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题名基因工程法生产L-5-甲基四氢叶酸的研究
被引量：4
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作者
刘娅梅
卞筱泓
许激扬
李兰娥
张映桥
许建良
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机构
中国药科大学生命科学与技术学院
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出处
《中国生化药物杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2012年第3期244-247,共4页
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文摘
目的在E.coli BL21(DE3)中表达5,10-亚甲基四氢叶酸还原酶(MTHFR),并检测MTHFR的表达情况及L-5-甲基四氢叶酸的增加量。方法采用PCR法获得MTHFR基因(metF)全长DNA,分别在其5'端和3'端加上BamHⅠ和SacⅠ酶切位点。经BamHⅠ和SacⅠ双酶切后,连接到经同样双酶切的表达载体pET-28a(+)中,经限制性酶切、菌落PCR和测序验证正确后,转化至E.coli BL21(DE3),经IPTG诱导重组蛋白表达,SDS-PAGE检测MTHFR表达量,HPLC检测L-5-甲基四氢叶酸量。结果经酶切与测序鉴定证实原核重组载体pET28a-MTHFR构建成功,表达产物相对分子质量约为33 000,与MTHFR大小相符,工程菌的L-5-甲基四氢叶酸的产量显著增加。结论通过将MTHFR的基因导入L-5-甲基四氢叶酸产生菌能够提高L-5-甲基四氢叶酸产量。
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关键词
l-5-甲基四氢叶酸
原核表达
双酶切
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Keywords
l-5-methylenetetrahydrofolate
prokaryotic expression
double digestion
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分类号
Q78
[生物学—分子生物学]
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