Lrrk2 R1628P转基因小鼠尿液外泌体诱导帕金森病样病理变化

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作者 田一鸣 秦驰 +8 位作者 刘晗 付雨 田海燕 张瑞 梁东晓 陈永康 祝清勇 滕军放 丁雪冰 《郑州大学学报（医学版）》 CAS 北大核心 2024年第2期149-153,共5页

目的:探讨Lrrk2 R1628P转基因小鼠尿液外泌体能否诱导帕金森病(PD)样病理改变。方法:提取野生型(WT)和Lrrk2 R1628P转基因小鼠尿液外泌体,使用免疫印迹法检测尿液外泌体标记物TSG101和CD81,Y216位点磷酸化糖原合成酶激酶-3β(pGSK-3β-2... 目的:探讨Lrrk2 R1628P转基因小鼠尿液外泌体能否诱导帕金森病(PD)样病理改变。方法:提取野生型(WT)和Lrrk2 R1628P转基因小鼠尿液外泌体,使用免疫印迹法检测尿液外泌体标记物TSG101和CD81,Y216位点磷酸化糖原合成酶激酶-3β(pGSK-3β-216)表达水平。在C57小鼠纹状体中分别注射WT小鼠(C57-WT组,n=8)和Lrrk2 R1628P小鼠尿液外泌体(C57-Lrrk2组,n=8)。注射前3天,注射后1、3、6个月,利用平衡木、挂线、转棒和旷场实验对小鼠进行行为学分析,免疫组化法分析脑组织中磷酸化α-突触核蛋白(pα-syn)的沉积情况,免疫印迹法检测脑组织中pα-syn的表达。结果:Lrrk2 R1628P小鼠尿液外泌体TSG101和CD81表达水平与WT小鼠比较,差异无统计学意义(P>0.05),pGSK-3β-216表达水平高于WT小鼠(P<0.001)。C57-Lrrk2组小鼠出现PD样行为学表型(P<0.001),皮层、纹状体和黑质中有pα-syn沉积,脑组织中pα-syn表达水平为(0.44±0.06),C57-WT组则无表达(P<0.001)。结论:小鼠纹状体中注射Lrrk2 R1628P转基因小鼠的尿液外泌体能够诱导PD样病理改变。 展开更多

关键词 帕金森病 富含亮氨酸的重复激酶2 糖原合成酶激酶-3Β 尿液外泌体 小鼠

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缺氧后线粒体Drp1通过LRRK2-HK2诱导mPTP过度开放的机制研究 被引量：2

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作者 段晨阳 《重庆医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2023年第2期117-123,共7页

目的:探究缺氧后线粒体动力相关蛋白1(dynamin-related protein 1,Drp1)对线粒体膜通透性转换通道(mitochondrial permeability transition pore,mPTP)开放的调控机制。方法:在血管平滑肌细胞中通过免疫荧光方法观察缺氧后mPTP开放情况... 目的:探究缺氧后线粒体动力相关蛋白1(dynamin-related protein 1,Drp1)对线粒体膜通透性转换通道(mitochondrial permeability transition pore,mPTP)开放的调控机制。方法:在血管平滑肌细胞中通过免疫荧光方法观察缺氧后mPTP开放情况;通过超速离心法分离线粒体和细胞质成分蛋白;使用Co-IP和Westernblot检测缺氧或者干预Drp1、干预己糖激酶-2(hexokinase-2,HK2)后Drp1的表达分布情况、HK2与电压依赖性阴离子通道蛋白(voltage dependent anion channel,VDAC)结合情况、Drp1与富含亮氨酸重复激酶2(leucine-rich repeat kinase 2,LRRK2)结合情况;使用蛋白分子对接和蛋白芯片方法筛选Drp1的潜在结合蛋白及结合位点;使用Drp1抑制剂和点突变法用于相应机制探究。结果:缺氧后Drp1发生线粒体转位促使mPTP过度开放(P<0.05)。使用Mdivi-1减少线粒体Drp1表达后可抑制mPTP开放,减少细胞色素C(cytochrome C,CytC)释放(P<0.05)。缺氧后HK2-Thr473磷酸化水平减低引起的HK2线粒体分离会导致mPTP结构破坏,通过HK2 T473D点突变恢复HK2活性后,HK2与线粒体结合情况及mPTP开放情况明显改善(P<0.05)。Drp1蛋白芯片结果发现缺氧后Drp1可以与LRRK2结合并封闭其活性位点,通过Drp1 T595A点突变破坏Drp1-LRRK2结合后,HK2活性及HK2线粒体分离情况明显改善(P<0.05),mPTP开放情况明显减少(P<0.05)。结论:缺氧后线粒体Drp1通过封闭激酶LRRK2活性位点导致HK2 Thr473磷酸化水平减低及其线粒体分离,最终诱导mPTP过度开放。 展开更多

