目的探讨干细胞标志物三磷酸腺苷结合盒超家族G家族第2个成员(ATP-binding cassette super-family G member 2,ABCG2)在人肝癌细胞株中的表达及其与肝癌耐药的关系,观察人肝癌细胞株中ABCG2阳性表达和阴性表达细胞的功能差异。方法流式...目的探讨干细胞标志物三磷酸腺苷结合盒超家族G家族第2个成员(ATP-binding cassette super-family G member 2,ABCG2)在人肝癌细胞株中的表达及其与肝癌耐药的关系,观察人肝癌细胞株中ABCG2阳性表达和阴性表达细胞的功能差异。方法流式细胞仪检测ABCG2在人肝癌细胞株PLC/PRF/5、7402、7701及7721中的阳性表达,计算5-氟尿嘧啶(5-FU)、阿霉素的半数抑制浓度(IC50)值。采用免疫荧光染色观察ABCG2在肝癌7721细胞株中的表达,并进行无菌流式分选,观察ABCG2阳性表达与ABCG2阴性表达的肝癌7721细胞的功能差异。结果在4种肝癌细胞株中7721细胞株ABCG2表达阳性率最高(P<0.05),且流式细胞图中阳性表达和阴性表达细胞呈明显双峰。5-FU、阿霉素对7721细胞株的IC50值明显高于其他3种细胞株,除与5-FU对7701细胞的IC50值差异无统计学意义(P>0.05)外,其余比较差异均有统计学意义(P<0.05)。分选后的ABCG2阳性表达细胞与阴性表达细胞的增殖差异无统计学意义(P>0.05);ABCG2阳性表达细胞较阴性表达细胞更多处于相对静止期(P<0.05)。结论 ABCG2在人多种肝癌细胞株中均表达,ABCG2表达阳性率越高的细胞较表达阳性率越低的细胞更具有耐药性,ABCG2阳性表达细胞处于相对静止期。展开更多
肝癌是一种侵袭性极强的恶性肿瘤,临床预后极差。肝癌干细胞(liver cancer stem cells,LCSCs)是肝癌细胞中一类具有自我更新和多向分化潜能的细胞亚群,具有极强的侵袭、迁移能力,与肝癌的发生、进展、转移密切相关。非编码RNA(non-codin...肝癌是一种侵袭性极强的恶性肿瘤,临床预后极差。肝癌干细胞(liver cancer stem cells,LCSCs)是肝癌细胞中一类具有自我更新和多向分化潜能的细胞亚群,具有极强的侵袭、迁移能力,与肝癌的发生、进展、转移密切相关。非编码RNA(non-coding RNAs,ncRNAs)是癌症干细胞(cancer stem cells,CSCs)亚群的关键调节因子,参与了CSCs的自我更新、侵袭、耐药和分化等过程。全文对ncRNAs在LCSCs发生、维持和调节中的功能及作用机制等近年来研究进展作一综述:通过ncRNAs寻找肝癌治疗新靶点,以期选择性消除LCSCs,最终改善肝癌患者的预后。展开更多
目的评估免疫磁珠分选技术分选肝癌干细胞的效率。方法 (1)CD90的表达检测:采用免疫组织化学染色SP法检测8例正常肝组织、58例肝癌及其癌旁组织中CD90的表达。(2)细胞系筛选:将Huh-7、MHCC97-H、SMMC-7721及Bel7402细胞系分为空白对照...目的评估免疫磁珠分选技术分选肝癌干细胞的效率。方法 (1)CD90的表达检测:采用免疫组织化学染色SP法检测8例正常肝组织、58例肝癌及其癌旁组织中CD90的表达。(2)细胞系筛选:将Huh-7、MHCC97-H、SMMC-7721及Bel7402细胞系分为空白对照组和实验组(细胞数量均为5.5×10~5个,均为1孔),实验组细胞中加入5μL CD90~–PE抗体,空白对照组加入5μL CD90~–无荧光抗体。