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体外诱导人羊膜间充质干细胞向韧带细胞分化的实验研究 被引量:20
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作者 金瑛 李豫皖 +3 位作者 张承昊 吴术红 陈代雄 刘毅 《中国修复重建外科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2016年第2期237-244,共8页
目的探讨人羊膜间充质干细胞(human amniotic mesenchymal stem cells,h AMSCs)是否具有MSCs的特性及经诱导后在体外能否向韧带细胞分化。方法取产妇胎盘通过酶消化法获得h AMSCs,流式细胞术鉴定h AMSCs表型特征。取第3代h AMSCs分别加... 目的探讨人羊膜间充质干细胞(human amniotic mesenchymal stem cells,h AMSCs)是否具有MSCs的特性及经诱导后在体外能否向韧带细胞分化。方法取产妇胎盘通过酶消化法获得h AMSCs,流式细胞术鉴定h AMSCs表型特征。取第3代h AMSCs分别加入含不同诱导液的L-DMEM/F12培养基:A组TGF-β1+b FGF,B组透明质酸(hyaluronic acid,HA),C组TGF-β1+b FGF+HA,D组为空白对照组。倒置相差显微镜观察诱导后21 d各组细胞形态学变化;磺酰罗丹明B(sulforhodamine B,SRB)比色法检测各组细胞生长活性;诱导后7、14、21 d分别采用免疫组织化学染色及实时荧光定量PCR检测韧带特异性蛋白和基因Ⅰ型胶原、Ⅲ型胶原、肌腱蛋白C(tenascin C,TNC)表达。结果流式细胞术鉴定结果表明h AMSCs表达MSCs表型。倒置相差显微镜观察示诱导21 d A、B、C组细胞均呈长梭形纤维细胞样生长,C组细胞形态更单一、有明显方向性且较A组排列更紧凑。SRB比色法检测示各组细胞于培养6 d左右达增殖高峰,6 d时A、B、C组细胞活性均显著高于D组。免疫组织化学结果示:诱导培养7 d,各组均未检测到TNC表达;7、14、21 d A、B、C组Ⅰ型胶原表达均显著高于D组,14、21 d A、B、C组Ⅲ型胶原表达显著高于D组,差异均有统计学意义(P<0.001)。B组Ⅰ型胶原表达以及A、C组Ⅲ型胶原、TNC表达随时间增加均呈逐渐增高趋势,各时间点间比较差异均有统计学意义(P<0.001)。实时荧光定量PCR结果示:诱导培养21 d,C组Ⅰ型胶原、TNC m RNA相对表达量显著高于A、B组,B组Ⅲ型胶原m RNA相对表达量显著高于A、C组,差异均有统计学意义(P<0.05)。A、C组Ⅰ型胶原、TNC以及C组Ⅲ型胶原m RNA相对表达量随时间增加呈逐渐上调趋势,各时间点间比较差异均有统计学意义(P<0.001)。结论 h AMSCs具有MSCs的特性,有良好增殖能力,经体外诱导后韧带特异性基因表达上调,韧带特异性蛋白合成增加,可作为韧带组织 展开更多
关键词 人羊膜间充质干细胞 韧带组织工程 TGF-Β1 BFGF 透明质酸
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Runx2基因诱导人羊膜MSCs体外向韧带成纤维细胞定向分化及促进兔腱-骨愈合的研究
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作者 谢淘 仲鹤鹤 +4 位作者 金瑛 刘修齐 陈方 向宽 吴术红 《中国修复重建外科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2023年第12期1523-1532,共10页