关键词 缺氧 动力相关蛋白1 富含亮氨酸重复激酶2 己糖激酶-2 线粒体 线粒体膜通透性转换通道

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富亮氨酸重复激酶2抑制剂作为新型帕金森病治疗剂的研究进展 被引量：2

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作者 战晓宇 任旭红 何新华 《国际药学研究杂志》 CAS CSCD 北大核心 2016年第1期97-103,133,共8页

帕金森病(PD)是以多巴胺能神经系统退行性病变为特征的多因素疾病。对其进行分型研究,发展针对PD发病机制的治疗药物是提高PD治疗效果的必由之路。富亮氨酸重复激酶2(LRRK2)基因突变是部分家族遗传性PD和散发性PD的直接原因。LRRK2基因... 帕金森病(PD)是以多巴胺能神经系统退行性病变为特征的多因素疾病。对其进行分型研究,发展针对PD发病机制的治疗药物是提高PD治疗效果的必由之路。富亮氨酸重复激酶2(LRRK2)基因突变是部分家族遗传性PD和散发性PD的直接原因。LRRK2基因突变会导致LRRK2活性增加,进而导致神经退行性病变。因此,发展LRRK2抑制剂调控LRRK2活性有望成为新的PD治疗方法。LRRK2既是激酶,也是小GTP酶,存在2个药物作用位点,因此,目前LRRK2抑制剂有2类,一类是LRRK2激酶位点抑制剂,另一类是LRRK2 GTP结合位点抑制剂。本文综述了LRRK2及其抑制剂的研究进展。 展开更多

关键词 帕金森病 富亮氨酸重复激酶2 富亮氨酸重复激酶2抑制剂 激酶结合位点 GTP结合位点

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LRRK2干扰对MPP+诱导PD细胞模型线粒体功能的影响 被引量：1

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作者 罗宁 王春玲 +4 位作者 蒙冰 周欣梅 冯文勇 李昌海 文晓东 《中国神经免疫学和神经病学杂志》 CAS 北大核心 2022年第1期6-10,16,共6页

目的探讨富亮氨酸重复激酶2(LRRK2)干扰对1-甲基-4-苯基吡啶离子(MPP+)诱导的帕金森病(PD)细胞模型线粒体功能及CaMKK-β/AMPK通路的影响。方法采用MPP+诱导传代培养的SH-SY5Y细胞构建PD细胞模型。将造模的SH-SY5Y细胞随机分PD模型组、... 目的探讨富亮氨酸重复激酶2(LRRK2)干扰对1-甲基-4-苯基吡啶离子(MPP+)诱导的帕金森病(PD)细胞模型线粒体功能及CaMKK-β/AMPK通路的影响。方法采用MPP+诱导传代培养的SH-SY5Y细胞构建PD细胞模型。将造模的SH-SY5Y细胞随机分PD模型组、空载转染组(空载转染PD模型细胞)和siRNA转染组(siRNA-LRRK2转染PD模型),另设正常对照组,每组设3个复孔。采用实时定量PCR(qRT-PCR)检测各组细胞LRRK2 mRNA表达,采用免疫印迹(WB)法检测各组细胞LRRK2蛋白表达,采用JC-1探针法检测各组细胞线粒体膜电位,采用试剂盒检测各组细胞线粒体复合物I(Complex I)活性及ATP含量,采用WB检测各组细胞中CaMKK-β/AMPK通路相关蛋白CaMKK-β、AMPK和p-AMPK蛋白表达。结果与正常对照组相比,PD模型组LRRK2蛋白表达增加(P<0.05),线粒体膜电位下降,Complex I活性及ATP含量降低(P<0.05),CaMKK-β/AMPK通路蛋白CaMKK-β、AMPK、p-AMPKα(Thr 172)蛋白表达增加(P<0.05)。与PD模型组比较,siRNA转染组LRRK2 mRNA及蛋白表达水平降低(P<0.05),线粒体膜电位提升,Complex I活性及ATP含量增加(P<0.05),CaMKK-β、AMPK和p-AMPK蛋白表达降低(P<0.05)。结论LRRK2干扰可改善MPP+诱导的PD细胞模型中受损的线粒体功能,抑制CaMKK-β/AMPK信号通路。 展开更多

关键词 帕金森病 富亮氨酸重复激酶2 线粒体功能 钙-钙调蛋白依赖性蛋白激酶2 AMPK通路

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LRRK2激酶在帕金森病中的致病机制及相关抑制剂的研发进展

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作者 康思敏 蒋政 +2 位作者 欧汝威 商慧芳 宋伟 《中国临床神经科学》 2022年第4期469-473,477,共6页