采用流式细胞术检测4种细胞系空白对照组和实验组的CD90^+细胞比例,以筛选细胞。(3)免疫磁珠分选:将Huh-7和MHCC97-H细胞系分别进行磁珠标记后进行磁珠分选。收集流经磁珠分选柱(MS)后的细胞悬液1 m L,作为CD90~–组;将MS移出磁场区域,加入1 m L PBS缓冲液快速冲洗至离心管中,标记为CD90^+组;以未分选细胞作为空白对照组(加入CD90~–无荧光抗体)和未分选实验组(加入CD90~–PE抗体)。对Huh-7细胞系进行二次分选。采用流式细胞仪检测4组细胞中的CD90^+细胞比例。(4)无血清培养和含血清培养:将Huh-7细胞接种到无血清培养基专用6孔板中进行培养(无血清和含血清悬浮培养均为1孔),1周后采用流式细胞仪检测无血清培养和含血清培养后细胞中的CD90^+细胞比例。结果 (1)正常肝组织中CD90的表达阳性率为0(0/8),肝癌组织为65.5%(38/58),癌旁组织为20.7%(12/58)。肝癌组织中CD90的表达阳性率较正常肝组织(χ2=6.78,P<0.05)和癌旁组织高(χ~2=20.83,P<0.05)。(2)Huh-7、MHCC97-H、SMMC-7721及Bel7402细胞系中实验组的CD90^+细胞比例分别为0.851%、1.090%、2.710%及4.050%,空白对照组分别为0.241%、0.688%、1.890%及2.080%,故选择Huh-7和MHCC97-H细胞系进行下一步的免疫磁珠分选。(3)Huh-7细胞经一次分选后:未分选空白对照组的CD90^+细胞比例为0.241%,未分选实验组为0.851%,CD90~–组为0.574%,CD90^+组为1.100%;二次分选后:未分选空白对照组的CD90^+细胞比例为0.032%,未分选实验组为0.961%,CD90展开更多
原发性肝细胞癌作为肝癌的主要病理类型,是我国常见的恶性肿瘤之一。肝细胞癌干细胞(liver cancer stem cells,LCSCs)除具有干细胞自我更新、多向分化和无限增殖的性质外,还具有多药耐药、抗放疗以及高致瘤性等特性,因而对患者采用常规...原发性肝细胞癌作为肝癌的主要病理类型,是我国常见的恶性肿瘤之一。肝细胞癌干细胞(liver cancer stem cells,LCSCs)除具有干细胞自我更新、多向分化和无限增殖的性质外,还具有多药耐药、抗放疗以及高致瘤性等特性,因而对患者采用常规方法治疗后,常会有肿瘤的复发和转移,造成预后不良。因此,靶向肝细胞癌干细胞的有效治疗有彻底治愈肝细胞癌(hepatocellular carcinoma,HCC)的可能。本文对用于识别肝细胞癌干细胞的常见生物标志物以及针对肝细胞癌干细胞的靶向治疗进行综述。展开更多
文摘目的探讨干细胞标志物三磷酸腺苷结合盒超家族G家族第2个成员(ATP-binding cassette super-family G member 2,ABCG2)在人肝癌细胞株中的表达及其与肝癌耐药的关系,观察人肝癌细胞株中ABCG2阳性表达和阴性表达细胞的功能差异。方法流式细胞仪检测ABCG2在人肝癌细胞株PLC/PRF/5、7402、7701及7721中的阳性表达,计算5-氟尿嘧啶(5-FU)、阿霉素的半数抑制浓度(IC50)值。采用免疫荧光染色观察ABCG2在肝癌7721细胞株中的表达,并进行无菌流式分选,观察ABCG2阳性表达与ABCG2阴性表达的肝癌7721细胞的功能差异。结果在4种肝癌细胞株中7721细胞株ABCG2表达阳性率最高(P<0.05),且流式细胞图中阳性表达和阴性表达细胞呈明显双峰。