目的探讨Runx2基因是否具有体外诱导人羊膜MSCs(human amniotic MSCs,hAMSCs)向韧带成纤维细胞分化以及在体内能否促进兔前交叉韧带重建后腱-骨愈合。方法取健康产妇自愿捐赠胎盘分离培养hAMSCs并传代后行流式细胞鉴定。构建携带Runx2... 目的探讨Runx2基因是否具有体外诱导人羊膜MSCs(human amniotic MSCs,hAMSCs)向韧带成纤维细胞分化以及在体内能否促进兔前交叉韧带重建后腱-骨愈合。方法取健康产妇自愿捐赠胎盘分离培养hAMSCs并传代后行流式细胞鉴定。构建携带Runx2基因的腺病毒载体(Ad-Runx2)以及空质粒载体腺病毒(Ad-NC),经病毒滴度测定后分别转染第3代hAMSCs(Ad-Runx2组、Ad-NC组),实时荧光定量PCR及Western blot检测Runx2基因及蛋白表达,验证Ad-Runx2基因转染hAMSCs有效性;然后于转染后培养3、7 d时,进一步采用实时荧光定量PCR检测韧带成纤维细胞相关基因[VEGF、Ⅰ型胶原、纤连蛋白(Fibronectin)和肌腱蛋白C(Tenascin-C)]表达;以单纯hAMSCs作为空白对照组。将单纯hAMSCs以及转染Ad-NC、Ad-Runx2的hAMSCs分别与基质胶(Matrigel)按照体积比1∶1和1∶2混合构建复合物,采用细胞计数试剂盒8(cell counting kit 8,CCK-8)检测细胞增殖,取增殖较好的对应复合物进行后续动物实验。将12只新西兰白兔随机分为假手术组(Sham组)、前交叉韧带重建组(ACLR组)、前交叉韧带重建+Ad-NC组(Ad-NC组)、前交叉韧带重建+Ad-Runx2组(Ad-Runx2组)4组,每组3只。制备前交叉韧带重建模型后,Ad-NC组、Ad-Runx2组于骨道内对应注射最佳hAMSCs-Matrigel复合物。术后1个月取材行大体、组织学(HE染色及天狼猩红染色)、免疫荧光染色观察,评价韧带组织中炎症细胞浸润以及Ⅰ/Ⅲ型胶原、Tenascin-C含量。结果流式细胞鉴定分离培养细胞符合MSCs表型特征。Runx2基因成功转染至hAMSCs;与Ad-NC组相比,Ad-Runx2组转染后VEGF及Ⅰ型胶原基因相对表达量于培养3、7 d时均增高(P<0.05),Fibronectin仅3 d时增高(P<0.05),而Tenascin-C于3 d时增高、7 d时降低(P<0.05)。CCK-8检测示两种比例混合培养后,细胞增殖组间以及组内各时间点间差异均无统计学意义(P>0.05),选择1∶1比例构建复合物进行后续实验。动物实验显� 展开更多
关键词 Runx2基因 人羊膜MSCs 韧带成纤维细胞 腱-骨愈合 韧带组织工程
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骨形态发生蛋白9基因修饰人羊膜间充质干细胞体外向韧带成纤维细胞分化研究 被引量:1
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作者 朱喜忠 刘子铭 +6 位作者 吴术红 熊华章 金瑛 李豫皖 杨继滨 尤奇 刘毅 《中国运动医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2018年第6期496-502,共7页
目的:探讨骨形态发生蛋白9(BMP9)基因修饰对人羊膜间充质干细胞(h AMSCs)在体外向韧带成纤维细胞(LFs)分化是否有促进作用,并研究其分子机制。方法:体外分离培养h AMSCs及LFs,观察并比较两种细胞形态学差异。经Ad MAX系统体外构建BMP9... 目的:探讨骨形态发生蛋白9(BMP9)基因修饰对人羊膜间充质干细胞(h AMSCs)在体外向韧带成纤维细胞(LFs)分化是否有促进作用,并研究其分子机制。方法:体外分离培养h AMSCs及LFs,观察并比较两种细胞形态学差异。经Ad MAX系统体外构建BMP9基因腺病毒载体,经提纯及荧光法病毒滴度测定后转染P3代h AMSCs。