灵芝免疫调节蛋白LZ-8基因的克隆与表达 被引量：3

1

作者 李世丽 胡亚平 +3 位作者 苏建臣 宋杰 郭雅玮 齐志广 《河北师范大学学报（自然科学版）》 CAS 北大核心 2009年第5期677-681,共5页

灵芝能够调节和增强机体免疫力,具有极高的药用价值;LZ-8蛋白是最早被分离研究的免疫调节蛋白,它不仅是灵芝生命活动的重要物质而且具有独特免疫原性.实验采用CTAB法提取灵芝基因组DNA,PCR扩增全长lz-8基因;利用XbaⅠ,XhoⅠ位点将lz-8... 灵芝能够调节和增强机体免疫力,具有极高的药用价值;LZ-8蛋白是最早被分离研究的免疫调节蛋白,它不仅是灵芝生命活动的重要物质而且具有独特免疫原性.实验采用CTAB法提取灵芝基因组DNA,PCR扩增全长lz-8基因;利用XbaⅠ,XhoⅠ位点将lz-8编码基因片段克隆到原核表达载体pET-28 a中,构建原核重组表达质粒pET-lz8,转化BL21（DE3）并进行SDS-PAGE及Western-blot分析.结果表明：克隆的lz-8基因与GenBank报道的序列同源性达到87.5%-100%;重组菌株经IPTG诱导后,lz-8基因得到了高效表达,目的蛋白表达量可达菌体总蛋白的36.52%. 展开更多

关键词 灵芝 lz-8 克隆与表达 WESTERN-BLOT

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氨基酸定点突变提高灵芝蛋白LZ-8热稳定性的研究 被引量：3

2

作者 孙熙麟 蒋振彦 +3 位作者 刘志屹 戴璐 孙非 黄伟 《生物技术通报》 CAS CSCD 北大核心 2020年第1期23-28,共6页

通过氨基酸定点突变技术提高灵芝免疫调节蛋白LZ-8的热稳定性。通过分子动力学模拟结合温度因子预测对LZ-8氨基酸突变位点进行理性设计,在毕赤酵母X33菌株内构建并表达LZ-8突变体蛋白,采用HeLa细胞生长抑制实验和差示量热扫描分析检测... 通过氨基酸定点突变技术提高灵芝免疫调节蛋白LZ-8的热稳定性。通过分子动力学模拟结合温度因子预测对LZ-8氨基酸突变位点进行理性设计,在毕赤酵母X33菌株内构建并表达LZ-8突变体蛋白,采用HeLa细胞生长抑制实验和差示量热扫描分析检测并比较了LZ-8突变前后生物学活性及热力学参数。结果显示,LZ-8 N-端α螺旋为理论预测的温度敏感区域,在该区域进行F8W和R9K氨基酸双位点突变,突变后的LZ-8热稳定性提高,相变温度Tm上升0.92℃,相转变焓值ΔH提高23.14 kJ/mol,但突变后LZ-8生物学活性基本不变,LZ-8和LZ-8突变体对HeLa细胞生长抑制的IC50值分别是2.238μg/mL和2.407μg/mL。通过理性设计氨基酸突变位点,获得了稳定性提高但生物学活性不变的灵芝免疫调节蛋白LZ-8的突变体。 展开更多

关键词 lz-8 热稳定性 分子动力学模拟 温度因子 定点突变

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利用毕赤酵母系统高效表达灵芝中的免疫调节因子LZ-8蛋白 被引量：2

3

作者 宋细忠 肖建勇 +2 位作者 巩伯梁 习梅兰 李刚 《微生物学免疫学进展》 2011年第3期1-5,共5页

根据Murasugi等发表的LZ-8基因的DNA序列,利用PCR方法从灵芝菌丝体的基因组DNA中扩增到lz-8基因。将该基因构建到毕赤酵母表达载体上,电激转化毕赤酵母。对转化子先后进行PCR和PCR-Southern鉴定,表明lz-8基因已转入毕赤酵母。转化子经... 根据Murasugi等发表的LZ-8基因的DNA序列,利用PCR方法从灵芝菌丝体的基因组DNA中扩增到lz-8基因。将该基因构建到毕赤酵母表达载体上,电激转化毕赤酵母。对转化子先后进行PCR和PCR-Southern鉴定,表明lz-8基因已转入毕赤酵母。转化子经发酵培养后用SDS-PAGE电泳方法检测发酵液,证明毕赤酵母中成功地表达出LZ-8蛋白,而且表达量可高达350 mg/L。 展开更多

