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应用流式细胞术测定药用植物黄芩基因组大小 被引量：16
1
作者 张琳琳 曹博 白成科 《中国农学通报》 CSCD 2013年第25期130-135,共6页
为了探讨和优化应用流式细胞术(FCM)测定药用植物的基因组大小(或称C值)的方法,分别以新鲜、幼嫩和硅胶干燥的叶片为材料,采用Otto和LB01两种细胞核提取液,利用流式细胞术对黄芩C值进行测定。结果表明,选用豌豆为内标植物时,相比LB01一... 为了探讨和优化应用流式细胞术(FCM)测定药用植物的基因组大小(或称C值)的方法,分别以新鲜、幼嫩和硅胶干燥的叶片为材料,采用Otto和LB01两种细胞核提取液,利用流式细胞术对黄芩C值进行测定。结果表明,选用豌豆为内标植物时,相比LB01一步法,Otto两步法在低温提取、离心和保存条件下,碘化丙啶染色浓度为0.02 mg/mL,得到的细胞核散点图相对集中,碎片较少,容易准确取门,CV较小。不同提取材料表明,幼嫩叶片和新鲜叶片利用Otto二步法均能得到高质量的细胞核悬液,细胞核数量多且散点图集中,有利于取门和测定的C值更准确。而干燥叶片提取的细胞核得到的散点图分散,无法准确取门和测定C值。最终,系统地优化了利用流式细胞术测定药用植物黄芩基因组大小的方法,并首次成功测定黄芩1C值为0.58 pg,基因组大小约为562 Mbp。这一研究结果,将为了解黄芩的基因组值大小和利用流式细胞术测定其他药用植物C值提供参考,并将为黄芩属药用植物资源的遗传评价和保护利用等研究奠定基础。 展开更多
关键词 黄芩 Otto lb01 流式细胞术 C值
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巨大芽孢杆菌LB01对采后芒果炭疽病菌的抑制机制初探 被引量：7
2
作者 丁从文 冯群 李春焕 《食品工业科技》 CAS 北大核心 2020年第10期131-137,共7页
为了探讨巨大芽孢杆菌(Bacillus megaterium)LB01对采后芒果炭疽病菌(Colletotrichum gloeosporioide)的抑制机制。采用果实针刺及体外抑菌法测定巨大芽孢杆菌LB01发酵滤液对炭疽菌的抑菌活性,利用氧化剂敏感探针(DCFH-DA)、分光光度法(... 为了探讨巨大芽孢杆菌(Bacillus megaterium)LB01对采后芒果炭疽病菌(Colletotrichum gloeosporioide)的抑制机制。采用果实针刺及体外抑菌法测定巨大芽孢杆菌LB01发酵滤液对炭疽菌的抑菌活性,利用氧化剂敏感探针(DCFH-DA)、分光光度法(spectrophotometry)、线粒体专一性染色剂(MitoTracker■Red CMTMRos)、碘化丙啶(PI)探针染色来探讨巨大芽孢杆菌LB01发酵滤液对炭疽菌孢子体内活性氧(ROS)水平、菌丝体内丙二醛(MDA)含量以及孢子内线粒体分布和孢子细胞膜完整性的影响。抑菌活性实验发现巨大芽孢杆菌LB01发酵滤液能显著抑制采后芒果发病率及病斑扩展。DCFH-DA对炭疽菌孢子内ROS染色发现,经LB01发酵滤液处理过的孢子在培养6、12 h后染色率分别为73.24%、84.31%,而对照组分别仅为65.25%、72.23%;分光光度法对MDA-TBA反应产物吸光度测试结果显示,接种后培养6 h,处理组MDA含量已高达0.78 nmol/mg,而对照组培养12 h后MDA含量仅为0.62 nmol/mg,处理组MDA含量显著升高(P<0.05),表明细胞内部已受到ROS的严重氧化损伤。此外,MitoTracker■Red CMTMRos及PI染色结果分别表明,处理组炭疽病原菌孢子内线粒体和细胞膜完整性受到严重破坏。因此本研究的巨大芽孢杆菌LB01的抑菌机制是通过诱导ROS水平及MDA含量,损坏线粒体,破坏细胞膜完整性而达到抑菌效果,可为采后芒果炭疽病防治机理的进一步研究奠定基础。 展开更多
