瘤等一系列生理病理过程中发挥着重... 丝氨酸蛋白酶抑制剂(SerpinE2)是丝氨酸蛋白酶抑制剂超家族中的一员,由多种细胞分泌,可作用于多种蛋白酶、蛋白激酶及参与调控细胞信号通路。SerpinE2在血液凝结、免疫反应、纤溶、血管生成、炎症和肿瘤等一系列生理病理过程中发挥着重要作用。本文主要介绍SerpinE2通过细胞内吞作用参与调控多种细胞信号通路的机制及其最新研究进展。 展开更多

关键词 蛋白酶连结蛋白-1 细胞内吞 信号通路 低密度脂蛋白受体相关蛋白1 硫酸乙酰肝素蛋白聚糖

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院内制剂降脂胶囊治疗颈动脉粥样硬化斑块患者的疗效及对血液流变学的影响分析

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作者 姜雄 陈军 +2 位作者 王海燕 苟明琴 罗均 《中国实用医药》 2024年第9期113-116,共4页

目的分析遵义市中医院院内制剂降脂胶囊治疗颈动脉粥样硬化斑块患者的疗效及对血液流变学的影响。方法选取252例颈动脉粥样硬化斑块患者,按随机数字表法分为普通组与自制组,每组126例。普通组常规给予阿托伐他汀治疗,自制组在普通组用... 目的分析遵义市中医院院内制剂降脂胶囊治疗颈动脉粥样硬化斑块患者的疗效及对血液流变学的影响。方法选取252例颈动脉粥样硬化斑块患者,按随机数字表法分为普通组与自制组,每组126例。普通组常规给予阿托伐他汀治疗,自制组在普通组用药基础上加用院内制剂降脂胶囊开展治疗。比较两组颈动脉斑块情况[斑块体积(PV)、颈动脉内膜-中层厚度(IMT)及Crouse积分]、血脂指标[总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)及高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)]、实验室指标[超敏C反应蛋白(hs-CRP)、低密度脂蛋白受体相关蛋白-6(LRP-6)]及血液流变学指标。结果自制组用药后PV(45.33±1.74)mm^(3)、IMT(1.08±0.13)mm及Crouse积分(4.72±0.36)分均低于普通组的(57.26±2.45)mm^(3)、(1.52±0.19)mm、(5.34±0.42)分(P<0.05)。自制组用药后TC(3.17±0.42)mmol/L、TG(1.24±0.27)mmol/L及LDL-C(1.39±0.20)mmol/L均低于普通组的(4.01±0.76)、(1.60±0.29)、(2.03±0.35)mmol/L,HDL-C(1.73±0.25)mmol/L显著高于普通组的(1.32±0.13)mmol/L(P<0.05)。自制组用药后hs-CRP水平(4.13±0.52)mg/L低于普通组的(7.58±1.06)mg/L,LRP-6水平(15.67±2.34)ng/ml高于普通组的(12.33±2.01)ng/ml(P<0.05)。自制组用药后全血高切粘度(4.72±0.83)mPa·s、全血低切粘度(9.02±1.71)mPa·s及血浆粘度(1.52±0.18)mPa·s均低于普通组的(6.12±1.81)、(10.31±1.48)、(1.73±0.16)mPa·s(P<0.05)。结论院内制剂降脂胶囊用于颈动脉粥样硬化斑块患者临床治疗中具有确切疗效,可显著改善其血液流变学。 展开更多

关键词 院内制剂 降脂胶囊 颈动脉粥样硬化斑块 血液流变学 血脂代谢 低密度脂蛋白受体相关蛋白-6

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微小RNA-202可通过转录后下调低密度脂蛋白受体相关蛋白6的表达抑制人肝癌细胞增殖 被引量：2

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作者 张毅 钟自彪 +2 位作者 叶启发 陈根 严碧波 《中华实验外科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2015年第9期2154-2156,共3页

