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棉花Lea蛋白D-113基因启动子的克隆及序列分析 被引量:13
1
作者 罗克明 郭余龙 +2 位作者 肖月华 侯磊 裴炎 《Acta Genetica Sinica》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2002年第2期161-165,T001,共6页
为研究植物Lea (lateembryogenesisabundant)蛋白基因启动子在种子中的特异性表达 ,通过PCR扩增 ,从棉花(Gossypiumhirsutumcv .Coker312 )中克隆了Lea蛋白基因家族中D - 113基因上游 10 2 4bp的调控序列。DNA序列分析结果表明 ,该片段... 为研究植物Lea (lateembryogenesisabundant)蛋白基因启动子在种子中的特异性表达 ,通过PCR扩增 ,从棉花(Gossypiumhirsutumcv .Coker312 )中克隆了Lea蛋白基因家族中D - 113基因上游 10 2 4bp的调控序列。DNA序列分析结果表明 ,该片段与已报道的Lea蛋白基因同一家族该基因的对应序列同源性达 90 %以上。将该启动子序列与GUS基因融合 ,构建成表达载体后 ,通过基因枪轰击导入到经ABA诱导处理的棉花胚性愈伤组织和油菜种子以及棉花的根、茎、叶中 ,组织化学分析结果表明 ,D - 113基因启动子在胚中特异性表达。 展开更多
关键词 胚胎后期丰富性蛋白 D-113基因 启动子分析 棉花 克隆 序列分析
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Identification and Characterization of a LEA-like Gene, CaMF5,Specifically Expressed in the Anthers of Male-fertile Capsicum annuum 被引量:6
2
作者 Yudan Wang Guoju Chen +2 位作者 Jianjun Lei Bihao Cao Changming Chen 《Horticultural Plant Journal》 2020年第1期39-48,共10页
To improve the understanding of molecular mechanisms of anther and/or pollen development in Chili pepper, in the present study, fulllength cDNA and DNA sequences of the pollen development-related gene CaMF5 were obtai... To improve the understanding of molecular mechanisms of anther and/or pollen development in Chili pepper, in the present study, fulllength cDNA and DNA sequences of the pollen development-related gene CaMF5 were obtained from the anthers of a Capsicum annuum nuclear male-fertile line. Sequence analysis indicated that the full length of CaMF5 was 747 bp, containing a maximum opening reading frame of 447 bp.Amino acid sequence alignment and phylogenetic analysis revealed that CaMF5 shared approximately 37%–77% homology with a series of uncharacterized or hypothetical proteins and late embryogenesis abundant(LEA) proteins from other plants. However, no LEA structural domain was detected in CaMF5, which indicated that it might be a new type of LEA gene. CaMF5 was only expressed in flower buds at stages 7 and 8 and in open flowers of the male-fertile line, whereas it exhibited no expression in any examined organs of the male-sterile line. In addition, CaMF5 showed the highest transcript abundance in the anthers of the male-fertile line, with no expression being detected in any other examined organs, such as the sepals, petals, pistils, roots, stems, or leaves. Taken together, our results suggest that CaMF5 is an anther-specific gene that might encode a new type of LEA protein related to anther and/or pollen development in C. annuum. 展开更多
关键词 Capsicum annuum CaMF5 Anther-specific gene late embryogenesis abundant Expression analysis
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番木瓜干旱胁迫相关CpDHN1基因的克隆与分析 被引量:3
3
作者 郭静远 邹智 +2 位作者 孔华 贺萍萍 郭安平 《热带作物学报》 CSCD 北大核心 2021年第12期3492-3499,共8页
