【目的】建立一种快速、敏感、特异的检测猪细小病毒(PPV)环介导等温扩增(LAMP)方法,为诊断猪细小病毒提供准确可靠工具。【方法】根据GenBank公布的PPV序列,在其保守序列区域设计了多套LAMP引物,利用LAMP Real Time Turbidimeter LA-32...【目的】建立一种快速、敏感、特异的检测猪细小病毒(PPV)环介导等温扩增(LAMP)方法,为诊断猪细小病毒提供准确可靠工具。【方法】根据GenBank公布的PPV序列,在其保守序列区域设计了多套LAMP引物,利用LAMP Real Time Turbidimeter LA-320仪监测反应进程并筛选最佳引物、反应条件,建立了对PPV病毒DNA进行特异扩增的LAMP检测方法,并可通过加入SYBR Green I肉眼判断结果。【结果】该方法在63℃恒温下作用45min,PPV病毒DNA获得了高效率的特异性扩增;其检出限量为0.23TCID50,敏感性高;在反应结束后加入SYBR Green I肉眼判断结果,与Real Time Turbidimeter LA-320仪监测结果一致。通过对20份临床样品的LAMP检测与免疫荧光鉴定、PCR方法比对,符合率均为20/20。【结论】本研究建立的PPV LAMP检测方法具有快速、特异、灵敏,操作简单、设备要求低的特点,适合用于临床PPV快速检测。展开更多
鹅星状病毒是一种新发的可导致雏鹅以痛风为主要特征的传染性病原。为建立鹅星状病毒(AstV)的快速检测方法,本研究根据鹅Ast V ORF1b基因的保守序列设计了一组特异性的LAMP引物,建立鹅AstV的LAMP快速检测方法,并检测其特异性和灵敏度。...鹅星状病毒是一种新发的可导致雏鹅以痛风为主要特征的传染性病原。为建立鹅星状病毒(AstV)的快速检测方法,本研究根据鹅Ast V ORF1b基因的保守序列设计了一组特异性的LAMP引物,建立鹅AstV的LAMP快速检测方法,并检测其特异性和灵敏度。结果显示:建立的LAMP方法的最佳反应温度为64℃;仅能扩增鹅Ast V,而对鹅细小病毒、鹅副黏病毒、鸭坦布苏病毒及鹅源H9N2亚型禽流感病毒均不能扩增;能够检测到的最低模板(cDNA)浓度为1 ng/μL,因此该方法具有较好的特异性和敏感性。临床样品检测结果显示:建立的LAMP方法与RT-PCR方法阳性符合率为95.65%。综上,本研究建立的LAMP方法能够特异、快速地检测新发鹅Ast V,为养殖基地、科研和检验检疫部门提供了一种快速检测该病原的技术手段。展开更多
文摘【目的】建立一种快速、敏感、特异的检测猪细小病毒(PPV)环介导等温扩增(LAMP)方法,为诊断猪细小病毒提供准确可靠工具。【方法】根据GenBank公布的PPV序列,在其保守序列区域设计了多套LAMP引物,利用LAMP Real Time Turbidimeter LA-320仪监测反应进程并筛选最佳引物、反应条件,建立了对PPV病毒DNA进行特异扩增的LAMP检测方法,并可通过加入SYBR Green I肉眼判断结果。【结果】该方法在63℃恒温下作用45min,PPV病毒DNA获得了高效率的特异性扩增;其检出限量为0.23TCID50,敏感性高;在反应结束后加入SYBR Green I肉眼判断结果,与Real Time Turbidimeter LA-320仪监测结果一致。通过对20份临床样品的LAMP检测与免疫荧光鉴定、PCR方法比对,符合率均为20/20。【结论】本研究建立的PPV LAMP检测方法具有快速、特异、灵敏,操作简单、设备要求低的特点,适合用于临床PPV快速检测。
