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L6细胞胰岛素抵抗的骨骼肌细胞模型 被引量:10
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作者 杨亮 迟戈 +8 位作者 张俊 王良君 刘丽娜 樊淼 刘海东 李伟伟 张健飞 杨菁 隋鸿锦 《中国组织工程研究与临床康复》 CAS CSCD 北大核心 2009年第2期248-251,共4页
背景:在胰岛素抵抗的细胞模型中,以游离脂肪酸诱导3T3-L1脂肪细胞和高胰岛素诱导的HepG2肝癌细胞最为常见,对分布最为广泛靶组织骨骼肌的胰岛素抵抗模型报道较少。目的:拟使用L6细胞株建立胰岛素抵抗的骨骼肌细胞模型。设计、时间及地点... 背景:在胰岛素抵抗的细胞模型中,以游离脂肪酸诱导3T3-L1脂肪细胞和高胰岛素诱导的HepG2肝癌细胞最为常见,对分布最为广泛靶组织骨骼肌的胰岛素抵抗模型报道较少。目的:拟使用L6细胞株建立胰岛素抵抗的骨骼肌细胞模型。设计、时间及地点:细胞学体外观察,于2007-06/2008-05在辽宁医学院生物化学与分子生物学教研室完成。材料:L6细胞株由中国协和医科大学细胞中心提供。α-MEM培养基为美国Gibco公司产品。方法:复苏后的L6细胞置于α-MEM培养基中诱导培养14d,以考马斯亮蓝染色观察肌管出现来确定L6成肌细胞株分化完成。将分化后的细胞建立胰岛素抵抗模型,按1×106/孔接种于24孔板内,用含体积分数为0.02胎牛血清的α-MEM培养,以L6细胞贴满24孔板的板底为宜。换液后,向各孔内分别加入含体积分数为0.02牛血清白蛋白的α-MEM无血清培养基饥饿培养5h。设立2组,实验组的板孔内加入含1×10-7mol/L胰岛素的HEPES缓冲液(136mmol/LNaCl,4.7mmol/LKCl,1.25mmol/LMgSO4,1.2mmol/LCaCl2,0.2%牛血清白蛋白,20mmol/LHEPES,pH7.4)孵育1h;对照组的板孔内加入不含胰岛素的HEPES缓冲液孵育1h。弃上清后用HBS缓冲液冲洗,每孔内分别加入含0.1mol/L葡萄糖的HBS缓冲液100μL,孵育10min后取出置于冰板上快速回收上清。主要观察指标:考马斯亮蓝染色观察L6细胞出现肌管结构情况,葡萄糖氧化酶法检测上清中葡萄糖浓度。结果:诱导前L6细胞未见肌性结构出现,诱导分化后L6细胞内出现肌管结构。使用α-MEM无血清培养基饥饿培养1,3h,两组上清中葡萄糖浓度基本相似(P>0.05);使用α-MEM无血清培养基饥饿培养5h后,实验组上清中葡萄糖浓度明显高于对照组(P<0.05)。结论:诱导分化成肌后的L6骨骼肌细胞经α-MEM无血清培养基饥饿培养5h,在胰岛素浓度为1×10-7mol/L的刺激下可形成胰岛素抵抗的骨骼肌细胞模型。 展开更多
关键词 l6骨骼肌细胞 模型 α-MEM 胰岛素抵抗
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苦豆子总碱降血糖作用及其机制研究 被引量:7
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作者 刘伟 张扬星 +2 位作者 杨新洲 欧阳艳 赵平 《天然产物研究与开发》 CAS CSCD 2021年第12期1991-1997,共7页
本文探究苦豆子地上部分提取的苦豆子总碱对L6骨骼肌细胞降血糖的分子机制。利用葡萄糖检测试剂盒发现苦豆子总碱(total alkaloids of Sophora alopecuroides L.,TASA)能增加L6细胞的葡萄糖摄取,且MTT结果显示TASA对L6细胞没有药物毒性... 本文探究苦豆子地上部分提取的苦豆子总碱对L6骨骼肌细胞降血糖的分子机制。利用葡萄糖检测试剂盒发现苦豆子总碱(total alkaloids of Sophora alopecuroides L.,TASA)能增加L6细胞的葡萄糖摄取,且MTT结果显示TASA对L6细胞没有药物毒性;利用激光共聚焦显微镜监测到TASA能促进GLUT4的转位;Western blot结果显示TASA对L6细胞内GLUT4的表达有一定促进作用,且能增强AMPK和PKC的磷酸化水平。这些结果表明TASA通过AMPK和PKC两种信号通路来促进GLUT4的表达和转运继而促进葡萄糖的摄取,说明TASA可能具有开发成新型降糖药的潜力。 展开更多