番木瓜(Carica papaya L.)隶属于番木瓜科番木瓜属,是一种营养价值高的热带果树,广泛种植于热带和亚热带地区。作为全年结果的典型热带作物,番木瓜易受寒害、旱害等非生物胁迫的影响。然而,目前有关番木瓜的抗逆研究主要集中于导致绝产... 番木瓜(Carica papaya L.)隶属于番木瓜科番木瓜属,是一种营养价值高的热带果树,广泛种植于热带和亚热带地区。作为全年结果的典型热带作物,番木瓜易受寒害、旱害等非生物胁迫的影响。然而,目前有关番木瓜的抗逆研究主要集中于导致绝产的病毒病,鲜见针对非生物胁迫的报道。脱水素又名第二类胚胎发育晚期丰富蛋白,属于亲水性高、富含甘氨酸、复杂度低的非结构蛋白,因其与生物的抗逆性密切相关而受到广泛关注。为解决番木瓜生产在地域上的局限性,并进一步提高其品质和产量,积极筛选和鉴定参与非生物胁迫响应的关键基因具有重要的理论意义和应用价值。本研究基于转录组获得的CpDHN1转录本序列,以‘台农二号’番木瓜组培苗叶片为材料,提取总RNA进行反转录,结合RT-PCR技术克隆了该基因636 bp的全长编码区序列,在此基础上对其进行序列、表达特性以及原核表达分析。结果显示,CpDHN1编码211个氨基酸,其理论分子量为24.09 kDa,等电点为5.05,总平均疏水指数为–1.584,不稳定系数为66.51,属于不稳定、高度亲水的细胞核定位蛋白。CpDHN1蛋白富含谷氨酸、赖氨酸和丝氨酸,含有3个保守区域,即2个K片段和1个S片段,符合脱水素蛋白的基本结构特征,属于SKn型脱水素。生物信息学分析表明CpDHN1无跨膜螺旋,其二级结构中以α-螺旋结构占主导。表达分析显示,该基因在根、叶片和韧皮部树液中均有表达,且其表达水平受干旱胁迫调控。同源分析表明,CpDHN1与拟南芥AtLEA4序列相似性最高,为46.8%,而与番木瓜中已报导的另一个脱水素CpDHN的相似性仅为19.4%。研究还构建了CpDHN1的原核表达载体,根据SDS-PAGE结果,CpDHN1在40 kDa处有条中强度的诱导条带,而在55 kDa处有条高亮的诱导条带,可能与其无规结构有关。这些结果为进一步的功能分析与应用奠定了坚实的基础。 展开更多
关键词 番木瓜 胚胎发育晚期丰富蛋白 脱水素 干旱胁迫 原核表达
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植物耐盐性的分子生物学研究进展 被引量:30
4
作者 卢青 《生物学杂志》 CAS CSCD 2000年第4期9-11,共3页
研究证明植物的耐盐机制十分复杂 ,它与植物的小分子物质的积累 ,离子摄入和区域化 ,以及基因表达和大分子蛋白质的合成有关 ,如调渗蛋白、通道蛋白、晚期胚胎发生富集蛋白。同时 ,利用克隆技术分离到了一些盐诱导基因。现将这部分工作... 研究证明植物的耐盐机制十分复杂 ,它与植物的小分子物质的积累 ,离子摄入和区域化 ,以及基因表达和大分子蛋白质的合成有关 ,如调渗蛋白、通道蛋白、晚期胚胎发生富集蛋白。同时 ,利用克隆技术分离到了一些盐诱导基因。现将这部分工作做一综述。 展开更多
关键词 小分子物质 基因表达 盐诱导基因 植物 耐盐性
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Two New Group 3 LEA Genes of Wheat and Their Functional Analysis in Yeast 被引量:19
5
作者 Jia-Ning YU Jin-Song ZHANG +1 位作者 Lun SHAN Shou-Yi CHEN 《Journal of Integrative Plant Biology》 SCIE CAS CSCD 2005年第11期1372-1381,共10页
The group 3 late embryogenesis abundant (LEA) proteins are thought to protect cells from stresses associated with dehydration during periods of water deficit. To investigate the functions of different members of the... The group 3 late embryogenesis abundant (LEA) proteins are thought to protect cells from stresses associated with dehydration during periods of water deficit. To investigate the functions of different members of the group 3 LEA genes, we isolated and characterized two new group 3 LEA genes, namely TaLEA2 and TaLEA3, from wheat (Triticum aestivum L.) and introduced TaLEA2 and TaLEA3 into Saccharmyces cerevisiae to examine the effect of these genes on yeast cell tolerance to osmotic, salt, and cold stresses. The TaLEA2 gene encoded a protein of 211 amino acids and possessed five repeats of 11-mer amino acid motifs. The TaLEA3 gene encoded a polypeptide of 211 amino acids with nine repeated units. Overexpression of TaLEA2 and TaLEA3 improved stress tolerance in transgenic yeast cells when cultured in medium containing sorbitol, salt and-20℃ freezing treatments respectively. However, the yeast transformants with TaLEA2 seemed to be more tolerant to hyperosmotic and freezing stress than transformants with TaLEA3. This implies that a close relationship exists between function and the number of repeats of the 11- mer amino acid motif in the group 3 LEA protein. 展开更多
关键词 late embryogenesis abundant (LEA) protein Saccharmyces cerevisiae stress tolerance wheat.