目前帕金森病(PD)治疗的主要方法是以改善运动症状为核心的多巴胺替代治疗,但潜在的疾病进程难以被打断或者延缓。随着PD遗传研究的跨越式发展,一系列单基因突变和患病风险位点被陆续发现,疾病发生发展的分子机制得以进一步阐明,也为PD... 目前帕金森病(PD)治疗的主要方法是以改善运动症状为核心的多巴胺替代治疗,但潜在的疾病进程难以被打断或者延缓。随着PD遗传研究的跨越式发展,一系列单基因突变和患病风险位点被陆续发现,疾病发生发展的分子机制得以进一步阐明,也为PD患者个体化治疗奠定了理论基础。PD相关基因LRRK2作为潜在治疗靶点,受到广泛关注。文中旨在对LRRK2基因的结构功能、致病机制、最新治疗研究进展进行综述。 展开更多

关键词 帕金森病 LRRK2激酶 激酶抑制剂 基因治疗

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α-synuclein蛋白及LRRK2在帕金森患者血清中的表达及临床研究 被引量：2

6

作者 孙伟 李秀云 叶世菲 《脑与神经疾病杂志》 CAS 2021年第8期497-501,共5页

目的研究α-突触核蛋白(α-synuclein)、富亮氨酸重复激酶2(leucine-rich repetitive kinase2,LRRK2)在帕金森病(Parkinson’s disease,PD)患者血清中的表达及临床价值研究。方法选取2016年1月-2018年12月皖南医学院弋矶山医院收治的PD... 目的研究α-突触核蛋白(α-synuclein)、富亮氨酸重复激酶2(leucine-rich repetitive kinase2,LRRK2)在帕金森病(Parkinson’s disease,PD)患者血清中的表达及临床价值研究。方法选取2016年1月-2018年12月皖南医学院弋矶山医院收治的PD患者90例,根据是否腔隙梗死将患者分为腔梗患者25例,无腔梗患者65例;根据空腹外周血高同型半胱氨酸(hyperhomocysteine,Hhcy)将患者分为:Hhcy血症患者29例,正常Hcy患者61例;按Hoehn-Yahr(H-Y)分级修正量表将患者分为:PD1-2级36例、PD2.5-3级34例、PD4-5级20例。另外选取同期在本院进行健康体检的健康老人90例。对比两组研究对象的一般资料、LRRK2、α-synuclein表达水平,并对PD患者各个亚组进行比较,分析LRRK2、α-synuclein表达水平和PD患者严重程度的关系,采用Pearson分析LRRK2、α-synuclein之间的相关性。结果健康对照组、PD两组研究对象性别、年龄、体质量比较,差异无统计学意义(P>0.05);PD组的LRRK2、α-synuclein表达水平均高于健康对照组,与无合并高血压患者相比,合并高血压患者LRRK2、α-synuclein水平较高(P<0.05)。与无腔隙梗死患者相比,合并腔隙梗死患者LRRK2、α-synuclein水平较高,差异有统计学意义(P<0.05)。与无Hhcy血症患者相比,Hhcy血症患者LRRK2、α-synuclein水平较高(P<0.05)。与12级相比,2.53级、4-5级LRRK2、α-synuclein表达水平升高(P<0.05);与2.5-3级相比,4-5级LRRK2、α-synuclein表达水平升高(P<0.05)。LRRK2、α-synuclein之间均呈正相关(r=0.246,P=0.019)。结论LRRK2、α-synuclein在PD患者血清高表达,且与患者严重程度有关,为临床PD的诊断提供参考。 展开更多

关键词 富亮氨酸重复激酶2 Α-突触核蛋白 帕金森病

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LRRK2/NF-κB信号对BCG诱导巨噬细胞RAW264.7炎症应答的调控 被引量：2

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作者 王启源 徐红艳 姬文兰 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2018年第3期528-532,共5页

目的:探讨富亮氨酸重复序列激酶2(LRRK2)在巨噬细胞抗结核分枝杆菌感染中的作用机制。方法:用结核分枝杆菌疫苗株卡介苗(BCG)感染巨噬细胞RAW264.7,菌落形成单位(CFU)计数检测结核分枝杆菌生存率;酶联免疫吸附法测定白细胞介素(IL)-1β... 目的:探讨富亮氨酸重复序列激酶2(LRRK2)在巨噬细胞抗结核分枝杆菌感染中的作用机制。方法:用结核分枝杆菌疫苗株卡介苗(BCG)感染巨噬细胞RAW264.7,菌落形成单位(CFU)计数检测结核分枝杆菌生存率;酶联免疫吸附法测定白细胞介素(IL)-1β、IL-6和干扰素γ(IFN-γ)表达水平;q PCR和Western blot法分别检测相关m RNA和蛋白的表达。结果:BCG感染的巨噬细胞RAW264.7中LRRK2的m RNA和蛋白表达均显著上调,并刺激RAW264.7细胞释放大量细胞因子。此外,沉默LRRK2明显抑制BCG感染巨噬细胞的分枝杆菌存活率;同时,沉默LRRK2降低BCG刺激诱导分泌的促炎细胞因子IL-1β、IL-6和IFN-γ。更为重要的是,LRRK2可能通过正调控NF-κB通路调节BCG诱导的炎症应答进程。结论:LRRK2/NF-κB信号正调控BCG刺激诱导的巨噬细胞炎症应答进程。本研究结果为结核病在基因水平上的诊断和治疗提供了实验依据。 展开更多

