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鸽毛滴虫外泌体的分离鉴定及蛋白质谱分析 被引量:3
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作者 倪爱心 李云雷 +8 位作者 葛平壮 王攀林 Adamu Mani Isa 石雷 范静 孙研研 孙鸿 麻慧 陈继兰 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2020年第7期1737-1747,共11页
旨在研究鸽毛滴虫是否分泌外泌体及虫源外泌体的蛋白组成和功能,为探索外泌体在鸽毛滴虫寄生过程中的作用奠定基础。采集鸽毛滴虫感染个体口腔及咽部病灶处样本,进行分离培养及纯化,使用显微镜鉴定虫体形态,提取DNA并比对其序列,确定培... 旨在研究鸽毛滴虫是否分泌外泌体及虫源外泌体的蛋白组成和功能,为探索外泌体在鸽毛滴虫寄生过程中的作用奠定基础。采集鸽毛滴虫感染个体口腔及咽部病灶处样本,进行分离培养及纯化,使用显微镜鉴定虫体形态,提取DNA并比对其序列,确定培养物是否为鸽毛滴虫虫株;通过对培养液上清进行超速离心,透射电子显微镜、Western blot技术和纳米颗粒追踪分析(nanoparticle tracking analysis,NTA)鉴定培养液上清中是否含有虫源外泌体;最后通过Label-free技术分析虫源外泌体的蛋白质谱表达。结果显示,虫体具有明显的毛滴虫形态及特征,与鸽毛滴虫ITS1/5.8S/ITS2基因比对率达98%。从虫体培养液中提取的囊泡经透射电子显微镜观察具有明显的茶托样结构;NTA结果显示,粒径集中于125.1 nm,峰值粒径为132.3 nm,占比99.3%;CD63和TSG101等外泌体标记蛋白的条带明显,表明提取物为外泌体。质谱结果显示,烯醇酶、3-磷酸甘油醛-脱氢酶、磷酸甘油酸变位酶和延伸因子为表达量较高的蛋白质。GO功能注释显示外泌体蛋白富集到细胞内和胞浆等细胞组分,发挥GTP连接和GTP酶活性功能,参与小GTPase介导的信号转导与糖酵解等过程。KEGG通路富集表明,虫源外泌体蛋白主要富集于代谢途径、糖酵解/糖异生、抗生素的生物合成和次级代谢产物的生物合成等通路。本研究发现鸽毛滴虫可以分泌外泌体,并对虫源外泌体进行蛋白质谱分析,提示虫源外泌体中的蛋白质在寄生虫的能量代谢、信号转导及生物合成等过程中发挥重要作用。 展开更多
关键词 毛滴虫 外泌体 label-free技术 蛋白质谱分析
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基于4D-Label-free技术慢性弥漫性轴索损伤大鼠海马组织的蛋白质组学分析
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作者 张丽 熊红丽 朱士胜 《解剖学报》 CAS CSCD 2024年第5期515-523,共9页
目的筛选慢性弥漫性轴索损伤(DAI)大鼠海马组织差异表达蛋白(DEPs),为探索慢性DAI潜在发病机制以及临床诊断、筛选药物治疗靶点、评估预后等提供实验依据。方法实验动物分为模型组(DAI组,n=20)和对照组(CON组,n=20),采用改良的Marmarou... 目的筛选慢性弥漫性轴索损伤(DAI)大鼠海马组织差异表达蛋白(DEPs),为探索慢性DAI潜在发病机制以及临床诊断、筛选药物治疗靶点、评估预后等提供实验依据。方法实验动物分为模型组(DAI组,n=20)和对照组(CON组,n=20),采用改良的Marmarou法建立SD大鼠DAI模型,模型建立3周后利用4D-Label-free技术检测慢性DAI组脑海马组织中的蛋白图谱变化,以DAI组/CON组表达量变化倍数(FC)>1.2或<0.83且P<0.05筛选DEPs,运用基因本体(GO)功能注释和京都基因与基因百科全书(KEGG)通路富集分析方法对筛选的DEPs进行生物信息学分析。结果共筛选出92个DEPs,上调52个,下调40个。GO分析结果显示,DEPs主要涉及去磷酸化,ATP合成耦合电子传递,过氧化氢介导的细胞程序性死亡的正向调节及神经递质受体内化等生物过程功能。KEGG通路分析结果提示,DEPs主要参与代谢途径、活性氧、神经变性途径-多种疾病、逆行内源性大麻素信号传导、谷胱甘肽代谢等信号通路。结论通过4D-Label-free技术筛选出了慢性DAI组大鼠海马组织中的DEPs。所筛选出的DEPs及其所富集的生物过程和信号通路为慢性DAI的深入研究提供依据。 展开更多
关键词 弥漫性轴索损伤 蛋白质组学 4D-label-free技术 生物信息学分析 大鼠
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基于4D-label-free技术的鹿皮胶与阿胶蛋白组分的对比研究
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作者 林伟欣 李树奇 +2 位作者 杨莹莹 张璐 李娜 《食品工业》 CAS 2024年第8期250-254,共5页