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转晚期胚胎发生丰富蛋白(LEA)基因棉花及抗旱性分析 被引量:19
6
作者 裴金玲 杨红兰 +4 位作者 李春平 张大伟 李小双 蔡明 张道远 《分子植物育种》 CAS CSCD 北大核心 2012年第3期331-337,共7页
本研究将紫杆柽柳(Tamarix and rossowii Litv)晚期胚胎发生丰富蛋白(LEADQ663481)基因导入新疆早熟棉新陆早18号,通过冬季海南加代、夏季新疆继代的方法获得T3代转基因棉花株系。从40株大田卡那霉素检测阳性植株中,经过PCR筛选证明3株... 本研究将紫杆柽柳(Tamarix and rossowii Litv)晚期胚胎发生丰富蛋白(LEADQ663481)基因导入新疆早熟棉新陆早18号,通过冬季海南加代、夏季新疆继代的方法获得T3代转基因棉花株系。从40株大田卡那霉素检测阳性植株中,经过PCR筛选证明3株为阳性的转化株。在室内条件下,对转化株幼苗进行水培实验,并用12%(w/v)PEG-6000处理12h模拟干旱胁迫。结果显示,干旱胁迫之后,转LEA基因棉花基因表达量显著增加;丙二醛生成量显著降低;游离脯氨酸、可溶性糖、可溶性蛋白的生成量显著增加;棉花表型分析也证明了转LEA基因棉花抗旱性有提高。培养45d后,转LEA基因棉花的生物量高于非转基因棉花。本研究结果表明,在干旱胁迫条件下,转LEA基因棉花表现出了优良的生长和生理优势,显示出转LEA基因棉花能提高棉花的抗旱能力。 展开更多
关键词 棉花(Gossypium hirsutum L.) 晚期胚胎发生丰富蛋白基因 转基因 抗旱性
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植物胚胎发育晚期丰富蛋白的结构与功能 被引量:11
7
作者 周丽 姬向楠 +2 位作者 何非 潘秋红 段长青 《热带生物学报》 2012年第2期191-196,共6页
胚胎发育晚期丰富蛋白(LEA蛋白)是植物在逆境条件下生成的一类应激蛋白,它可以通过稳定细胞膜、结合金属离子等机制提高植物的抗逆性。笔者对植物LEA蛋白的分类及其相应的结构,以及LEA蛋白响应干旱、低温及其他胁迫响应中功能的研究进... 胚胎发育晚期丰富蛋白(LEA蛋白)是植物在逆境条件下生成的一类应激蛋白,它可以通过稳定细胞膜、结合金属离子等机制提高植物的抗逆性。笔者对植物LEA蛋白的分类及其相应的结构,以及LEA蛋白响应干旱、低温及其他胁迫响应中功能的研究进展进行了综述。 展开更多
关键词 植物抗逆性 胚胎发育晚期丰富蛋白 结构 功能
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花生中三个LEA基因的克隆与表达分析 被引量:11
8
作者 赵小波 张廷婷 +5 位作者 闫彩霞 李春娟 王娟 张浩 石程仁 单世华 《花生学报》 北大核心 2016年第4期14-19,共6页
胚胎发生晚期丰富蛋白(LEA)是一类受发育阶段及脱水信号调节的脱水保护蛋白,在响应植物干旱、低温、高盐等逆境胁迫中具有重要功能。本研究在转录组数据分析时,发现3个LEA基因在花生干旱胁迫时大量上调表达。利用RACE技术以及生物信息... 胚胎发生晚期丰富蛋白(LEA)是一类受发育阶段及脱水信号调节的脱水保护蛋白,在响应植物干旱、低温、高盐等逆境胁迫中具有重要功能。本研究在转录组数据分析时,发现3个LEA基因在花生干旱胁迫时大量上调表达。利用RACE技术以及生物信息学方法,发现这三个基因分别属于LEA2、LEA3以及LEA4。通过序列比对进行进化分析,结果表明其均与Arachis duranensis,A.ipaensis相关基因具有极高相似度,印证了栽培花生来源于Arachis duranensis和A.ipaensis的研究结果。通过表达分析发现,正常状态下这三个基因在花生根、茎、叶中均有表达;干旱胁迫状态下,花生根部的LEA基因大量表达,暗示其在花生抗旱机制中发挥重要作用。本研究结果可为筛选新的抗旱花生种质提供理论依据。 展开更多