目的 观察微小RNA（miRNA,miR）-202是否通过转录后下调癌基因低密度脂蛋白受体相关蛋白6（LRP6）的表达而抑制人肝癌细胞（HCC）的增殖.方法 培养HCC细胞株QGY-7703、HepG2;采用实时定量聚合酶链反应（Real-time PCR）检测细胞周期蛋白... 目的 观察微小RNA（miRNA,miR）-202是否通过转录后下调癌基因低密度脂蛋白受体相关蛋白6（LRP6）的表达而抑制人肝癌细胞（HCC）的增殖.方法 培养HCC细胞株QGY-7703、HepG2;采用实时定量聚合酶链反应（Real-time PCR）检测细胞周期蛋白（Cyclin） D1、MYC和LEF1 mRNA的表达;Western blot检测LRP6、Cyclin D1、MYC、β-连环蛋白（β-catenin）和磷酸化Rb蛋白的表达;通过转染小干扰RNA （siRNA）抑制肝细胞癌（HCC）细胞LRP6的表达;构建pGL3-LRP6-3＇端非编码区域（3＇-UTR）-荧光素酶质粒转染HCC细胞作荧光素酶检测;采用噻唑蓝（MTT）法、克隆形成实验及贴壁不依赖性生长能力测定法检测HCC细胞的增殖能力.结果 在QGY-7703、HepG2两种细胞株均显示,过表达miR-202可以下调LRP6的表达,而抑制miR-202可以上调LRP6的表达（P＜0.05）;miR-202的过表达可以降低pGL3-LRP6-3＇-UTR-荧光素酶报告基因中荧光素酶的活性,而抑制miR-202则可以增加其荧光素酶的活性（P＜0.05）;miR-202可以显著下调受Wnt/β-catenin调控的下游基因Cyclin D1、MYC和LEF1的表达,抑制miR-202则可以显著上调这些基因的表达（P＜0.05）;在miR-202过表达的HCC细胞,Cyclin D1、MYC、LEF1和磷酸化Rb蛋白的表达也显著下调,而抑制miR-202的表达,则可以上调这些蛋白的表达（P＜0.05）;miR-202的表达与LRP6蛋白的表达水平呈显著负相关（r =0.575,P＜0.05）;通过MTT法和克隆形成实验结果表明,沉默miR-202抑制组或阴性对照转染组细胞的LRP6,可以降低HCC细胞的生长速度和增殖（P＜0.05）;贴壁不依赖性生长能力测定也显示,LRP6抑制对miR-202抑制组HCC细胞的增殖具有显著抑制作用（P＜0.05）.结论 在HCC细胞,LRP6mRNA是miR-202的直接作用靶点;在miR-202发挥抑制HCC细胞增殖的作用中,LRP6抑制是必不可少的;LRP6可以作为HCC的潜在治疗靶点. 展开更多

关键词 癌 肝细胞 低密度脂蛋白受体相关蛋白6 微小RNA-202 增殖

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血浆hsa-miR-19a-3p与急性冠脉综合征相关性研究及其生物信息学分析 被引量：2

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作者 黄浩 陈文江 +4 位作者 陈国柱 秦芳 刘长召 王玲 华晓芳 《局解手术学杂志》 2019年第4期267-274,共8页

目的分析hsa-miR-19a-3p与急性冠状动脉综合征(ACS)的相关性,并探讨其可能机制。方法选择2014年3月至2015年9月湖北省恩施土家族苗族自治州中心医院心血管病中心收治的118例冠心病患者作为研究对象,并按照冠心病分类分为STEMI组(34例)、... 目的分析hsa-miR-19a-3p与急性冠状动脉综合征(ACS)的相关性,并探讨其可能机制。方法选择2014年3月至2015年9月湖北省恩施土家族苗族自治州中心医院心血管病中心收治的118例冠心病患者作为研究对象,并按照冠心病分类分为STEMI组(34例)、NSTEMI组(25例)、UAP组(22例)和SCAD组(37例),采用实时荧光定量PCR检测血浆hsa-miR-19a-3p的表达,采用生物信息学分析其可能靶基因、生物信息学功能和可能结合非编码RNA(如miRNA、lncRNA、circRNA等);采用酶联免疫吸附法(ELISA)检测低密度脂蛋白受体相关蛋白2(LRP2)的表达。结果 STEMI组和NSTEMI组血浆hsa-miR-19a-3p水平较UAP组和SCAD组明显升高,差异具有统计学意义(P <0. 05); hsa-miR-19a-3p的靶基因可能为LRP2,其生物信息功能主要与脂蛋白生物合成过程、脂肪因子信号通路、白介素信号通路、血小板源生长因子信号通路、缺氧诱导因子激活缺氧反应、血管生成、丝/苏氨酸激酶信号通路、丝裂素活化蛋白激酶信号通路、转化生长因子β信号通路和趋化因子信号通路等有关; hsa-miR-557、hsa-miR-507、RP11-70C1. 1、CTD-2147F2. 2、C9orf106、C1orf198_hsa-circRNA8985、FGFR3_hsa-circRNA5885、CAMK2N1_hsa-circRNA8340、TGFBR3_hsa-circRNA859和BCL3_hsa-circRNA4124等可能为其"海绵";血浆LRP2水平,STEMI组(1 511±212. 9) ng/m L、NSTEMI组(1 436±400. 0) ng/m L和UAP组(587. 5±176. 0) ng/m L较SCAD组(367. 4±47. 69) ng/m L明显升高,差异具有统计学意义(P <0. 05);血浆hsa-miR-19a-3p与LRP2 Pearson相关系数为0. 488 1(95%CI:0. 312 5～0. 631 4,P=0. 000 4)。结论 hsa-miR-19a-3p与ACS密切相关,通过调控hsa-miR-19a-3p的靶基因LRP2而导致ACS的发生,可能与脂质代谢密切相关。 展开更多