实验分为三组,A组:携带绿色荧光蛋白(GFP)的空腺病毒载体转染h AMSCs(h AMSCs-GFP);B组:携带BMP9基因的腺病毒载体转染h AMSCs(h AMSCs-BMP9);C组:韧带成纤维细胞组(LFs)。于体外分别培养7天后使用荧光定量PCR检测并比较各组韧带相关基因Scleraxis(Scx)、Ⅰ型胶原(ColⅠ)、细胞连接素(TNC)、纤维连接蛋白(Fib)及腱调蛋白(Tnmd)m RNA的表达量。使用免疫荧光检测并比较三组细胞体外培养7天后ColⅠ的表达量。结果:在倒置相差显微镜下,h AMSCs原代呈多角形贴壁生长,传代后呈长梭状漩涡状生长。LFs原代呈长梭状贴壁生长,传代后呈漩涡状集落样生长。A、B组细胞转染8 h、24 h后,生长增殖缓慢,轮廓清晰,细胞形态未发生变化。荧光显微镜观察显示A组在转染8 h后可见GFP荧光表达,24 h后表达荧光的数量和强度均增多。实时荧光定量PCR显示,转染7天时B组SCX、Tnmd、ColⅠ、Fib及TNC的表达量均高于A组(P<0.05),而SCX、Fib、TNC及Tnmd的表达量低于C组(P<0.05),ColⅠ的表达量高于C组(P<0.05)。荧光免疫组化显示,转染7天后,B组ColⅠ的表达量均高于A组和C组。结论:BMP9基因可促进h AMSCs向LFs定向分化,并促进韧带特异性基因的表达和细胞外基质的产生,为h AMSCs作为韧带组织工程种子细胞提供了实验基础。 展开更多
关键词 人羊膜间充质干细胞 BMP9 细胞分化 基因工程 韧带组织工程
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韧带组织工程中物理环境影响干细胞分化的研究进展 被引量:1
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作者 张亚强 杨成伟 +3 位作者 封国超 李闯兵 时培晟 甄平 《中国骨伤》 CAS CSCD 2020年第11期1080-1084,共5页
韧带组织工程是目前治疗韧带损伤的一种新型的方法,其可以替代自体移植物的不足。韧带组织工程包括4个基本要素:种子细胞、纳米支架、生长因子、机械刺激。目前韧带组织工程存在的主要问题是如何更可控的使种子细胞向韧带细胞分化。研... 韧带组织工程是目前治疗韧带损伤的一种新型的方法,其可以替代自体移植物的不足。韧带组织工程包括4个基本要素:种子细胞、纳米支架、生长因子、机械刺激。目前韧带组织工程存在的主要问题是如何更可控的使种子细胞向韧带细胞分化。研究发现天然生物韧带的每一个物理特性及机械刺刺激(单轴拉伸)在干细胞向韧带细胞分化中起十分重要的作用,所以纳米纤维支架的设计必须要考虑材料的弹性模量、材料的结构(材料的排列方式、孔隙率及直径等),不同范围内的弹性模量及材料结构会引导细胞向不同谱系分化。考虑到韧带是人体主要的受力组织,所以机械刺激对干细胞分化也是必不可少的,尤其是单轴拉伸,其最符合韧带在体内的受力情况,大量研究发现拉伸的频率、幅度及时间也会引导细胞向不同方向分化。RhoA/卷曲螺旋蛋白激酶对细胞骨架的重构和分化起调节作用,同时研究发现RhoA/卷曲螺旋蛋白激酶蛋白参与了纳米纤维排布及机单轴拉伸引导干细胞向韧带细胞分化的过程,具体是如何影响干细胞分化的,目前并不清楚,了解物理特性对干细胞分化的影响并且弄清RhoA/卷曲螺旋蛋白激酶蛋白的作用机制,将为进一步优化韧带组织工程提供了新的理论依据。 展开更多
关键词 韧带组织工程 机械刺激 弹性模量 单轴拉伸
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韧带组织工程仿生性支架的研究进展
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作者 徐飞(综述) 张蕾(审校) 《生物医学工程学杂志》 EI CAS CSCD 北大核心 2021年第4期812-818,共7页