关键词 lz-8 免疫调节因子 毕赤酵母 高效表达

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灵芝免疫调节蛋白LZ-8的制备和晶体分析 被引量：1

4

作者 安敏 高福 +2 位作者 齐建勋 李锋 刘杏忠 《生物工程学报》 CAS CSCD 北大核心 2010年第11期1563-1568,共6页

LZ-8蛋白是从灵芝菌丝中分离到的真菌免疫调节蛋白,具有多种免疫调节功能,然而这一蛋白的作用机制尚不清楚。通过蛋白质晶体结构的解析,能够得到蛋白质空间结构特点,从而阐述蛋白质功能的机制。旨在得到LZ-8蛋白的晶体,并获得空间结构... LZ-8蛋白是从灵芝菌丝中分离到的真菌免疫调节蛋白,具有多种免疫调节功能,然而这一蛋白的作用机制尚不清楚。通过蛋白质晶体结构的解析,能够得到蛋白质空间结构特点,从而阐述蛋白质功能的机制。旨在得到LZ-8蛋白的晶体,并获得空间结构数据。以pET21a为表达载体,获得诱导表达的rLZ-8,通过亲和层析、分子筛凝胶层析和阴离子交换层析纯化,蛋白纯度在98%以上,采用悬滴气相扩散法得到蛋白晶体,并获得3.2?数据,为进一步对真菌免疫调节蛋白功能和结构的研究奠定了基础。 展开更多

关键词 lz-8 真菌免疫调节蛋白 晶体衍射

原文传递

优良糯玉米自交系lz-8的选育与应用

5

作者 莫武平 梁燕听 +1 位作者 张尉 孙海潮 《广西农学报》 2008年第2期28-29,34,共3页

lz-8-5-2-2是以贵州省一糯质农家种为材料,经连续多代自交分离选育而成,具有优质、高配合力等特点。以其为亲本育成了优良糯玉米新品种柳糯582、柳糯8号,并通过了品种审定,值得推广种植。

关键词 糯玉米 自交系 lz-8 选育

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灵芝免疫调节蛋白LZ-8及云芝免疫调节蛋白FIP-tvc对几种癌细胞系的抑制活性检测

6

作者 王雪妍 周伏忠 +3 位作者 向凌云 陈晓飞 宁萌 刁文涛 《河南科学》 2019年第6期914-918,共5页

在体外培养的人非小细胞肺癌A549细胞、人胃腺癌BGC-823细胞、人结肠癌HCT116细胞、人肝癌Hep3B细胞、人宫颈癌Hela细胞中加入不同浓度的酵母异源表达的LZ-8或FIP-tvc,培养24h后显微镜下观察细胞形态变化,并用CCK8试剂盒检测细胞存活率... 在体外培养的人非小细胞肺癌A549细胞、人胃腺癌BGC-823细胞、人结肠癌HCT116细胞、人肝癌Hep3B细胞、人宫颈癌Hela细胞中加入不同浓度的酵母异源表达的LZ-8或FIP-tvc,培养24h后显微镜下观察细胞形态变化,并用CCK8试剂盒检测细胞存活率,以用来检测灵芝免疫调节蛋白LZ-8及云芝免疫调节蛋白FIP-tvc对几种癌细胞生长抑制能力.结果显示,LZ-8和FIP-tvc在5~10μg/mL浓度时使A549、BGC-823、Hela和Hep 3B细胞贴壁性变差,且CCK8结果显示前3种细胞的存活率有不同程度的降低(80%~95%存活率),而在20μg/mL浓度时FIP-tvc对Hep 3B细胞的存活率开始有明显抑制效果(89%存活率),但对HCT116细胞的形态无影响,对其存活率也无抑制作用. 展开更多

关键词 灵芝免疫调节蛋白 云芝免疫调节蛋白 抑癌活性 癌细胞存活率

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热喷涂纳米结构La_2Zr_2O_7(LZ)/8YSZ双陶瓷热障涂层 被引量：15