关键词 hsa-miR-19a-3p 急性冠状动脉综合征 低密度脂蛋白受体相关蛋白2 脂质代谢 生物信息学

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缺氧对滋养细胞HTR-8/SVneo自噬的影响及机制研究

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作者 彭艳 马开东 冯小玲 《中国优生与遗传杂志》 2023年第10期1994-1999,共6页

目的 探索缺氧对子痫前期滋养细胞HTR-8/SVneo自噬的影响及可能机制。方法 收集80例子痫前期、50例正常孕妇胎盘组织。选取HTR-8/SVneo(NC组),构建缺氧/复氧(H/R)模型(H/R组),转染pcDNA3.1-低密度脂蛋白受体相关蛋白6(LRP6),并用自噬抑... 目的 探索缺氧对子痫前期滋养细胞HTR-8/SVneo自噬的影响及可能机制。方法 收集80例子痫前期、50例正常孕妇胎盘组织。选取HTR-8/SVneo(NC组),构建缺氧/复氧(H/R)模型(H/R组),转染pcDNA3.1-低密度脂蛋白受体相关蛋白6(LRP6),并用自噬抑制剂Baf-A1、β-catenin抑制剂PKF115-584处理。分为pcDNA3.1-NC组、pcDNA3.1-LRP6组、pcDNA3.1-LRP6+Baf-A1组、pcDNA3.1-LRP6+PKF115-584组。自噬双标腺病毒(mRFP-GFP-LC3)观察自噬流,反转录PCR(RT-PCR)检测LRP6基因mRNA水平,Westernblot检测自噬相关蛋白3I(LC3-I)、自噬相关蛋白3Ⅱ(LC3-Ⅱ)、Beclin1、LRP6、Unc-51-like autophagy activating kinase 1(ULK1)、β-catenin、c-Myc、Rab7及p62蛋白水平,免疫组化检测胎盘组织中LRP6表达。结果 子痫前期孕妇胎盘组织LRP6阳性率、LRP6基因mRNA表达水平低于对照组(P<0.01)。H/R组细胞LRP6基因mRNA、蛋白水平低于NC组(P<0.01)。NC组、pcDNA3.1-LRP6组细胞LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ、Beclin1、ULK1蛋白水平高于H/R组、pcDNA3.1-NC组,p62蛋白水平低于H/R组、pcDNA3.1-NC组(P<0.01),NC组、pcDNA3.1-LRP6组细胞自噬流水平高于H/R组、pcDNA3.1-NC组。pcDNA3.1-LRP6+Baf-A1组、pcDNA3.1-LRP6+PKF115-584组细胞LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ、Beclin1、ULK1蛋白水平低于pcDNA3.1-LRP6组,p62蛋白水平高于pcDNA3.1-LRP6组(P<0.05)。pcDNA3.1-LRP6组、pcDNA3.1-LRP6+PKF115-584组细胞Rab7、c-Myc及β-catenin蛋白水平高于pcDNA3.1-NC组(P<0.05)。结论 缺氧诱导的LRP6通过调控Wnt/β-catenin通路促进Rab7介导的子痫前期滋养层细胞自噬。 展开更多

关键词 低密度脂蛋白受体相关蛋白6 子痫前期 自噬

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高糖条件下沉默LRP6通过Wnt/β-catenin途径抑制大鼠视网膜Müller细胞的自噬与凋亡

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作者 周敏华 吴颖 +4 位作者 陈毅光 陈庆隆 李文翀 刘枘岢 朱咏瑶 《东南大学学报（医学版）》 CAS 2023年第1期32-40,共9页