关键词 富亮氨酸重复序列激酶2 结核分枝杆菌 巨噬细胞 炎症应答

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LRRK2基因G2019S突变帕金森病相关基因的生物信息学分析 被引量：2

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作者 陈光乐 郑文岭 马文丽 《解剖学报》 CAS CSCD 北大核心 2015年第3期304-309,共6页

目的从分子水平揭示富亮氨酸重复激酶2(LRRK2)基因G2019S突变帕金森病的发病机制,为临床诊断及治疗提供新思路。方法在公共基因芯片数据库(GEO)中下载LRRK2基因G2019S突变帕金森病的相关基因芯片数据(GSE22491),其中LRRK2(G2019S)突变... 目的从分子水平揭示富亮氨酸重复激酶2(LRRK2)基因G2019S突变帕金森病的发病机制,为临床诊断及治疗提供新思路。方法在公共基因芯片数据库(GEO)中下载LRRK2基因G2019S突变帕金森病的相关基因芯片数据(GSE22491),其中LRRK2(G2019S)突变帕金森病样本10例,正常控制组样本8例,利用Qlucore Omics Explorer(QOE)3.0软件、DAVID、STRING等在线分析软件对LRRK2基因G2019S突变帕金森病差异基因进行生物信息学分析。结果 QOE3.0分析筛选出1752个LRRK2基因G2019S突变帕金森病差异基因,其中上调191个,下调1561个。对其进行生物信息学分析发现,SKP2、RBX1、SKP1、CUL1、CUL4A等基因以及核糖体信号通路、氧化磷酸化信号通路、蛋白酶体信号通路、白细胞跨内皮迁移信号通路、磷酸戊糖途径信号通路、枸橼酸信号通路、Fcγ受体(FcγR)介导的吞噬通路等在LRRK2基因G2019S突变帕金森病的发生发展中可能起着重要作用。结论通过生物信息学分析LRRK2基因G2019S突变帕金森病相关基因芯片数据,提示LRRK2基因G2019S突变帕金森病发病是多种基因、多种分子机制相互作用的结果,对相关分子机制的进一步分析有利于揭示LRRK2基因G2019S突变帕金森病的发病机制。 展开更多

关键词 富亮氨酸重复激酶2 帕金森病 基因芯片 生物信息学 人

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长链非编码RNA DANCR在甲状腺癌中的研究进展 被引量：2

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作者 钟莉莉 程远娟 +1 位作者 马静茹 赵银龙 《肿瘤研究与临床》 CAS 2021年第4期314-317,共4页

甲状腺癌是最常见的头颈部恶性肿瘤,发病率呈逐年上升趋势。因此探究甲状腺癌的发生、发展机制,开发甲状腺癌诊断标志物和治疗靶点,对提高甲状腺癌的疗效、延长患者生存时间具有重要意义。前期研究中发现长链非编码RNA(lncRNA)DANCR在... 甲状腺癌是最常见的头颈部恶性肿瘤,发病率呈逐年上升趋势。因此探究甲状腺癌的发生、发展机制,开发甲状腺癌诊断标志物和治疗靶点,对提高甲状腺癌的疗效、延长患者生存时间具有重要意义。前期研究中发现长链非编码RNA(lncRNA)DANCR在甲状腺癌中异常高表达,可通过影响miRNA-185-5p及转录因子SMARCB1来促进富含亮氨酸重复序列激酶2(LRRK2)的表达,间接参与细胞自噬而调控甲状腺癌的发展,有望成为甲状腺癌诊断及治疗的新靶点。文章就lncRNA DANCR在甲状腺癌中的调控机制进行介绍,为甲状腺癌的基础研究和临床诊疗提供新思路。 展开更多

关键词 甲状腺肿瘤 长链非编码RNA 富含亮氨酸重复序列激酶2 miRNA-185-5p

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Lrrk2缺失损害内质网蛋白输出的机制研究 被引量：1

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作者 杨璇 刘小鹏 +4 位作者 宋彬彬 武香梅 王浩然 胡月青 于佳 《脑与神经疾病杂志》 2019年第10期611-614,共4页