韧带是致密的纤维结缔组织,通过骨间连接维持关节的稳定性。运动损伤或组织老化引起的韧带撕裂通常需要手术干预,目前使用自体、异体或人工韧带作为移植物进行重建是治疗该类疾病的金标准,但这些移植物都存在诸多弊端。随着材料学和制... 韧带是致密的纤维结缔组织,通过骨间连接维持关节的稳定性。运动损伤或组织老化引起的韧带撕裂通常需要手术干预,目前使用自体、异体或人工韧带作为移植物进行重建是治疗该类疾病的金标准,但这些移植物都存在诸多弊端。随着材料学和制造技术的发展,以生物支架为基础的工程化韧带组织有望成为新的组织供体,通过模拟天然组织的结构、成分和生物力学性能来达到再生组织的目的。本综述根据近期韧带组织工程的体外和动物实验研究,评估了以仿生性为设计原则,使用不同材料、制造技术和生物因素制造的纤维结构支架、多相界面支架和生物组织衍生支架的各项性能以及在促进韧带修复和重建中的效果。最后,总结并展望未来韧带组织工程研究中生物支架的发展方向。 展开更多
关键词 韧带组织工程 支架 仿生性 生物材料 生物因素
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蚕丝丝素纤维的制备及其与骨髓间充质干细胞相容性的研究 被引量:12
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作者 江莹 陈槐卿 +3 位作者 周闻达 华坚 郑庆康 Xiong Wang 《生物医学工程学杂志》 EI CAS CSCD 北大核心 2006年第3期560-564,共5页
组织工程为韧带损伤修复提供了可行途径,但韧带修复对支架材料各方面性能要求都很高。在力学性能方面,不仅要求材料有一定的强度而且需要有良好的韧性。在满足力学性能的同时,支架材料还必须兼具优良的生物相容性。蚕丝作为一种天然生... 组织工程为韧带损伤修复提供了可行途径,但韧带修复对支架材料各方面性能要求都很高。在力学性能方面,不仅要求材料有一定的强度而且需要有良好的韧性。在满足力学性能的同时,支架材料还必须兼具优良的生物相容性。蚕丝作为一种天然生物蛋白质,由于其良好的力学性能显示了在组织工程方面应用的前景。但由于丝胶存在污染问题,因此脱胶成为蚕丝在医学领域应用的首要问题。本实验首先比较了三种脱胶试剂对蚕丝力学性质的影响,选择了影响最小的碳酸钠作为脱胶试剂,进而确定了碳酸钠脱胶的最佳条件为:试剂浓度0.4%,温度90℃,时间为1 h。然后在脱胶后的丝素纤维上种植了大鼠骨髓间充质干细胞(R at bone m arrow m esenchym a l stemce lls,rM SC s),通过扫描电镜(SEM)、荧光显微镜检测了丝素上细胞的生长情况,结果显示蚕丝具有良好的生物相容性,细胞亲和力。为蚕丝在韧带组织工程方面的进一步应用奠定了基础。 展开更多
关键词 蚕丝 骨髓间充质干细胞 韧带 组织工程
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前交叉韧带组织工程种子细胞筛选的初步研究 被引量:2
7
作者 孟乘飞 张春礼 +2 位作者 范宏斌 徐虎 白建萍 《科学技术与工程》 2007年第9期1858-1862,1867,共6页
为组织工程方法构建前交叉韧带筛选一种理想的种子细胞。用体外分离培养兔前交叉韧带(ACL)、内侧副韧带(MCL)、跟腱(AT)、皮肤成纤维细胞(SK),比较四种细胞的生长状态、增殖活性及Ⅰ、Ⅲ型胶原分泌量。在含体积分数10%胎牛血清的DMEM培... 为组织工程方法构建前交叉韧带筛选一种理想的种子细胞。用体外分离培养兔前交叉韧带(ACL)、内侧副韧带(MCL)、跟腱(AT)、皮肤成纤维细胞(SK),比较四种细胞的生长状态、增殖活性及Ⅰ、Ⅲ型胶原分泌量。在含体积分数10%胎牛血清的DMEM培养液中,四种细胞生长良好、细胞形态相似,但以SK细胞生长最快,AT细胞次之,MCL细胞和ACL细胞生长最慢。SK、MCL、ACL细胞均分泌Ⅰ、Ⅲ型胶原,AT细胞只分泌Ⅰ型胶原。SK细胞Ⅰ型胶原染色密度较MCL、ACL、AT细胞高,SK细胞Ⅲ型胶原染色密度较MCL、ACL细胞高。说明SK细胞增殖活性高,分泌Ⅰ、Ⅲ型胶原多,取材简便,是理想的前交叉韧带组织工程种子细胞。 展开更多