7

作者 王铀 王亮 +3 位作者 刘赛月 刘勇 王超会 邹志伟 《中国表面工程》 EI CAS CSCD 北大核心 2016年第1期16-24,共9页

为了满足发动机以及涡轮机越来越高的性能要求,双陶瓷热障涂层逐渐取代单陶瓷层的8YSZ涂层,成为可以长期使用温度高于1 200℃的新型陶瓷涂层。采用等离子喷涂方法制备了La2Zr2O7(LZ)/8YSZ双陶瓷热障涂层,并同时制备了微米结构和纳米结... 为了满足发动机以及涡轮机越来越高的性能要求,双陶瓷热障涂层逐渐取代单陶瓷层的8YSZ涂层,成为可以长期使用温度高于1 200℃的新型陶瓷涂层。采用等离子喷涂方法制备了La2Zr2O7(LZ)/8YSZ双陶瓷热障涂层,并同时制备了微米结构和纳米结构的单层8YSZ陶瓷涂层作为对比。通过X射线衍射仪和扫描电子显微镜研究了粉体喂料和涂层的组织结构。采用对偶拉伸试验法、水淬方法和日本工业标准等研究了涂层的结合强度、隔热效果、热震行为以及高温抗氧化行为。结果表明,与单层的8YSZ陶瓷层相比,双陶瓷型n-LZ/8YSZ涂层的隔热效果提高了35%,热震次数增加了一倍,热氧化失效时间延长了100多小时,具有较佳的隔热效果、抗热震性能以及抗高温氧化性能。 展开更多

关键词 热喷涂 纳米结构 lz/8YSZ双陶瓷层 热障涂层

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灵芝LZ-8在烟草中的表达及产物特性的初步研究 被引量：5

8

作者 白杰英 曾林 +3 位作者 刘毅 李彦舫 林忠平 胡鸢雷 《分子植物育种》 CAS CSCD 2006年第5期645-649,共5页

将从灵芝中克隆的LZ-8基因构建成原核表达质粒pET-30a-lz8,在大肠杆菌BL21中表达。SDS-PAGE表明其分子量约为14kD,与推算出的氨基酸分子量相似。经金属镍离子螯合柱纯化后的原核表达产物为单一条带,纯化产物免疫兔子获得了高效价的抗血... 将从灵芝中克隆的LZ-8基因构建成原核表达质粒pET-30a-lz8,在大肠杆菌BL21中表达。SDS-PAGE表明其分子量约为14kD,与推算出的氨基酸分子量相似。经金属镍离子螯合柱纯化后的原核表达产物为单一条带,纯化产物免疫兔子获得了高效价的抗血清。将该基因亚克隆到植物双元表达载体中,用农杆菌介导的方法转化烟草。经ELISA实验定量测定,重组LZ-8达到了烟草可溶性蛋白的0.18%(每克新鲜叶片约含149.82μgLZ-8重组蛋白)。体外活性检测表明,重组蛋白能有效地提高VeroE6细胞中肿瘤坏死因子(TNF-α)基因的mRNA转录水平,具有免疫调节相关功能。 展开更多

关键词 灵芝 lz-8基因 免疫调节 转基因烟草

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真菌免疫调节蛋白基因LZ-8过表达载体的构建及转化灵芝原生质体的研究 被引量：7

9

作者 孙墨可 张曼 +3 位作者 田娟 李晓薇 李海燕 李玉 《菌物学报》 CAS CSCD 北大核心 2017年第12期1625-1631,共7页

灵芝Ganoderma lingzhi是我国著名的药用真菌。但是,作为一种营养和保健价值都非常高的大型担子菌,灵芝还缺乏完善的转基因方法和安全转基因体系。本研究建立了免疫调节蛋白基因的过表达系统,并利用真菌特异性启动子GPD、终止子NOS和目... 灵芝Ganoderma lingzhi是我国著名的药用真菌。但是,作为一种营养和保健价值都非常高的大型担子菌,灵芝还缺乏完善的转基因方法和安全转基因体系。本研究建立了免疫调节蛋白基因的过表达系统,并利用真菌特异性启动子GPD、终止子NOS和目的基因LZ-8构建真菌特异性双T-DNA表达载体p SB130NG-LZ8;利用溶壁酶提取灵芝原生质体,并用FDA染色法检测灵芝原生质体活性,原生质体成活率约为80%。通过PEG转化法对灵芝原生质体成功进行了转化,转化得到的原生质体在带有潮霉素抗性平板上长出,转化率为3–4/μgpSB130NG-LZ8+107个原生质体。转化子通过PCR检测和荧光定量PCR检测,获得LZ-8在灵芝中的过表达。 展开更多

关键词 灵芝 双T-DNA载体 目的基因lz-8 PEG转化法 荧光定量PCR

原文传递

LZ-8蛋白的原核密码子优化表达及免疫调节功能的初步检测 被引量：4

10

作者 黄俊 张灵霞 +1 位作者 胡松年 于军 《浙江大学学报（农业与生命科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2008年第1期7-12,共6页