目的 探讨帕金森病相关蛋白Lrrk2对内质网蛋白输出功能的调节作用及相关机制。方法 利用Lrrk2基因敲除小鼠(Lrrk2^-/-小鼠)及野生型小鼠(Lrrk2^+/+小鼠)获取成纤维细胞和皮质神经元,应用免疫荧光染色法检测Lrrk2缺失对内质网出口位点(ER... 目的 探讨帕金森病相关蛋白Lrrk2对内质网蛋白输出功能的调节作用及相关机制。方法 利用Lrrk2基因敲除小鼠(Lrrk2^-/-小鼠)及野生型小鼠(Lrrk2^+/+小鼠)获取成纤维细胞和皮质神经元,应用免疫荧光染色法检测Lrrk2缺失对内质网出口位点(ERES)形态以及对N-甲基-D-天冬氨酸受体(N-methyl-D-asparticacidreceptor,NMDAR)亚基NR2A输出至胞膜的过程的影响。结果 Lrrk2缺失导致成纤维细胞中ERES直径增大,与内质网至高尔基体蛋白运输抑制剂BrefeldinA(BFA)处理效果类似;Lrrk2缺失抑制了河豚毒素(TTX)所诱导的NR2A蛋白输出至胞膜过程。结论 Lrrk2缺失导致内质网至高尔基体蛋白输出功能障碍,而这种异常会抑制神经元活性依赖的NMDA受体蛋白输出至胞膜的过程。 展开更多

关键词 帕金森病 富亮氨酸重复激酶2 内质网出口位点 Sec16A N-甲基-D-天冬氨酸受体亚基NR2A

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帕金森病与富含亮氨酸重复片段的激酶2、脂酶基因基因多态性的关系 被引量：1

11

作者 晏燕 卢祖能 《中华实验外科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2016年第2期499-501,共3页

目的探讨富含亮氨酸重复片段的激酶2（LRRK2）、脂酶基因（GBA）基因多态性与帕金森病（PD）的相关性。方法选取我院就诊的帕金森患者70例，作为PD组。同时选取70例我院门诊健康体检人员，作为对照组。分别对两组进行LRRK2、GBA基因检... 目的探讨富含亮氨酸重复片段的激酶2（LRRK2）、脂酶基因（GBA）基因多态性与帕金森病（PD）的相关性。方法选取我院就诊的帕金森患者70例，作为PD组。同时选取70例我院门诊健康体检人员，作为对照组。分别对两组进行LRRK2、GBA基因检测，观察其与帕金森病的关系。结果LRRK2中G2385R的变异可能会增加帕金森的发病概率；GBA基因的外显子9、10的核苷酸序列基本相同，未见基因产生突变；观察组LRRK2基因突变率为94．29％，GBA基因突变率为97．14％，均明显高于健康对照组，差异有统计学意义（t=13．276，P〈0．05）。结论LRRK2中的基因变异可能会导致帕金森发病率增加，GBA基因多态性与帕金森病发病无明显相关。 展开更多

关键词 富含亮氨酸重复片段的激酶2 脂酶基因 帕金森病

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富含亮氨酸重复序列激酶2调控自噬影响甲状腺癌可能机制的研究进展

12

作者 王丽星 刘昱 +2 位作者 张铎瀚 赵银龙 钟莉莉 《肿瘤研究与临床》 CAS 2022年第5期387-389,共3页

甲状腺癌是内分泌系统最常见的恶性肿瘤,且发病率逐年上升,严重威胁人们的身体健康。自噬是一种程序性死亡方式,能够作为抗肿瘤治疗潜在的作用靶点,发挥重要的调控作用。富含亮氨酸重复序列激酶2(LRRK2)是由PARK8基因编码的一种蛋白激... 甲状腺癌是内分泌系统最常见的恶性肿瘤,且发病率逐年上升,严重威胁人们的身体健康。自噬是一种程序性死亡方式,能够作为抗肿瘤治疗潜在的作用靶点,发挥重要的调控作用。富含亮氨酸重复序列激酶2(LRRK2)是由PARK8基因编码的一种蛋白激酶。最近研究证实,细胞自噬和甲状腺癌关系密切。文章就LRRK2通过自噬影响甲状腺癌的可能调控机制进行分析,为甲状腺癌的基础研究和临床诊疗提供新思路。 展开更多

关键词 甲状腺肿瘤 自噬 富含亮氨酸重复序列激酶2

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LRRK2基因核心启动子的预测 被引量：1

13

作者 莫晓云 肖和卫 +2 位作者 李丽 杨苏萍 张国 《广西医学》 CAS 2013年第1期38-41,共4页

目的运用生物信息学方法对LRRK2基因的启动子区域进行预测,以指导LRRK2基因核心启动子的克隆,为LRRK2基因的转录调控机制的研究奠定基础。方法在数据库中查询LRRK2基因相关的序列信息,运用多种在线软件对LRRK2基因的转录起始位点、第一... 目的运用生物信息学方法对LRRK2基因的启动子区域进行预测,以指导LRRK2基因核心启动子的克隆,为LRRK2基因的转录调控机制的研究奠定基础。方法在数据库中查询LRRK2基因相关的序列信息,运用多种在线软件对LRRK2基因的转录起始位点、第一个外显子和启动子进行预测,并对预测结果进行综合分析。结果将LRRK2基因脑组织主要剪切本(ENST00000298910,相当于NM_198578)的启动子定位于-803～-1区间。结论 LRRK2基因主要剪切本(ENST00000298910)的启动子区间可能定位于-803～-1区间。 展开更多