关键词 前交叉韧带 组织工程 内侧副韧带 跟腱皮肤成纤维细胞种子细胞
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DiI荧光标记示踪兔皮肤成纤维细胞修复前交叉韧带损伤的研究 被引量:1
8
作者 操石磊 张春礼 +2 位作者 徐虎 陈辉 郑佳鹏 《科学技术与工程》 2008年第1期30-33,共4页
体内采用组织工程方法构建前交叉韧带种子细胞筛选研究,提供了一种理想的细胞标记的方法。体外分离培养兔皮肤成纤维细胞(SF),比较皮肤成纤维细胞使用荧光染料CM-DiI体外标记前后细胞的生长状态、增殖活性以及检测SF复合纤维生物蛋白胶... 体内采用组织工程方法构建前交叉韧带种子细胞筛选研究,提供了一种理想的细胞标记的方法。体外分离培养兔皮肤成纤维细胞(SF),比较皮肤成纤维细胞使用荧光染料CM-DiI体外标记前后细胞的生长状态、增殖活性以及检测SF复合纤维生物蛋白胶植入前交叉韧带上12周后的荧光表达情况。结果表明CM-DiI标记SF效果良好,标记阳性率高于95%。而标记前后SF增殖活性无明显变化,荧光标记在体内实验12周后仍有表达。从而证实CM-DiI是筛选前交叉韧带组织工程种子细胞筛选研究中细胞标记、示踪的良好标记物。 展开更多
关键词 前交叉韧带 组织工程 皮肤成纤维细胞 荧光染料 细胞标记种子细胞
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牙周膜成纤维细胞在三维静电纺丝纳米纤维支架上的培养 被引量:4
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作者 白轶 陈亮 《口腔医学研究》 CAS CSCD 2012年第10期1046-1049,共4页
目的:研究人牙周膜成纤维细胞与静电纺丝聚乳酸/聚己内酯纳米纤维支架体外培养的生物相容性。方法:分离、培养人牙周膜成纤维细胞,接种在静电纺丝纳米纤维支架上,与常规培养条件下的细胞进行比较,观察生长形态、生长曲线、倍增时间及活... 目的:研究人牙周膜成纤维细胞与静电纺丝聚乳酸/聚己内酯纳米纤维支架体外培养的生物相容性。方法:分离、培养人牙周膜成纤维细胞,接种在静电纺丝纳米纤维支架上,与常规培养条件下的细胞进行比较,观察生长形态、生长曲线、倍增时间及活性。结果:人牙周膜成纤维细胞生长情况与常规培养基本一致,2组间的倍增时间比较无统计学差异(P>0.05),活细胞百分率与正常培养无明显统计学差异(P>0.05)。结论:人牙周膜成纤维细胞在三维静电纺丝纳米纤维上生长、增殖,该支架材料具有很好的生物相容性,可作为牙周膜组织工程候选支架材料。 展开更多
关键词 牙周膜成纤维细胞 组织工程 纳米纤维支架 静电纺丝
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干细胞在牙周病学中的应用进展 被引量:1
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作者 谢军 陆玉林 曹庆堂 《北方药学》 2014年第5期86-87,共2页
牙周病是造成牙齿缺失的常见病因之一。随着对干细胞的深入研究,牙周膜干细胞得以从牙周膜提取分离,具有分化成牙周组织细胞的能力。通过分析近年的组织工程学文章,探讨牙周膜干细胞的应用前景。
关键词 牙周病 牙周膜干细胞 组织工程学
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