关键词 采后芒果炭疽病菌 巨大芽孢杆菌lb01 抑制效应 作用机制
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巨大芽孢杆菌LB01粗提物对采后芒果炭疽病的生防效果及成分鉴定 被引量：4
3
作者 丁从文 韦罗晴 +1 位作者 马忠璇 周尚泽 《食品研究与开发》 CAS 北大核心 2021年第17期31-36,共6页
为研究巨大芽孢杆菌(Bacillus megaterium)LB01粗提物对采后芒果炭疽病的防治效果及粗提物活性成分的分离鉴定,采用乙酸乙酯、石油醚和二氯甲烷等有机溶剂对此菌株LB01发酵滤液进行萃取获得粗提物,通过平板扩散法和芒果活体实验法测定... 为研究巨大芽孢杆菌(Bacillus megaterium)LB01粗提物对采后芒果炭疽病的防治效果及粗提物活性成分的分离鉴定,采用乙酸乙酯、石油醚和二氯甲烷等有机溶剂对此菌株LB01发酵滤液进行萃取获得粗提物,通过平板扩散法和芒果活体实验法测定巨大芽孢杆菌LB01粗提物对采后芒果炭疽病菌的体外及体内抗菌活性,采用多种色谱柱对粗提物进行分离,运用核磁共振技术结合文献数据鉴定结构。结果表明,乙酸乙酯和石油醚粗提物抑制平板上病原菌生长的效果优于二氯甲烷。乙酸乙酯和石油醚粗提物在培养2 d后对病原菌生长的抑制率最高,分别为(76.2±5.2)%和(75.3±6.5)%。乙酸乙酯粗提物(200μL、80μg/mL)对采后芒果炭疽病的体内防治效果与化学杀菌剂施保克相似,7 d后生防效果高达(89.55±1.12)%,此粗提物共分离出3种化合物,分别为4-羟基苯乙酸、4-氨基苯甲酸、3-甲氧基-4-羟基肉桂酸。 展开更多
关键词 采后芒果 炭疽病菌 巨大芽孢杆菌lb01 粗提物 防病效果 成分鉴定
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特殊环境巨大芽孢杆菌LB01抗菌活性成分的分离鉴定及抗病机理 被引量：2
4
作者 丁从文 冯群 李春焕 《食品科学》 EI CAS CSCD 北大核心 2020年第17期75-82,共8页
以对采后芒果炭疽病菌(Colletotrichum gloeosporioides)的抗菌能力为活性追踪指标,以纸片扩散法(K-B法)测量的抑菌圈直径为活性评价指标,通过色谱分离、活性追踪自广西岩溶区特殊环境巨大芽孢杆菌(Bacillus megaterium LB01)发酵液中... 以对采后芒果炭疽病菌(Colletotrichum gloeosporioides)的抗菌能力为活性追踪指标,以纸片扩散法(K-B法)测量的抑菌圈直径为活性评价指标,通过色谱分离、活性追踪自广西岩溶区特殊环境巨大芽孢杆菌(Bacillus megaterium LB01)发酵液中分离的抗菌活性成分,对抗病效果显著的活性成分进行结构鉴定,并对其抗病机理进行初步研究。结果表明:从发酵液中共分离出4种单体化合物,筛选到1种拮抗炭疽病菌效果良好的单体,编号为001,经电喷雾离子源质谱、核磁共振氢谱和碳谱解析,鉴定为12-羟基茉莉酸(12-hydroxyjasmonic acid,TA),此化合物的抗病机理是通过诱导活性氧产生、损害线粒体、破坏孢子细胞膜完整性、抑制菌丝生长及孢子萌发而达到抑菌效果。本研究也证实了TA通过直接抑制炭疽菌菌丝生长和孢子萌发而抑制采后芒果炭疽病,该结果为芒果采后炭疽病害控制提供参考。 展开更多
关键词 特殊环境 采后芒果炭疽菌 巨大芽孢杆菌lb01 12-羟基茉莉酸 结构鉴定 抗病机理
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