关键词 苦豆子总碱 2型糖尿病 l6骨骼肌细胞 葡萄糖转运蛋白4 信号通路
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蓝刺头多糖B对胰岛素抵抗L6骨骼肌细胞耗糖量及AMPK表达的影响 被引量:4
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作者 李旭东 任书男 +2 位作者 青格尔 高珍珍 杨英 《畜牧与兽医》 北大核心 2020年第2期67-72,共6页
为了探究蓝刺头多糖B(ETPB)对棕榈酸(PA)诱导的胰岛素抵抗L6骨骼肌细胞耗糖量及腺苷酸活化蛋白激酶(AMPK)表达的影响,体外培养大鼠L6成肌细胞,诱导分化为骨骼肌细胞并进行分化鉴定;采用CCK8法检测细胞存活率,筛选PA和ETPB的安全浓度;葡... 为了探究蓝刺头多糖B(ETPB)对棕榈酸(PA)诱导的胰岛素抵抗L6骨骼肌细胞耗糖量及腺苷酸活化蛋白激酶(AMPK)表达的影响,体外培养大鼠L6成肌细胞,诱导分化为骨骼肌细胞并进行分化鉴定;采用CCK8法检测细胞存活率,筛选PA和ETPB的安全浓度;葡萄糖氧化酶法检测各组细胞耗糖量;实时荧光定量PCR法检测AMPK mRNA基因表达水平,Western blot法检测AMPK蛋白表达量。结果显示:PA诱导L6骨骼肌细胞发生胰岛素抵抗的最适造模浓度为0.4 mmol/L,ETPB的最大安全浓度为200 mg/mL;ETPB可显著提高胰岛素抵抗L6骨骼肌细胞耗糖量(P<0.05),上调AMPK mRNA表达水平,增加AMPK蛋白表达量。提示:ETPB可以通过提高AMPK基因及蛋白表达而促进胰岛素抵抗L6骨骼肌细胞耗糖,这可能是ETPB改善骨骼肌胰岛素抵抗的作用机制之一。 展开更多
关键词 蓝刺头多糖B l6骨骼肌细胞 棕榈酸 胰岛素抵抗 腺苷酸活化蛋白激酶
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利拉鲁肽通过调节Sestrin2改善棕榈酸诱导的L6骨骼肌细胞胰岛素抵抗 被引量:3
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作者 田雪 高宇 +6 位作者 邢恩鸿 赵丽华 孔莫维 卢亚男 郭晓宇 孙启天 刘晓燕 《中华内分泌代谢杂志》 CAS CSCD 北大核心 2022年第12期1075-1080,共6页
目的探讨应激诱导蛋白Sestrin2(Sesn2)在利拉鲁肽改善大鼠L6骨骼肌细胞胰岛素抵抗中的作用。方法采用棕榈酸诱导法建立大鼠L6骨骼肌细胞的胰岛素抵抗,将实验细胞分为对照组(Con组)、棕榈酸0.6 mmol/L处理组(PA组)、棕榈酸0.6 mmol/L+利... 目的探讨应激诱导蛋白Sestrin2(Sesn2)在利拉鲁肽改善大鼠L6骨骼肌细胞胰岛素抵抗中的作用。方法采用棕榈酸诱导法建立大鼠L6骨骼肌细胞的胰岛素抵抗,将实验细胞分为对照组(Con组)、棕榈酸0.6 mmol/L处理组(PA组)、棕榈酸0.6 mmol/L+利拉鲁肽10 nmol/L处理组(PA+Lir10组)、棕榈酸0.6 mmol/L+利拉鲁肽100 nmol/L处理组(PA+Lir100组)和棕榈酸0.6 mmol/L+利拉鲁肽1000 nmol/L处理组(PA+Lir1000组)。细胞计数试剂盒8(CCK8)法检测各组细胞活性,Western印迹法检测各组葡萄糖转运蛋白4(GLUT4)、蛋白激酶B(Akt)、磷酸化的蛋白激酶B(p-Akt)和Sesn2蛋白的表达。小干扰RNA(siRNA)转染L6细胞,抑制Sesn2的表达后,用棕榈酸0.6 mmol/L和利拉鲁肽100 nmol/L干预细胞,采用Western印迹法检测细胞中Sesn2、Akt、p-Akt、GLUT4蛋白表达水平。