为研究LZ-8蛋白的免疫调节活性,设计合成12个寡核苷酸片段,并用PCR方法将它们连接为经密码子优化的新LZ-8基因;将该新基因克隆至原核表达载体pET-28b,构建重组表达质粒pET-28b_lz8,并在大肠杆菌BL21中进行诱导表达.表达产物经Ni离子亲... 为研究LZ-8蛋白的免疫调节活性,设计合成12个寡核苷酸片段,并用PCR方法将它们连接为经密码子优化的新LZ-8基因;将该新基因克隆至原核表达载体pET-28b,构建重组表达质粒pET-28b_lz8,并在大肠杆菌BL21中进行诱导表达.表达产物经Ni离子亲和层析法纯化后,蛋白表达量达70mg·L-1.通过不同品系小鼠的皮肤移植模型检测表明:纯化的重组蛋白具有一定程度的免疫抑制功能,还需进一步实验验证. 展开更多

关键词 原核表达 密码子优化 真菌免疫调节蛋白 lz-8蛋白 免疫抑制活性

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灵芝lz-8基因乳酸菌表达载体的构建与表达及免疫特性 被引量：4

11

作者 曲宁宁 陈萍 +2 位作者 孙鑫泽 张雪 刘琼 《吉林农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2013年第4期411-415,共5页

克隆灵芝lz-8基因并进行原核表达,通过动物试验检测其生理活性。根据GenBank公布的lz-8基因的DNA序列设计引物,从灵芝菌丝中提取灵芝总DNA,PCR扩增lz-8基因并连接到乳酸菌食品级表达载体pNZ8149,转化乳酸乳球菌NZ3900,于30℃Nisin诱导3 ... 克隆灵芝lz-8基因并进行原核表达,通过动物试验检测其生理活性。根据GenBank公布的lz-8基因的DNA序列设计引物,从灵芝菌丝中提取灵芝总DNA,PCR扩增lz-8基因并连接到乳酸菌食品级表达载体pNZ8149,转化乳酸乳球菌NZ3900,于30℃Nisin诱导3 h,SDS-PAGE进行蛋白表达分析。将工程菌菌悬液给小鼠灌胃,对其碳廓清试验等免疫指标进行检测。结果表明:扩增到的lz-8基因序列全长330 bp,构建了原核表达载体pNZ8149-lz-8,LZ-8蛋白在NZ3900中得到表达。NZ3900/pNZ8149-lz-8菌悬液对小鼠各项免疫指标有明显的调节作用。 展开更多

关键词 灵芝 lz-8基因 乳酸乳球菌 表达 免疫特性

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灵芝-8基因的番茄果实特异性启动子植物表达载体的构建 被引量：1

12

作者 胡正萍 杨家森 +2 位作者 叶亮 刑莹莹 奚涛 《生物学杂志》 CAS CSCD 2009年第1期23-26,共4页

构建含有灵芝-8(LZ-8)基因和番茄果实特异性E8启动子的重组载体,并将其转化到根瘤农杆菌中。通过PCR法获取LZ-8基因和E8启动子序列,将目的基因和E8启动子序列构建到植物表达载体pB I121中,获得果实特异性表达LZ-8蛋白的重组质粒。并采用... 构建含有灵芝-8(LZ-8)基因和番茄果实特异性E8启动子的重组载体,并将其转化到根瘤农杆菌中。通过PCR法获取LZ-8基因和E8启动子序列,将目的基因和E8启动子序列构建到植物表达载体pB I121中,获得果实特异性表达LZ-8蛋白的重组质粒。并采用PCR、限制性内切酶酶切和序列测定分析法,对重组质粒进行鉴定,将其转入根瘤农杆菌GV3101中。PCR法、限制性内切酶酶切图谱和序列测定分析均表明番茄果实特异性表达LZ-8蛋白的重组质粒构建成功。获得了含有LZ-8基因和E8启动子的重组质粒,并成功转化根瘤农杆菌,为下一步LZ-8蛋白在番茄果实中特异表达奠定基础。 展开更多

关键词 灵芝-8蛋白 果实特异性启动子 载体构建

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LZ-8基因的克隆及其在毕赤酵母(Pichia pastoris)中的表达

13

作者 金华南 《中山大学研究生学刊（自然科学与医学版）》 2002年第3期9-13,共5页

用 PCR 从灵芝(Gamoderma lucidum)基因组扩增免疫蛋白 LZ-8基因,将其构建到酵母表达质粒 pPICZaA 中,采用电激转化法转化毕赤酵母,获得转化子。对其 Sourthern 杂交分析,结果表明 LZ-8基因整合到毕赤酵母基因组。对转化酵母作发酵培养,... 用 PCR 从灵芝(Gamoderma lucidum)基因组扩增免疫蛋白 LZ-8基因,将其构建到酵母表达质粒 pPICZaA 中,采用电激转化法转化毕赤酵母,获得转化子。对其 Sourthern 杂交分析,结果表明 LZ-8基因整合到毕赤酵母基因组。对转化酵母作发酵培养,SDS—聚炳烯酰胺凝胶电泳检测到 LZ-8蛋白的表达。 展开更多