关键词 花生 胚胎发生晚期丰富蛋白 干旱 转录组
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沙冬青胚胎晚期发生丰富蛋白基因序列及表达特性分析 被引量:10
9
作者 师静 刘美芹 +3 位作者 史军娜 赵晓鑫 卢存福 尹伟伦 《北京林业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2012年第4期114-119,共6页
从沙冬青叶片EST文库中获得了胚胎晚期发生丰富蛋白(LEA)基因cDNA全长序列,命名为AmLEA14。序列分析表明该基因全长579bp,含有一个459bp编码152个氨基酸的开放阅读框,推测编码的蛋白质分子质量为16.6ku。二级结构预测显示此编码蛋白属于... 从沙冬青叶片EST文库中获得了胚胎晚期发生丰富蛋白(LEA)基因cDNA全长序列,命名为AmLEA14。序列分析表明该基因全长579bp,含有一个459bp编码152个氨基酸的开放阅读框,推测编码的蛋白质分子质量为16.6ku。二级结构预测显示此编码蛋白属于第4类LEA蛋白。系统发生分析表明,此编码蛋白与大豆LEA14蛋白(P46519.1)的亲缘关系最近。荧光定量PCR结果显示,AmLEA14的表达量在低温、干旱、盐胁迫条件下升高,但是主要在低温胁迫后期富集。推测AmLEA14基因可能在沙冬青抵御低温、干旱、盐胁迫中发挥作用,主要是参与沙冬青的低温防御机制。 展开更多
关键词 沙冬青 胚胎晚期发生丰富蛋白 序列分析 表达分析
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棉花种子特异表达的LEA启动子克隆及功能验证 被引量:9
10
作者 刘峰 汪小东 +1 位作者 赵彦鹏 孙杰 《棉花学报》 CSCD 北大核心 2014年第4期310-317,共8页
以棉花品种新陆早33号为材料,克隆获得其胚胎发育晚期丰富蛋白LEA基因的种子特异性启动子。启动子序列全长为1228bp;作用元件分析表明该区域除了具有启动子核心调控序列外,还含有多个与组织特异性、激素、逆境等表达相关的顺式作用元件,... 以棉花品种新陆早33号为材料,克隆获得其胚胎发育晚期丰富蛋白LEA基因的种子特异性启动子。启动子序列全长为1228bp;作用元件分析表明该区域除了具有启动子核心调控序列外,还含有多个与组织特异性、激素、逆境等表达相关的顺式作用元件,如E-box、ABRE元件、A-box等。与已报道的棉花品种Coker 201的LEA基因D34的5'端上游调控序列1212bp相比,两者具有97%的一致性。拟南芥遗传转化的功能分析结果表明,所克隆的序列能驱动GUS基因在种子中特异表达,且GUS主要在转基因植物的种子发育后期表达;其表达强度要弱于组成型的CaMV35S启动子。研究结果不仅有助于进一步深入认识棉花LEA基因功能及其表达调控规律,也为植物遗传转化提供组织特异性的启动子。 展开更多
关键词 棉花 种子特异性启动子 胚胎发育晚期丰富蛋白
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胚胎晚期富集蛋白与生物的干旱胁迫耐受性 被引量:8
11
作者 刘昀 刘国宝 +2 位作者 李冉辉 邹永东 郑易之 《生物工程学报》 CAS CSCD 北大核心 2010年第5期569-575,共7页
胚胎晚期富集蛋白(Late embryogenesis abundant,LEA)是参与生物体抵抗干旱胁迫的一类重要蛋白。LEA蛋白可分为7组。大多数LEA蛋白具有亲水性及热稳定性。LEA蛋白在水溶液中通常为无折叠状态,但脱水胁迫可诱导其转变为α-螺旋。近年来关... 胚胎晚期富集蛋白(Late embryogenesis abundant,LEA)是参与生物体抵抗干旱胁迫的一类重要蛋白。LEA蛋白可分为7组。大多数LEA蛋白具有亲水性及热稳定性。LEA蛋白在水溶液中通常为无折叠状态,但脱水胁迫可诱导其转变为α-螺旋。近年来关于LEA蛋白的研究取得了较多进展。研究结果表明LEA蛋白可定位于细胞内的多种细胞器中,且LEA蛋白可能具有多重保护作用,如保护蛋白质及酶活性、或保护细胞的膜结构、或具有抗氧化作用、结合离子或保护DNA等。以下主要介绍了LEA蛋白的功能、二级结构及保护作用机制。 展开更多