结果与Con组相比,PA组细胞存活率明显下降(P<0.05),p-Akt/Akt比值、Sesn2、GLUT4蛋白表达水平下降(P<0.05)。给予利拉鲁肽干预后,PA+Lir100、PA+Lir1000组细胞活性升高(P<0.05),p-Akt/Akt比值、Sesn2、GLUT4蛋白表达水平升高(P<0.05)。抑制Sesn2的表达后,转染si-Sesn2后给予棕榈酸0.6 mmol/L组(PA+si-Sesn2组)和转染si-Sesn2后给予棕榈酸0.6 mmol/L+利拉鲁肽100 nmol/L组(Lir100+PA+si-Sesn2组)的p-Akt/Akt比值及GLUT4蛋白表达水平均明显低于转染阴性组(si-Con组;P<0.05);即使给予利拉鲁肽干预后,与PA+si-Sesn2组相比,Lir100+PA+si-Sesn2组的p-Akt/Akt比值及GLUT4蛋白表达水平无明显升高(P>0.05)。结论棕榈酸可诱导L6细胞p-Akt/Akt比值及GLUT4蛋白表达水平下降。利拉鲁肽通过上调Sesn2表达,使p-Akt/Akt比值、GLUT4蛋白表达水平升高。这一过程可能参与了利拉鲁肽改善棕榈酸引起的L6细胞的胰岛素抵抗。 展开更多
关键词 利拉鲁肽 胰岛素抵抗 l6骨骼肌细胞 棕榈酸 Sestrin2
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海南蒲桃提取物对L6细胞砷中毒缓解作用的体外实验(英文) 被引量:3
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作者 Asmita Samadder Jayeeta Das +2 位作者 Sreemanti Das Raktim Biswas Anisur Rahman Khuda-Bukhsh 《中西医结合学报》 CAS 2012年第11期1293-1302,共10页
目的:研究海南蒲桃提取物对砷酸盐引起的L6骨骼肌细胞葡萄糖内稳态破坏及线粒体功能异常的缓解作用。方法:通过测量多个指标如丙酮酸激酶活性、葡糖激酶、线粒体膜电位等衡量细胞内葡萄糖水平及线粒体功能,并测量相关标志物的蛋白质及m... 目的:研究海南蒲桃提取物对砷酸盐引起的L6骨骼肌细胞葡萄糖内稳态破坏及线粒体功能异常的缓解作用。方法:通过测量多个指标如丙酮酸激酶活性、葡糖激酶、线粒体膜电位等衡量细胞内葡萄糖水平及线粒体功能,并测量相关标志物的蛋白质及mRNA表达情况,如葡萄糖转运体4、胰岛素受体基质1、胰岛素受体基质2、葡糖激酶等以分析可能有关的信号通路。结果:海南蒲桃提取物能够通过葡萄糖转运体4通路改善砷中毒的L6细胞内诸多标志物的表达,使其正常化,与模型组相比差异有统计学意义。结论:海南蒲桃提取物对细胞砷中毒有明显的缓解作用,未来可考虑将其用于治疗砷中毒相关疾病如高血糖症等。 展开更多
关键词 蒲桃属 植物提取物 砷酸盐类 葡萄糖转运蛋白质类 易化性 l6骨骼肌细胞 体外研究
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nesfatin-1在胰岛素抵抗骨骼肌细胞中对PI3K/AKT信号通路的影响 被引量:1
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作者 王茜 李明泽 +8 位作者 张晗 张琳 章莹 程峣 袁燕 李思成 赵宇 廖鑫 高琳 《中国老年学杂志》 CAS 北大核心 2021年第2期330-334,共5页