关键词 灵芝 lz-8基因 电激转化 毕赤酵母 基因表达 基因克隆 免疫抑制作用 工业化发酵生产

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LZ-8基因在大肠杆菌中的表达 被引量：14

14

作者 叶波平 王凡 +2 位作者 梁亦馨 金国虔 吴梧桐 《药物生物技术》 CAS CSCD 2002年第1期21-23,共3页

根据Murasugi等人发表的LZ 8基因的DNA序列 ,设计了两条引物 ,从灵芝孢子粉的基因组DNA中扩增到LZ 8基因 (3 5 6bp)。利用此基因及pET 3d质粒 ,构建了该基因的原核表达载体质粒 ,进一步将其转化进大肠杆菌HB10 1菌株中获得了表达该基因... 根据Murasugi等人发表的LZ 8基因的DNA序列 ,设计了两条引物 ,从灵芝孢子粉的基因组DNA中扩增到LZ 8基因 (3 5 6bp)。利用此基因及pET 3d质粒 ,构建了该基因的原核表达载体质粒 ,进一步将其转化进大肠杆菌HB10 1菌株中获得了表达该基因的基因工程菌株 ,并对IPTG诱导后的LZ 8蛋白进行了初步的SDS 展开更多

关键词 灵芝孢子粉 lz-8基因 原核表达 大肠杆菌

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4LZ–0.8型小型水稻联合收割机的设计 被引量：18

15

作者 谢方平 王修善 +3 位作者 任述光 刘大为 李旭 陈立永 《湖南农业大学学报（自然科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2015年第4期435-439,共5页

为适应南方丘陵山区的作业环境,提高水稻机械化收获作业质量和效率,研制了4LZ–0.8型水稻联合收割机。对收割机行走装置、脱分系统、清选系统、二次切割装置等关键部件进行了设计。对整机性能检测试验结果显示,该机型生产率为0.116 hm2... 为适应南方丘陵山区的作业环境,提高水稻机械化收获作业质量和效率,研制了4LZ–0.8型水稻联合收割机。对收割机行走装置、脱分系统、清选系统、二次切割装置等关键部件进行了设计。对整机性能检测试验结果显示,该机型生产率为0.116 hm2/h,清选含杂率为1.8%,破碎率为0.2%,总损失率为2.0%,均达到或优于GB/T 8892—2008《收获机械联合收割机试验方法》及DG/T 014—2009《谷物联合收割机》中规定的标准。 展开更多

关键词 4lz-0.8型水稻联合收割机 气流清选 设计

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融合蛋白表达过程中N末端蛋白对下游蛋白正确折叠的影响 被引量：2

16

作者 侯玥 孙非 +3 位作者 金倞 刘志屹 郑清川 梁重阳 《高等学校化学学报》 SCIE EI CAS CSCD 北大核心 2014年第2期303-308,共6页

将灵芝免疫调节蛋白(LZ-8)与免疫球蛋白G的Fc片段(IgG Fc)进行融合表达,通过Protein A亲和层析结合Superdex 75分子筛层析获得了高纯度LZ8-Fc.凝血活性实验结果表明,LZ-8与Fc融合表达在一定程度上影响了其免疫活性;利用分子动力学和圆... 将灵芝免疫调节蛋白(LZ-8)与免疫球蛋白G的Fc片段(IgG Fc)进行融合表达,通过Protein A亲和层析结合Superdex 75分子筛层析获得了高纯度LZ8-Fc.凝血活性实验结果表明,LZ-8与Fc融合表达在一定程度上影响了其免疫活性;利用分子动力学和圆二色光谱等技术研究了LZ8-Fc的蛋白折叠及组装方式,发现LZ8-Fc的组装方式与LZ-8相同,但是N末端的LZ-8可能影响下游IgG Fc片段的正确折叠,表明在融合蛋白制备过程中,位于N末端的蛋白对下游蛋白的正确折叠起到重要作用,这为融合蛋白制备技术的优化及应用过程中的稳定提供了重要的理论依据. 展开更多

关键词 lz8-Fc 分子动力学 二聚体

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混凝土搅拌车上装部分常见问题分析及措施 被引量：1

17

作者 韦文儒 《装备制造技术》 2004年第1期67-68,共2页

主要讲述混凝土搅拌运输车上装部分在制造过程中经常遇到的问题及其处理办法。

关键词 混凝土搅拌车 上装 故障分析 lz5260GJBMDl8型 液压系统

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