关键词 胚胎晚期富集蛋白 干旱胁迫 亚细胞定位 蛋白质二级结构 多重保护功能
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转MsLEA4-4基因拟南芥株系的耐盐性分析 被引量:7
12
作者 贾会丽 王学敏 +6 位作者 高涛 石永红 王运琦 吴欣明 刘建宁 方志红 董宽虎 《草地学报》 CAS CSCD 北大核心 2020年第3期597-605,共9页
为了深入研究紫花苜蓿(Medicago sativa)MsLEA4-4基因的抗逆性,本试验对前期获得的转MsLEA4-4基因的拟南芥(Arabidopsis thaliana)株系进行不同浓度盐胁迫处理,以验证MsLEA4-4基因在拟南芥植株体内的耐盐性。试验结果表明:盐胁迫后转基... 为了深入研究紫花苜蓿(Medicago sativa)MsLEA4-4基因的抗逆性,本试验对前期获得的转MsLEA4-4基因的拟南芥(Arabidopsis thaliana)株系进行不同浓度盐胁迫处理,以验证MsLEA4-4基因在拟南芥植株体内的耐盐性。试验结果表明:盐胁迫后转基因株系的发芽率达到55%,比对照植株(Control plant,CK)高81%;转基因株系的鲜重、叶绿素含量均高于CK(P<0.05);盐胁迫后转基因株系的存活率比CK提高75.0%~81.3%;盐胁迫明显抑制根系生长,但转基因植株的侧根数量比CK多4~5根(P<0.05);盐胁迫后转基因株系体内的可溶性糖含量(P<0.05)和超氧化物歧化酶(P<0.01),过氧化氢酶(P<0.01),过氧化物酶(P<0.05)活性均高于CK,脯氨酸(P<0.01)和丙二醛(P<0.05)含量均低于CK。综上可得,MsLEA4-4基因参与了拟南芥体内的耐盐性调控,提高了转基因拟南芥对盐胁迫的耐受性。本研究为进一步探索MsLEA4-4在转基因紫花苜蓿盐胁迫中的功能及培育耐盐性紫花苜蓿品种提供依据。 展开更多
关键词 紫花苜蓿 盐胁迫 胚胎晚期富集蛋白 拟南芥
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紫花苜蓿MsLEA4-4基因的克隆、表达分析及遗传转化 被引量:7
13
作者 贾会丽 王学敏 +6 位作者 郭继承 高洪文 吴欣明 刘建宁 石永红 董宽虎 王运琦 《草业学报》 CSCD 北大核心 2017年第12期108-116,共9页
胚胎晚期富集蛋白(LEA)广泛参与植物对多种逆境胁迫的反应。本研究利用同源克隆的方法,从紫花苜蓿中克隆了一个LEA4类基因的开放阅读框(ORF),命名为Ms LEA4-4。该基因编码512个氨基酸,结构分析显示MsLEA4-4包含5个重复的由11个氨基酸TAQ... 胚胎晚期富集蛋白(LEA)广泛参与植物对多种逆境胁迫的反应。本研究利用同源克隆的方法,从紫花苜蓿中克隆了一个LEA4类基因的开放阅读框(ORF),命名为Ms LEA4-4。该基因编码512个氨基酸,结构分析显示MsLEA4-4包含5个重复的由11个氨基酸TAQAAKEKTQQ组成的序列特征。利用实时荧光定量PCR检测了Ms LEA4-4在不同逆境下的表达量,结果显示,该基因受干旱、NaCl、Cu^(2+)、Zn^(2+)和外源ABA诱导表达上调,其中Na Cl胁迫2h、Cu2+和Zn2+胁迫8 h,Ms LEA4-4基因表达量最高;冷胁迫和干旱胁迫下,该基因的表达量随处理时间的延长呈逐渐上升趋势,表明该基因可能参与了紫花苜蓿的抗逆性调控。构建植物超表达载体p CAMBIA3301-Ms LEA4-4,采用农杆菌介导法侵染拟南芥花序,通过草铵膦(PPT)筛选和分子检测,7株抗性苗呈阳性,表明目的基因已成功导入拟南芥基因组中。本研究为进一步探索Ms LEA4-4基因在紫花苜蓿抗逆性调控中的作用奠定了基础。 展开更多