目的探讨过表达新型饱食分子蛋白(nesfatin-1)对L6骨骼肌胰岛素抵抗及磷脂酰肌醇3-激酶/蛋白激酶B(PI3K/AKT)信号通路和下游糖原合成酶激酶(GSK)-3β、葡萄糖转运蛋白(GLUT)-4表达的影响。方法建立L6细胞胰岛素抵抗模型后,用过表达nesfa... 目的探讨过表达新型饱食分子蛋白(nesfatin-1)对L6骨骼肌胰岛素抵抗及磷脂酰肌醇3-激酶/蛋白激酶B(PI3K/AKT)信号通路和下游糖原合成酶激酶(GSK)-3β、葡萄糖转运蛋白(GLUT)-4表达的影响。方法建立L6细胞胰岛素抵抗模型后,用过表达nesfatin-1的腺相关病毒(AAV)和空载对照腺相关病毒(PC)感染L6细胞,将细胞分为四组,分别为空载对照腺相关病毒组(PC组),PC+棕榈酸(PA)组,过表达nesfatin-1组,nesfatin-1+PA组,四组均加入100 nmol/L重组人胰岛素(Insulin),PC+PA组和nesfatin-1+PA组再加入250μmol/L PA处理24 h后收集培养基上清,用葡萄糖过氧化物酶方法测定上清液中葡萄糖含量,用Western印迹检测PI3K、AKT及其下游信号分子GSK-3β、GLUT-4的蛋白表达变化。结果与PC组比较,过表达nesfatin-1组p-AKT、GSK-3β、GLUT-4蛋白表达水平明显增高(P<0.05);与PC+PA组相比,nesfatin-1+PA组p-AKT、GSK-3β、GLUT-4蛋白表达水平明显增高(P<0.05);与nesfatin-1组相比,nesfatin-1+PA组p-AKT、GSK-3β、GLUT-4蛋白表达水平明显下降(P<0.05)。结论过表达nesfatin-1可显著增加骨骼肌细胞对葡萄糖的摄取,减轻胰岛素抵抗,并经PI3K-AKT通路上调下游GSK-3β、GLUT-4的表达。 展开更多
关键词 新型饱食分子蛋白-1 l6骨骼肌细胞 磷脂酰醇3-激酶(PI3K)/蛋白激酶B(AKT)信号通路 糖原合成酶激酶-3Β 葡萄糖转运蛋白4
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牛蒡子苷对L6骨骼肌细胞中腺苷酸活化蛋白激酶信号通路的影响 被引量:1
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作者 相芳 魏玮 +4 位作者 相红 王玉兰 季蔚 许诺 万小梅 《东南国防医药》 2016年第2期157-159,187,共4页
目的探讨牛蒡子苷在L6骨骼肌细胞中对葡萄糖消耗和腺苷酸活化蛋白激酶(AMP-activated protein kinase,AMPK)信号通路的调节作用。方法用含2%胎牛血清的1640培养基诱导L6骨骼肌细胞分化,直至细胞生长出肌管,分化完成后的L6骨骼肌细胞用... 目的探讨牛蒡子苷在L6骨骼肌细胞中对葡萄糖消耗和腺苷酸活化蛋白激酶(AMP-activated protein kinase,AMPK)信号通路的调节作用。方法用含2%胎牛血清的1640培养基诱导L6骨骼肌细胞分化,直至细胞生长出肌管,分化完成后的L6骨骼肌细胞用含有不同浓度牛蒡子苷的培养基培养24 h后,采用葡萄糖氧化酶法检测细胞葡萄糖消耗,western blot法检测AMPK的亚单位AMPKα和磷酸化腺苷酸活化蛋白激酶(p-AMP-activated protein kinase,p-AMPKα)的蛋白表达水平;以real-time PCR法检测过氧化物酶体增生物激活受体γ共激活因子1α(peroxisome-proliferator-activated receptorγcoactivator-1α,PGC-1α)mRNA表达水平。结果牛蒡子苷浓度为1000 g/L时,可增加L6骨骼肌细胞的葡萄糖消耗,差异显著(P<0.01);与对照组相比,牛蒡子苷呈浓度依赖性的增强L6骨骼肌细胞中p-AMPKα蛋白表达水平;并以相同的趋势增强PGC-1αmRNA表达水平。结论牛蒡子苷增加L6骨骼肌细胞的葡萄糖消耗,并激活AMPK/PGC-1α信号通路,具有潜在的改善胰岛素抵抗的作用。 展开更多
关键词 牛蒡子苷 胰岛素抵抗 腺苷酸活化蛋白激酶 l6骨骼肌细胞
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葡萄糖转运的胰岛素敏感性以及forskolin,dipyridamole和pentobarbital对三种L6骨骼肌细胞葡萄糖转运的抑制作用
8