关键词 帕金森病 LRRK2 启动子 生物信息学 预测

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他莫昔芬介导小胶质细胞LRRK-2表达对炎症刺激PC12细胞的影响 被引量：1

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作者 卢奎 吴文军 +3 位作者 周敏 黎捷 钟健强 张成 《广西医学》 CAS 2014年第7期861-864,共4页

目的探讨他莫昔芬对小胶质细胞的富含亮氨酸重复序列激酶2(LRRK2)基因及相关炎症因子表达的影响。方法取原代小胶质细胞分为CON组、脂多糖(LPS)组、LPS+他莫昔芬组、LPS+LRRK2组;以LPS刺激激活小胶质细胞,用他莫昔芬调控小胶质细胞激活... 目的探讨他莫昔芬对小胶质细胞的富含亮氨酸重复序列激酶2(LRRK2)基因及相关炎症因子表达的影响。方法取原代小胶质细胞分为CON组、脂多糖(LPS)组、LPS+他莫昔芬组、LPS+LRRK2组;以LPS刺激激活小胶质细胞,用他莫昔芬调控小胶质细胞激活;将各组小胶质细胞与大鼠肾上腺嗜铬瘤细胞(PC12)细胞共培养24 h;Western Blot法检测小胶质细胞的LRRK2、一氧化氮合成酶(iNOS)表达,酶联免疫吸附法(ELISA)测定TNF-α、IL-1β水平;Hochest染核法检测PC12细胞凋亡/存活比。结果他莫昔芬抑制LPS刺激后小胶质细胞的LRRK2表达,通过抑制LRRK2下调iNOS、TNF-α及IL-1β释放,进而降低小胶质细胞与PC12细胞共培养体系炎症表达及PC12细胞凋亡/存活比。结论 LRRK2是小胶质细胞炎症因子iNOS释放的上游调控靶点,他莫昔芬可通过调控LRRK2基因抑制小胶质细胞激活,从而减轻炎症相关多巴胺能神经元损伤。 展开更多

关键词 帕金森病 他莫昔芬 富含亮氨酸重复序列激酶2 小胶质细胞 肾上腺嗜铬瘤细胞

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亮氨酸丰富重复激酶2对大鼠脑出血神经行为与神经元的影响 被引量：1

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作者 赵云洁 鲍刚 《中华生物医学工程杂志》 CAS 2020年第5期417-421,共5页

目的探讨亮氨酸丰富重复激酶2(LRRK2)对大鼠脑出血神经行为与神经元的影响。方法SD大鼠30只随机分为假手术组、模型组、干预组,每组10只,通过向脑内注入自体动脉血制备脑出血大鼠模型,模型组按照上述方法造模,假手术组脑内注射无菌生理... 目的探讨亮氨酸丰富重复激酶2(LRRK2)对大鼠脑出血神经行为与神经元的影响。方法SD大鼠30只随机分为假手术组、模型组、干预组,每组10只,通过向脑内注入自体动脉血制备脑出血大鼠模型,模型组按照上述方法造模,假手术组脑内注射无菌生理盐水,干预组在造模6 h前腹腔注射LRRK2抑制剂GNE-7915。造模后第3 d,采用神经行为学评分评价各组神经行为学能力,采用蛋白质印迹法检测各组脑组织中LRRK2蛋白表达量,采用尼氏染色检测各组神经元细胞大小,采用原位末端标记法(TUNEL)检测各组TUNEL阳性细胞数。结果模型组LRRK2蛋白表达量、神经行为学评分、TUNEL阳性细胞数[(2.62±0.86)、(4.49±1.23)分、(6.22±2.48)个/视野]高于假手术组[(0.45±0.09)、(0.60±0.07)分、(0.92±0.06)个/视野](P<0.05),干预组LRRK2蛋白表达量、神经行为学评分、TUNEL阳性细胞数[(1.53±0.45)、(2.25±0.69)分、(3.59±1.45)个/视野]低于模型组[(2.62±0.86)、(4.49±1.23)分、(6.22±2.48)个/视野](P<0.05);模型组神经元细胞大小[(200.41±23.30)μm^(2)]低于假手术组[(302.48±48.87)μm^(2)](P<0.05),干预组神经元细胞大小[(248.36±32.26)μm^(2)]高于模型组[(200.41±23.30)μm^(2)](P<0.05)。结论抑制LRRK2能够减少脑出血大鼠神经元凋亡,改善神经行为学能力。 展开更多

关键词 亮氨酸丰富重复激酶2 脑出血 神经行为学 神经元 凋亡

原文传递

LRRK2调节纹状体神经元多巴胺受体1含量及机制

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作者 杨璇 刘小鹏 +4 位作者 彭宇 甄然 宋彬彬 李阔 于佳 《医学研究杂志》 2021年第2期28-32,共5页