关键词 紫花苜蓿 胚胎晚期富集蛋白(LEA) 逆境胁迫 遗传转化
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扁蓿豆MrLEA2基因的克隆和原核表达 被引量:5
14
作者 马超 沈迎芳 +1 位作者 吴小培 王海庆 《西北植物学报》 CAS CSCD 北大核心 2014年第10期1944-1950,共7页
从扁蓿豆(Medicago ruthenica L.)幼苗中克隆到一个编码晚期胚胎发生丰富蛋白的基因MrLEA2,Pfam数据库检索表明其编码产物属于LEA_2蛋白家族。半定量RT-PCR分析发现MrLEA2在幼苗中表达水平不受非生物胁迫(脱水、高盐和低温)和脱落酸诱... 从扁蓿豆(Medicago ruthenica L.)幼苗中克隆到一个编码晚期胚胎发生丰富蛋白的基因MrLEA2,Pfam数据库检索表明其编码产物属于LEA_2蛋白家族。半定量RT-PCR分析发现MrLEA2在幼苗中表达水平不受非生物胁迫(脱水、高盐和低温)和脱落酸诱导。利用MrLEA2基因构建原核表达载体,在大肠杆菌中实现了过量表达。通过斑点试验和菌落计数实验,对过量表达MrLEA2蛋白的大肠杆菌细胞在高盐(0.5mol/L NaCl和0.5mol/L KCl)、55℃高温和-20℃冷冻胁迫处理下的生长存活情况检测发现,MrLEA2蛋白过量表达能够明显提高大肠杆菌对上述胁迫的耐受性。研究表明,MrLEA2蛋白对高盐和温度胁迫引起的细胞损伤具有保护作用。 展开更多
关键词 扁蓿豆 晚期胚胎发生丰富蛋白 大肠杆菌 过量表达 盐胁迫 温度胁迫
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药用野生稻OoLEA1基因的克隆和生物信息学分析 被引量:4
15
作者 张大燕 李红梅 +3 位作者 李培纲 张帅 陈志雄 李亚娟 《分子植物育种》 CAS CSCD 北大核心 2017年第5期1597-1602,共6页
药用野生稻积累了丰富的遗传多样性和有利基因,是水稻遗传改良的重要基础资源。LEA蛋白在植物抗逆反应起着重要的作用。本研究在药用野生稻干旱胁迫差异转录谱数据分析基础上,利用RT-PCR方法从药用野生稻克隆了OoLEA1基因,OoLEA1的开放... 药用野生稻积累了丰富的遗传多样性和有利基因,是水稻遗传改良的重要基础资源。LEA蛋白在植物抗逆反应起着重要的作用。本研究在药用野生稻干旱胁迫差异转录谱数据分析基础上,利用RT-PCR方法从药用野生稻克隆了OoLEA1基因,OoLEA1的开放阅读框长度为603 bp,编码一个由200个氨基酸残基组成的蛋白,分子量为20.73 k D,理论等电点为6.61。OoLEA1蛋白含有4个LEA_4结构域、8个α-螺旋构象和1个β-片层构象,该蛋白为亲水蛋白。OoLEA1受干旱和高温诱导表达,说明OoLEA1可能在水稻抗旱和抗高盐胁迫中发挥作用。 展开更多
关键词 水稻 药用野生稻 胚胎发育后期丰富蛋白 非生物胁迫
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异源表达CkLEA1基因增强了拟南芥对非生物胁迫的耐受性 被引量:4
16
作者 于秀敏 岳文冉 +4 位作者 张燕娜 杨飞芸 王瑞刚 李国婧 杨杞 《中国生物工程杂志》 CAS CSCD 北大核心 2016年第10期28-34,共7页