目的:探究在高糖作用下大鼠视网膜Müller细胞中低密度脂蛋白受体相关蛋白6(LRP6)的表达及其对高糖条件诱导的Müller细胞自噬与凋亡的作用和机制。方法:体外培养大鼠视网膜Müller细胞,采用RT-PCR与Western blotting检测... 目的:探究在高糖作用下大鼠视网膜Müller细胞中低密度脂蛋白受体相关蛋白6(LRP6)的表达及其对高糖条件诱导的Müller细胞自噬与凋亡的作用和机制。方法:体外培养大鼠视网膜Müller细胞,采用RT-PCR与Western blotting检测高糖条件下Müller细胞中LRP6 mRNA和蛋白的表达水平;利用siRNA干扰技术沉默Müller细胞中的LRP6,并分别在葡萄糖浓度为5.6 mmol·L^(-1)(NG)与35 mmol·L^(-1)的DMEM培养液(HG)中进行培养,按处理方式的不同将Müller细胞分为葡萄糖浓度为5.6 mmol·L^(-1)的DMEM培养的正常葡萄糖组(NG组)、葡萄糖浓度为35 mmol·L^(-1)的DMEM培养的转染si-NC组(HG+si-NC组)和si-LRP6的Müller细胞组(HG+si-LRP6组);采用Western blotting检测各组Müller细胞中自噬相关蛋白P62的表达、LC3Ⅱ/LC3Ⅰ之值、Beclin1与Atg12-Atg5复合体的表达;共聚焦显微镜观察RFP-GFP-LC3串联质粒转染后各组Müller细胞中自噬通量的变化;TUNEL染色检测各组Müller细胞的凋亡率,Western blotting法检测细胞中抗凋亡蛋白Bcl-2、促凋亡蛋白Bax与cleaved Caspase-3及Wnt/β-catenin途径中β-catenin蛋白的表达。结果:与NG组相比,HG组Müller细胞中LRP6 mRNA和蛋白的表达水平明显增高(P<0.01);与NG组比较,HG+si-NC组、HG+si-LRP6组Müller细胞中除P62和Bcl-2蛋白表达显著降低外(P<0.05),LC3Ⅱ/LC3Ⅰ之值、Beclin1与Atg12-Atg5复合体、细胞中自噬通量、TUNEL阳性细胞率及细胞中Bad、cleaved Caspase-3蛋白表达水平均明显升高(P<0.05);而与HG+si-NC组比较,HG+si-LRP6组中除P62、Bcl-2蛋白明显升高外(P<0.05),其他检测指标均显著降低;此外,与NG组比较,HG+si-NC组中β-catenin蛋白表达显著升高(P<0.05),而HG+si-LRP6组明显降低(P<0.05);其中与HG+si-NC组相比,HG+si-LRP6组中β-catenin蛋白的降低趋势更为显著(P<0.01)。结论:高糖可促进Müller细胞中LRP6的表达,采用siRNA干扰技术沉默细胞中LRP6表达可能通过下调Wnt/β-catenin途径抑制高糖 展开更多

关键词 高糖 低密度脂蛋白受体相关蛋白6 视网膜MÜLLER细胞 自噬 凋亡 大鼠

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补肾活血方对高糖高脂诱导损伤的小鼠脑微血管内皮细胞内质网应激和RAGE/LRP-1蛋白表达的影响 被引量：2

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作者 闫敬来 张益铭 +3 位作者 赵佳奇 田雅娟 李钦青 贺文彬 《中华中医药杂志》 CAS CSCD 北大核心 2021年第1期397-401,共5页

目的:在细胞水平探索补肾活血方对高糖高脂诱导的小鼠脑微血管内皮细胞(BEND3细胞)损伤的改善作用,并探究补肾活血方对高糖高脂导致的内质网应激和转运Aβ相关受体蛋白的作用。方法:采用高糖高脂(25mmol/L葡萄糖,200μmol/L棕榈酸)刺激B... 目的:在细胞水平探索补肾活血方对高糖高脂诱导的小鼠脑微血管内皮细胞(BEND3细胞)损伤的改善作用,并探究补肾活血方对高糖高脂导致的内质网应激和转运Aβ相关受体蛋白的作用。方法:采用高糖高脂(25mmol/L葡萄糖,200μmol/L棕榈酸)刺激BEND3细胞,用CCK-8法筛选合适的补肾方(BS)、活血方(HX)、补肾活血方(BSHX)的最佳用药浓度;应用免疫蛋白印迹法检测BS、HX、BSHX最佳用药浓度对葡萄糖调节蛋白78(GRP78)、磷酸化真核起始因子2α(p-eIF2α)、活性转录因子4(ATF4)、核因子κB(NF-κB)抗体以及脑内与转运β淀粉样蛋白相关的晚期糖基化终产物受体(RAGE)和低密度脂蛋白受体相关蛋白-1(LRP-1)的表达情况。结果:CCK-8检测细胞活力,最终选定补肾方100mg/L、活血方20mg/L和补肾活血方120mg/L;与正常对照组比较,高糖高脂刺激BEND3细胞后,GRP78、p-eIF2α、ATF4、NF-κB、RAGE表达显著增加(P<0.01),LRP-1表达下降(P<0.01);药物干预后,GRP78、p-eIF2α、ATF4、NF-κB、RAGE蛋白下调,BSHX组LRP-1表达显著上调(P<0.05,P<0.01);且以BSHX组最为明显。结论:补肾方、活血方、补肾活血方对高糖高脂诱导的BEND3细胞损伤均有改善作用,但以补肾活血方疗效最为突出,且对高糖高脂导致的内质网应激和转运β淀粉样蛋白受体的蛋白表达具有调节作用。 展开更多

关键词 补肾活血方 高糖高脂 小鼠脑微血管内皮细胞 内质网应激 晚期糖基化终产物受体 低密度脂蛋白受体相关蛋白-1

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