5-FU、阿霉素对7721细胞株的IC50值明显高于其他3种细胞株,除与5-FU对7701细胞的IC50值差异无统计学意义(P>0.05)外,其余比较差异均有统计学意义(P<0.05)。分选后的ABCG2阳性表达细胞与阴性表达细胞的增殖差异无统计学意义(P>0.05);ABCG2阳性表达细胞较阴性表达细胞更多处于相对静止期(P<0.05)。结论 ABCG2在人多种肝癌细胞株中均表达,ABCG2表达阳性率越高的细胞较表达阳性率越低的细胞更具有耐药性,ABCG2阳性表达细胞处于相对静止期。
文摘目的评估免疫磁珠分选技术分选肝癌干细胞的效率。方法 (1)CD90的表达检测:采用免疫组织化学染色SP法检测8例正常肝组织、58例肝癌及其癌旁组织中CD90的表达。(2)细胞系筛选:将Huh-7、MHCC97-H、SMMC-7721及Bel7402细胞系分为空白对照组和实验组(细胞数量均为5.5×10~5个,均为1孔),实验组细胞中加入5μL CD90~–PE抗体,空白对照组加入5μL CD90~–无荧光抗体。采用流式细胞术检测4种细胞系空白对照组和实验组的CD90^+细胞比例,以筛选细胞。(3)免疫磁珠分选:将Huh-7和MHCC97-H细胞系分别进行磁珠标记后进行磁珠分选。收集流经磁珠分选柱(MS)后的细胞悬液1 m L,作为CD90~–组;将MS移出磁场区域,加入1 m L PBS缓冲液快速冲洗至离心管中,标记为CD90^+组;以未分选细胞作为空白对照组(加入CD90~–无荧光抗体)和未分选实验组(加入CD90~–PE抗体)。对Huh-7细胞系进行二次分选。采用流式细胞仪检测4组细胞中的CD90^+细胞比例。(4)无血清培养和含血清培养:将Huh-7细胞接种到无血清培养基专用6孔板中进行培养(无血清和含血清悬浮培养均为1孔),1周后采用流式细胞仪检测无血清培养和含血清培养后细胞中的CD90^+细胞比例。结果 (1)正常肝组织中CD90的表达阳性率为0(0/8),肝癌组织为65.5%(38/58),癌旁组织为20.7%(12/58)。肝癌组织中CD90的表达阳性率较正常肝组织(χ2=6.78,P<0.05)和癌旁组织高(χ~2=20.83,P<0.05)。(2)Huh-7、MHCC97-H、SMMC-7721及Bel7402细胞系中实验组的CD90^+细胞比例分别为0.851%、1.090%、2.710%及4.050%,空白对照组分别为0.241%、0.688%、1.890%及2.080%,故选择Huh-7和MHCC97-H细胞系进行下一步的免疫磁珠分选。(3)Huh-7细胞经一次分选后:未分选空白对照组的CD90^+细胞比例为0.241%,未分选实验组为0.851%,CD90~–组为0.574%,CD90^+组为1.100%;二次分选后:未分选空白对照组的CD90^+细胞比例为0.032%,未分选实验组为0.961%,CD90
文摘原发性肝细胞癌作为肝癌的主要病理类型,是我国常见的恶性肿瘤之一。肝细胞癌干细胞(liver cancer stem cells,LCSCs)除具有干细胞自我更新、多向分化和无限增殖的性质外,还具有多药耐药、抗放疗以及高致瘤性等特性,因而对患者采用常规方法治疗后,常会有肿瘤的复发和转移,造成预后不良。因此,靶向肝细胞癌干细胞的有效治疗有彻底治愈肝细胞癌(hepatocellular carcinoma,HCC)的可能。本文对用于识别肝细胞癌干细胞的常见生物标志物以及针对肝细胞癌干细胞的靶向治疗进行综述。