植物在生长过程中会受到各种非生物胁迫的伤害,导致生长发育和产量受到严重影响,胚胎晚期丰富蛋白(late embryogenesis abundant proteins,LEA蛋白)在植物抵抗非生物胁迫过程中起着重要的保护作用。在前期的研究基础上,将受多种胁迫诱... 植物在生长过程中会受到各种非生物胁迫的伤害,导致生长发育和产量受到严重影响,胚胎晚期丰富蛋白(late embryogenesis abundant proteins,LEA蛋白)在植物抵抗非生物胁迫过程中起着重要的保护作用。在前期的研究基础上,将受多种胁迫诱导的柠条锦鸡儿Ck LEA1(Gen Bank登录号KC309408)基因转入野生型拟南芥,通过实时荧光定量PCR从7株T_3代纯合体中筛选出3个转基因株系做进一步研究。种子萌发率实验发现,在200 mmol/L NaCl和400 mmol/L甘露醇处理下,转基因株系萌发率均高于野生型拟南芥。干旱处理2周大的幼苗后,转基因株系明显比野生型更抗旱,存活率高于野生型,并且失水率低于野生型。同时,转基因株系积累了较少的丙二醛(MDA),超氧化物歧化酶(SOD)活性和谷胱甘肽(GSH)含量也高于野生型。这些结果表明,柠条锦鸡儿Ck LEA1基因在种子萌发阶段提高了拟南芥对盐和渗透胁迫的耐受性,并且提高了转基因拟南芥幼苗生长阶段对干旱胁迫的抵抗能力。 展开更多
关键词 胚胎晚期丰富蛋白基因 柠条锦鸡儿 非生物胁迫 转基因拟南芥
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水稻OsLEA19a基因在大肠杆菌中的表达和抗逆性分析 被引量:4
17
作者 胡廷章 杨俊年 +1 位作者 吴应梅 陈再刚 《华北农学报》 CSCD 北大核心 2012年第6期1-4,共4页
根据胚胎发育后期丰富蛋白基因OsLEA19a的读码框序列设计引物,PCR扩增目的基因后,利用基因重组技术成功构建原核表达载体pET30a-OsLEA19a,并将重组质粒转化到E.coli BL21中。优化诱导OsLEA19a表达的条件,使目的蛋白可在E.coli BL21中高... 根据胚胎发育后期丰富蛋白基因OsLEA19a的读码框序列设计引物,PCR扩增目的基因后,利用基因重组技术成功构建原核表达载体pET30a-OsLEA19a,并将重组质粒转化到E.coli BL21中。优化诱导OsLEA19a表达的条件,使目的蛋白可在E.coli BL21中高效表达。OsLEA19a融合蛋白的SDS-PAGE电泳分析表明,诱导蛋白表达的最适条件是37℃、4 h,融合蛋白的大小大约为30 kDa。抗逆性分析表明,OsLEA19a的表达能增强大肠杆菌对高盐、高渗透压、高温和低温等非生物胁迫的抗性。 展开更多
关键词 胚胎发育后期丰富蛋白 OsLEA19a 蛋白表达 大肠杆菌 抗逆性
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丹参DHN1基因的克隆与序列分析 被引量:3
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作者 王铭楷 闫亚平 +1 位作者 田薇 王喆之 《西北植物学报》 CAS CSCD 2004年第11期1990-1995,共6页
丹参 SalviamiltiorrhizaBge. 是一种重要的药用植物.以组织培养2~13w的丹参幼苗为材料,构建丹参cDNA文库并进行大规模EST序列分析,所得序列经NCBI的BLAST工具分析,克隆号为rsmsxl-009377的序列与晚期胚胎丰富 LateEmbryogenesisAbunda... 丹参 SalviamiltiorrhizaBge. 是一种重要的药用植物.以组织培养2~13w的丹参幼苗为材料,构建丹参cDNA文库并进行大规模EST序列分析,所得序列经NCBI的BLAST工具分析,克隆号为rsmsxl-009377的序列与晚期胚胎丰富 LateEmbryogenesisAbundant 基因家族 中的成员有较高的同源性.根据其5′单向测序的结果设计引物 5′-GTGCGTAGACACATCGGTTC-3′ 继续向3′测序,得到一个全长969bp的序列,序列分析发现该序列包含一个长690bp的开放阅读框 ORF ,编码229个氨基酸,与NCBI注册的脱水素家族基因具有较高的同源性,且含有 LEA蛋白的特征序列,表明本基因可能是一种新的脱水素基因,命名为DHN1,并在GENEBANK上进行了注册,序列号为:AY695932. 展开更多
关键词 丹参 胚胎晚期丰富蛋白 脱水素