旨在从蛋白水平揭示鹿皮胶和阿胶的蛋白质组分信息,探究鹿皮胶和阿胶的差异关键蛋白和代谢通路。以鹿皮胶和阿胶为试验材料,利用4D label-free定量蛋白质组学进行质谱鉴定,通过生物信息学技术分析蛋白的亚细胞定位、结构域、GO注释和KEG... 旨在从蛋白水平揭示鹿皮胶和阿胶的蛋白质组分信息,探究鹿皮胶和阿胶的差异关键蛋白和代谢通路。以鹿皮胶和阿胶为试验材料,利用4D label-free定量蛋白质组学进行质谱鉴定,通过生物信息学技术分析蛋白的亚细胞定位、结构域、GO注释和KEGG通路注释。采用4D-label-free技术对鹿皮胶与阿胶蛋白组分进行了比较研究,得到有效图谱12 451个,鉴定肽段1 449,鉴定unique肽段1 035,鉴定蛋白数455,定量蛋白数303。上调差异蛋白主要集中在原发免疫缺陷、TGF信号通路、糖尿病并发症等功能中,下调差异蛋白主要集中在蛋白质的消化和吸收、松弛素信号通路、ECM受体相互作用、丙酮酸代谢物、非洲锥虫病、PI3K-AKT信号通路等功能中。鹿胶与阿胶进行差异蛋白统计比较,下调68个,上调56个,主要参与了蛋白质合成、发育、吸附、细胞骨架、转运等生物学过程。 展开更多
关键词 鹿皮胶 阿胶 4D-label-free技术 差异蛋白 代谢通路
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冷季不同饲养方式对阿什旦牦牛空肠差异蛋白的影响
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作者 张莹莹 张怀霞 +4 位作者 谢雯 任昊 张春梅 陈倩 贾建磊 《西南农业学报》 CSCD 北大核心 2022年第11期2681-2687,共7页
【目的】通过蛋白质组学技术研究冷季不同饲养模式对牦牛空肠差异蛋白的影响。【方法】随机选择年龄、体况相似的阿什旦公牦牛12只,分别在高精料舍饲模式和自然放牧饲养模式下饲养180 d后采集牦牛空肠样本,采用蛋白质组学结合质谱技术... 【目的】通过蛋白质组学技术研究冷季不同饲养模式对牦牛空肠差异蛋白的影响。【方法】随机选择年龄、体况相似的阿什旦公牦牛12只,分别在高精料舍饲模式和自然放牧饲养模式下饲养180 d后采集牦牛空肠样本,采用蛋白质组学结合质谱技术进行牦牛空肠蛋白质表达差异及生物信息学分析。【结果】共鉴定出差异表达蛋白质96种,亚细胞定位分析表明,差异表达蛋白中细胞质蛋白23.54%、核蛋白20.40%、线粒体蛋白19.56%、细胞外蛋白11.30%、质膜蛋白7.53%。GO分析显示:基于细胞组分,差异蛋白质主要在细胞膜、细胞质、线粒体中富集;基于分子功能,差异蛋白质主要在氧化还原酶活性、细胞间粘着连接、腺苷酸激酶活性、结合蛋白和结构分子活性中富集;基于生物学过程,差异蛋白主要在细胞凋亡、炎症反应、细胞对脂肪酸的反应、肌动蛋白细胞骨架重组和腺苷酸环化酶抑制G蛋白偶联受体中富集。KEGG分析表明,差异表达蛋白主要在紧密连接信号通路、NF-κB信号通路、MAPK信号通路、细胞因子受体相互作用、钙信号通路和调控干细胞的多能性的信号通路等信号通路富集。蛋白质—蛋白质相互作用分析表明,差异蛋白质主要依据结构蛋白和炎症反应蛋白构成一个复杂而强大的互作网络。【结论】长期高精料的全舍饲饲养模式会对牦牛的空肠造成损害。9种与牦牛空肠屏障和功能相关蛋白质(Occludin, Claudin, Zo-1,ATP1B3,HKDC1,GPR41,IL-6,TNF-α和CCL5)表现相对活跃,可以作为候选目的蛋白进行下一步研究。因此,高精料的全舍饲饲养只适合短期内的牦牛育肥,不适合长期的牦牛养殖。 展开更多
关键词 阿什旦牦牛 空肠 饲养模式(高精料舍饲和放牧) label-free质谱技术 生物信息学分析
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低钾胁迫下高钾烤烟苗期根系差异表达蛋白分析 被引量:2
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作者 朱崇文 戴林建 +2 位作者 肖泽凡 符建国 钟军 《中国烟草科学》 CSCD 北大核心 2019年第1期58-67,共10页
为了解高钾烤烟苗期根系在低钾胁迫下的差异表达蛋白及其作用机理,本研究分别提取低钾和正常钾营养液培育的高钾烤烟品系HKDN-5的苗期根系蛋白,酶解后采用液相色谱串联质谱和label-free蛋白定量技术对差异表达蛋白进行鉴定分析。结果表... 为了解高钾烤烟苗期根系在低钾胁迫下的差异表达蛋白及其作用机理,本研究分别提取低钾和正常钾营养液培育的高钾烤烟品系HKDN-5的苗期根系蛋白,酶解后采用液相色谱串联质谱和label-free蛋白定量技术对差异表达蛋白进行鉴定分析。结果表明,与正常钾相比,低钾组共发现681个差异表达蛋白,其中有359个发生下调表达,322个上调表达。差异表达蛋白主要参与脂质代谢、次生代谢、碳水化合物代谢和遗传信息加工等途径。其中,下调蛋白具有翻译后修饰、蛋白质转换、伴侣蛋白相关功能的数量最多,上调蛋白主要为一般功能相关蛋白。差异倍数较大的蛋白主要与代谢和应激反应过程相关。以上结果表明,低钾胁迫产生的差异蛋白主要参与物质代谢及应激反应等相关过程。 展开更多
关键词 高钾烤烟 苗期根系 低钾 label-free蛋白定量技术 差异蛋白质
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