作者 牛文彦 Philip J Bilan +2 位作者 Michiko Hayashi 笪宇蓉 姚智 《中国科学(C辑)》 CSCD 北大核心 2007年第4期402-409,共8页
用稳定过表达并带有myc表位的葡萄糖转运子1(glucose transporter1,GLUT1)或葡萄糖转运子4(glucose transporter4,GLUT4)的L6骨骼肌细胞株定征GLUT1和GLUT4对胰岛素的响应.所筛选的L6-GLUT1myc细胞克隆分化前后的葡萄糖摄取量均在线性范... 用稳定过表达并带有myc表位的葡萄糖转运子1(glucose transporter1,GLUT1)或葡萄糖转运子4(glucose transporter4,GLUT4)的L6骨骼肌细胞株定征GLUT1和GLUT4对胰岛素的响应.所筛选的L6-GLUT1myc细胞克隆分化前后的葡萄糖摄取量均在线性范围.100nmol/L胰岛素使L6-GLUT1myc和L6-GLUT4myc肌原细胞膜上GLUT1或GLUT4的量分别达到基础组的(1.58±0.01)倍和(1.96±0.11)倍,2-脱氧葡萄糖摄取量分别达到了(1.53±0.09)倍和(1.86±0.17)倍,此作用可被渥曼青霉素(wortmannin)抑制.胰岛素刺激了此2种细胞中的Akt磷酸化.L6-GLUT1myc肌原细胞的葡萄糖摄取量对胰岛素浓度呈剂量依赖性,但与野生型细胞相比,其对胰岛素的敏感性和最大响应没有改变.但L6-GLUT4myc肌原细胞的葡萄糖摄取量对胰岛素的敏感性和最大响应均增加.以前的研究提示毛喉素(forskolin)可能影响胰岛素刺激的GLUT4转位.本研究表明,在L6-GLUT4myc细胞中,毛喉素使胰岛素刺激的葡萄糖摄取减少了65%,此作用是由它对GLUT4的直接抑制而不是由其对GLUT4转位的影响造成的.毛喉素和dipyridamole对GLUT4比对GLUT1有更强的抑制作用,而戊巴比妥(pentobarbital)对GLUT1的抑制作用强于GLUT4.应用这些抑制剂的结果表明、L6肌原细胞中基础状态下和胰岛素刺激状态下的葡萄糖主要由过表达的GLUT1或GLUT4转运.因此,L6-GLUT1myc和L6-GLUT4myc细胞株为筛查对肌肉细胞GLUT1或GLUT4的活性或转位有不同作用的化合物提供了一个平台. 展开更多
关键词 l6骨骼肌细胞 葡萄糖转运子(glucose transporter GlUT) 胰岛素 2-脱氧葡萄糖摄取
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Par6A cDNA的克隆与表达
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作者 刘晓军 孔星星 +4 位作者 朱镠娈 崔安芳 纪少伟 常永生 方福德 《基础医学与临床》 CSCD 北大核心 2009年第5期459-463,共5页
目的探讨Par6A基因的克隆表达及功能。方法用RT-PCR从大鼠L6骨骼肌细胞扩增出Par6A的cDNA,利用分子克隆的方法构建Par6A的克隆载体以及真核表达载体,在293细胞中进行表达,通过免疫共沉淀初步研究Par6A的功能。结果成功扩增出Par6AcDNA,... 目的探讨Par6A基因的克隆表达及功能。方法用RT-PCR从大鼠L6骨骼肌细胞扩增出Par6A的cDNA,利用分子克隆的方法构建Par6A的克隆载体以及真核表达载体,在293细胞中进行表达,通过免疫共沉淀初步研究Par6A的功能。结果成功扩增出Par6AcDNA,片断大小约1 kb,并构建了真核重组表达质粒pDsRed-Express-N1-Par6A。在转染293ET细胞24 h后,荧光显微镜下可见红色荧光的表达。免疫共沉淀实验表明Par6A与PKCζ存在相互作用。结论成功扩增出大鼠骨骼肌的Par6AcDNA,为研究Par6A的相关功能奠定了基础。 展开更多
关键词 Par6A CDNA l6大鼠骨骼肌细胞 免疫共沉淀
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