目的探讨帕金森病相关蛋白LRRK2对纹状体神经元中多巴胺受体D1R含量的影响以及相关机制。方法利用组织免疫荧光染色法检测LRRK2基因敲除小鼠、LRRK2 G2019S突变基因敲入小鼠和R1441C突变基因敲入小鼠纹状体神经元中D1R含量的改变。并利... 目的探讨帕金森病相关蛋白LRRK2对纹状体神经元中多巴胺受体D1R含量的影响以及相关机制。方法利用组织免疫荧光染色法检测LRRK2基因敲除小鼠、LRRK2 G2019S突变基因敲入小鼠和R1441C突变基因敲入小鼠纹状体神经元中D1R含量的改变。并利用cathepsin D免疫荧光标记溶酶体,检测LRRK2基因敲除、LRRK2 G2019S和R1441C突变对蛋白降解的影响。结果 LRRK2基因敲除小鼠、LRRK2 G2019S和R1441C基因敲入小鼠纹状体中D1R荧光强度均显著下降。LRRK2基因敲除小鼠、LRRK2 G2019S和R1441C基因敲入小鼠纹状体神经元中溶酶体数目均显著增加,LRRK2 G2019S和R1441C基因敲入小鼠纹状体神经元中溶酶体大小增加,LRRK2基因敲除小鼠、LRRK2 G2019S和R1441C基因敲入小鼠纹状体神经元内与溶酶体共定位的D1R显著增加。结论 LRRK2基因敲除、LRRK2 G2019S和R1441C突变导致纹状体D1R的含量下降。LRRK2基因敲除、LRRK2 G2019S和R1441C突变提高小鼠纹状体神经元蛋白降解水平,D1R降解加强,从而使得纹状体神经元内D1R含量下降。 展开更多

关键词 帕金森病 富亮氨酸重复激酶2 多巴胺受体1 溶酶体

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VPS35WT逆转LRRK2G2019S所致的非神经细胞的tau蛋白过度磷酸化及相关功能缺陷

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作者 王纬 王杰 +2 位作者 沈华超 叶民 丁新生 《中国临床神经科学》 2019年第5期481-486,共6页

目的探究逆膜复合体亚基VPS35对富亮氨酸重复激酶2(LRRK2)G2019S所导致的tau蛋白功能缺陷的影响。方法采用HeLa细胞转染过表达LRRK2G2019S质粒(LRRK2G2019S组)、囊泡分选蛋白35(VPS35)WT质粒(VPS35WT组)、共转染VPS35WT+LRRK2G2019S(VPS... 目的探究逆膜复合体亚基VPS35对富亮氨酸重复激酶2(LRRK2)G2019S所导致的tau蛋白功能缺陷的影响。方法采用HeLa细胞转染过表达LRRK2G2019S质粒(LRRK2G2019S组)、囊泡分选蛋白35(VPS35)WT质粒(VPS35WT组)、共转染VPS35WT+LRRK2G2019S(VPS35WT+LRRK2G2019S共转染组)和空载对照组(对照组)。采用Western blot法和免疫荧光组化法检测HeLa细胞内tau蛋白磷酸化水平、细胞骨架形态及在低剂量毒物作用下细胞死亡率的变化。结果VPS35WT+LRRK2G2019S共转染可以进一步逆转过表达LRRK2G2019S的HeLa细胞的tau蛋白磷酸化,稳定细胞骨架,提高细胞对毒物的抵抗力,降低细胞的死亡率(均P<0.01)。结论VPS35WT可以逆转LRRK2G2019S所致的HeLa细胞相关功能障碍。 展开更多

关键词 囊泡分选蛋白35 富亮氨酸重复激酶2 TAU蛋白磷酸化 HELA细胞

原文传递

LRRK2基因Gly2385Arg多态性与中国散发性帕金森病相关性的Meta分析

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作者 刘鹏 陈林喜 +1 位作者 柯绍发 周元林 《中国现代医生》 2019年第11期28-31,36,共5页

目的探讨富含亮氨酸重复序列激酶2(LRRK2)基因Gly2385Arg多态性与中国散发性帕金森病的相关性。方法运用Pubmed、Embase、The Cochrane Library、中国期刊全文数据库、万方数据库、维普数据库及中国生物医学文献数据库检索自建库至2017... 目的探讨富含亮氨酸重复序列激酶2(LRRK2)基因Gly2385Arg多态性与中国散发性帕金森病的相关性。方法运用Pubmed、Embase、The Cochrane Library、中国期刊全文数据库、万方数据库、维普数据库及中国生物医学文献数据库检索自建库至2017年12月发表的关于LRRK2基因Gly2385Arg多态性与中国散发性帕金森病相关性的病例对照研究。采用Review Manager 5.3进行数据分析。结果共纳入15项病例对照研究,其中包含7112例帕金森病患者和6222例对照者。最终Meta分析提示LRRK2基因Gly2385Arg多态性与中国人群散发性帕金森病显著相关(A vs G:OR=2.68,95%CI=2.06~3.47,P<0.00001;AA+AG vs GG:OR=2.76,95%CI=2.11~3.62,P<0.00001)。在亚组分析中,该位点与中国大陆地区散发性帕金森病显著相关(A vs G:OR=2.97,95%CI=2.15~4.10,P<0.00001;AA+AG vs GG:OR=3.07,95%CI=2.19~4.29,P<0.00001)。该位点与中国台湾地区散发性帕金森病显著相关(A vs G:OR=2.10,95%CI=1.32~3.37,P=0.002;AA+AG vs GG:OR=2.17,95%CI=1.34~3.51,P=0.002)。结论 LRRK2基因Gly2385Arg多态性与中国散发性帕金森病易感性相关。且中国大陆地区人群Gly2385Arg位点基因A携带者患帕金森病的风险较中国台湾地区人群更高。Gly2385Arg可作为中国散发性帕金森病高危人群的筛选标志。 展开更多