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棉花亲环素基因(GhCYP1)克隆及在干旱胁迫下的表达分析 被引量:5
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作者 郭芳 李艳军 +2 位作者 张新宇 吴莉 孙杰 《分子植物育种》 CAS CSCD 2010年第2期265-270,共6页
本研究从已构建的棉花(Gossypium hirsutum)干旱胁迫抑制性差减杂交(suppressive subtractive hybridization,SSH)cDNA文库分离得到一个含有植物亲环素保守结构域的EST片段,测序并结合cDNA末端快速扩增(5'-RACE)技术获得了1个779bp... 本研究从已构建的棉花(Gossypium hirsutum)干旱胁迫抑制性差减杂交(suppressive subtractive hybridization,SSH)cDNA文库分离得到一个含有植物亲环素保守结构域的EST片段,测序并结合cDNA末端快速扩增(5'-RACE)技术获得了1个779bp的cDNA序列。序列分析表明,该cDNA5'非翻译区为70bp,3'非翻译区为187bp,并含有一个编码174个氨基酸蛋白的开放阅读框。Blast分析表明,该基因的编码产物为一个亲环素蛋白,将该基因命名为为GhCYP1,序列提交到GenBank,登录号为GQ292530。半定量RT-PCR分析表明,干旱胁迫处理后,该基因在叶片中的表达量迅速提高,并在胁迫2h达到最高,这一研究暗示该基因的表达与棉花抗旱胁迫相关。 展开更多
关键词 棉花 亲环素 干旱胁迫
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蜡梅胚胎晚期丰富蛋白基因CpLEA的克隆及表达分析 被引量:4
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作者 马婧 孙文婷 +2 位作者 王晶 眭顺照 李名扬 《园艺学报》 CAS CSCD 北大核心 2014年第8期1663-1672,共10页
从蜡梅(Chimonanthus praecox)花cDNA文库中获得了1个胚胎晚期丰富蛋白(LEA)基因的cDNA全长序列,命名为CpLEA(GenBank登录号:JF412788),该基因cDNA含有一个273 bp编码91个氨基酸的开放阅读框,从蜡梅基因组DNA中扩增该基因发现,该基因含... 从蜡梅(Chimonanthus praecox)花cDNA文库中获得了1个胚胎晚期丰富蛋白(LEA)基因的cDNA全长序列,命名为CpLEA(GenBank登录号:JF412788),该基因cDNA含有一个273 bp编码91个氨基酸的开放阅读框,从蜡梅基因组DNA中扩增该基因发现,该基因含有两个大小分别为35 bp和707 bp的内含子。生物信息学分析显示,CpLEA的编码蛋白含有4个胚胎晚期丰富蛋白第3族LEA蛋白特有的11个氨基酸的基元重复序列,进化树分析表明该编码蛋白与榛子的LEA蛋白亲缘关系最近。通过原核表达获得了与预期大小一致的融合蛋白。实时荧光定量PCR分析表明,该基因在蜡梅成熟种子中表达量最高,在根中几乎不表达;在盛开期花的各个部位中又以雌蕊中的表达量最高;在花发育早期表达量较高,随后下降并保持相对稳定,在衰败期突增并达到最高;检测该基因在脱落酸(ABA 50μmol·L-1)、低温(4℃)、高温(42℃)、干旱(30%PEG6000)和高盐(NaCl 1 mol·L-1)5种外源非生物胁迫因子作用下的表达特性。结果表明,该基因能够被ABA、低温、高温、PEG和NaCl诱导表达,并在随后的时间内呈现出不同的表达模式。表明CpLEA可能在蜡梅花发育和多种非生物胁迫响应中发挥作用。 展开更多
关键词 蜡梅 胚胎晚期丰富蛋白 原核表达 基因表达分析
原文传递
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