关键词 富含亮氨酸重复序列激酶2 基因多态性 帕金森病 META分析

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LRRK2调控ERES支架蛋白Sec16A分布的研究

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作者 杨璇 王宇 +1 位作者 宋彬彬 于佳 《脑与神经疾病杂志》 2019年第12期732-735,共4页

目的探讨LRRK2和内质网出口位点(ERES)支架蛋白Sec16A之间的相互作用,以及LRRK2对细胞中Sec16A分布的影响。方法利用Lrrk2基因敲除小鼠(Lrrk2^-/-小鼠)及野生型小鼠(Lrrk2^+/+小鼠),应用免疫共沉淀实验和蔗糖梯度离心实验检测LRRK2和Sec... 目的探讨LRRK2和内质网出口位点(ERES)支架蛋白Sec16A之间的相互作用,以及LRRK2对细胞中Sec16A分布的影响。方法利用Lrrk2基因敲除小鼠(Lrrk2^-/-小鼠)及野生型小鼠(Lrrk2^+/+小鼠),应用免疫共沉淀实验和蔗糖梯度离心实验检测LRRK2和Sec16A之间的相互作用,应用免疫染色实验观察LRRK2表达缺失对细胞中Sec16A的分布的影响。结果免疫共沉淀实验显示Lrrk2^+/+小鼠脑皮质中内源性的LRRK2和Sec16A存在相互作用;蔗糖梯度离心实验显示LRRK2和Sec16A存在于相同组分中;免疫荧光染色结果显示小鼠原代成纤维细胞中LRRK2缺失导致Sec16A异常弥散分布。结论LRRK2和Sec16A存在相互作用,二者之间的相互作用可能促进Sec16A锚定于ERES。 展开更多

关键词 帕金森病 富亮氨酸重复激酶2 内质网出口位点 Sec16A

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槲皮素对LRRK2突变转基因PD模型果蝇的治疗作用 被引量：6

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作者 李杰 郭青 +3 位作者 马超 陈健 朱益 刘朝晖 《西安交通大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2020年第5期683-689,共7页

目的研究槲皮素对富亮氨酸重复激酶2(leucine-rich repeat kinase 2,LRRK2)基因突变所致帕金森病(Parkinson s disease,PD)模型果蝇的作用及其机制。方法杂交获得的PD转基因模型果蝇Ddc-Gal4;UAS-LRRK2/G2019S能在多巴胺神经元表达G2019... 目的研究槲皮素对富亮氨酸重复激酶2(leucine-rich repeat kinase 2,LRRK2)基因突变所致帕金森病(Parkinson s disease,PD)模型果蝇的作用及其机制。方法杂交获得的PD转基因模型果蝇Ddc-Gal4;UAS-LRRK2/G2019S能在多巴胺神经元表达G2019S突变LRRK2,使用浓度为1、10、100μmol/L的槲皮素加药标准玉米培养基饲养,PD模型组和空白对照组使用不加药培养基,观察槲皮素对PD模型果蝇寿命和运动能力的生物学效应;取果蝇脑进行TH免疫荧光染色观察多巴胺神经元存活情况;取果蝇脑组织行蛋白免疫印迹检测TH、GCLC、p-LRRK2、p-p38MAPK等蛋白的表达。结果与对照组相比,10μmol/L的槲皮素对果蝇寿命及改善果蝇运动能力效果最佳,果蝇在第6周时运动能力出现显著改变,PD模型果蝇脑内多巴胺神经元的丢失明显得到保护。和未用药对照组果蝇相比,槲皮素降低了PD转基因模型果蝇的磷酸化LRRK2的水平(P<0.05),显示了抑制PD模型果蝇LRRK2激酶活性的作用。此外,槲皮素还可以活化抗氧化信号通路和抑制p38MAPK信号通路。结论槲皮素能通过活化抗氧化信号通路和抑制LRRK2激酶活性,进一步调节MAPK信号转导通路,起到降低LRRK2突变在PD转基因模型果蝇的神经毒性,保护脑内多巴胺神经元的作用。 展开更多

关键词 帕金森病 富亮氨酸重复激酶2 槲皮素 多巴胺能神经元

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