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抗体夹心酶联免疫吸附法测定重组E.coli L-天冬酰胺酶及药代动力学研究 被引量:7
1
作者 陈建华 吴梧桐 平野和行 《药学学报》 CAS CSCD 北大核心 2003年第8期613-616,共4页
目的 建立大鼠血浆中重组E .coliL 天冬酰胺酶的抗体夹心酶联免疫吸附测定法 ,并进行药代动力学研究。方法 应用重组E .coliL 天冬酰胺酶免疫家兔 ,分离IgG ,用DEAE 纤维素柱色谱纯化 ,辣根过氧化物酶标记抗体 ,建立抗体夹心酶联免疫... 目的 建立大鼠血浆中重组E .coliL 天冬酰胺酶的抗体夹心酶联免疫吸附测定法 ,并进行药代动力学研究。方法 应用重组E .coliL 天冬酰胺酶免疫家兔 ,分离IgG ,用DEAE 纤维素柱色谱纯化 ,辣根过氧化物酶标记抗体 ,建立抗体夹心酶联免疫吸附法 ,测定大鼠血浆中重组E .coliL 天冬酰胺酶浓度。结果 方法的线性范围为 1~6 4U·L- 1 ,血药浓度与时间的关系符合二房室模型 ,初期和末端的T1 2 分别为 0 5 0~ 0 5 7h和 2 4 5~ 3 0 2h ,AUC与剂量成正比。结论 建立的抗体夹心酶联免疫吸附法在灵敏度、特异性、线性范围、精密度和回收率等方面 ,满足药代动力学研究要求。实验方法和重组E .coliL 展开更多
关键词 重组E.coli l天冬酰胺 辣根过氧化物标记抗体 抗体夹心联免疫吸附法 药代动力学
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L-天冬酰胺酶Ⅱ基因工程菌的培养 被引量:8
2
作者 赖龙生 吴敬 +2 位作者 翟源 吴梧桐 刘景晶 《药物生物技术》 CAS CSCD 1999年第3期140-143,共4页
为提高L 天冬酰胺酶Ⅱ基因工程菌EscherichiacolipKA/CPU2 10 0 0 9的产酶量 ,采用正交试验法确定了较佳培养条件 ,并优化了发酵工艺。工程菌摇瓶产酶稳定在 190U/ml。 2 5L发酵罐产酶亦高达 180U/ml,发酵周期大大缩短 ,仅 9~ 10h。产... 为提高L 天冬酰胺酶Ⅱ基因工程菌EscherichiacolipKA/CPU2 10 0 0 9的产酶量 ,采用正交试验法确定了较佳培养条件 ,并优化了发酵工艺。工程菌摇瓶产酶稳定在 190U/ml。 2 5L发酵罐产酶亦高达 180U/ml,发酵周期大大缩短 ,仅 9~ 10h。产酶量比原工艺提高 1倍以上 ,具有较好的工业生产前景。 展开更多
关键词 l天冬酰胺 基因工程菌 发酵
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葡聚糖磁性毫微粒固定化L-天冬酰胺酶的研究 被引量:29
3
作者 徐慧显 李民勤 +2 位作者 潘再群 马建标 何炳林 《生物化学杂志》 CAS CSCD 1996年第6期744-746,共3页
葡聚糖磁性毫微粒固定化L-天冬酰胺酶的研究徐慧显,李民勤,潘再群,马建标,何炳林(南开大学高分子化学研究所,天津300071)大肠杆菌天冬酰胺酶对急性淋巴白血病有明显疗效[1],注射入体内以后,可迅速清除血清中的天冬... 葡聚糖磁性毫微粒固定化L-天冬酰胺酶的研究徐慧显,李民勤,潘再群,马建标,何炳林(南开大学高分子化学研究所,天津300071)大肠杆菌天冬酰胺酶对急性淋巴白血病有明显疗效[1],注射入体内以后,可迅速清除血清中的天冬酰胺──敏感性肿瘤细胞的必需营养成... 展开更多
关键词 l-天冬酰胺 葡聚糖 磁性毫微粒
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PEG-L-天冬酰胺酶的临床研究近况 被引量:16
4
作者 李晓媛 陈建华 吴梧桐 《药学进展》 CAS 2009年第11期503-510,共8页
综述近年来对抗肿瘤药物PEG-L-天冬酰胺酶的临床研究进展,讨论其在急性淋巴细胞白血病治疗中的用药方案和疗效,抗药性以及安全性。PEG-L-天冬酰胺酶由E.coliL-天冬酰胺酶经聚乙二醇共价修饰而得,其免疫原性降低,且药物半衰期延长。
关键词 PEG-l-天冬酰胺 急性淋巴细胞白血病 疗效 抗药性 安全性
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氧载体对L-天冬酰胺酶发酵过程影响的研究 被引量:10
5
作者 刘红 魏东芝 《生物工程学报》 CAS CSCD 北大核心 1998年第3期298-302,共5页
以抗癌药物L天冬酰胺酶生产为应用背景,针对发酵过程中存在严重耗氧问题,研究了氧载体对发酵过程的影响。通过对几种氧载体的筛选,认为正十二烷最适合于该发酵过程。随后以产物L天冬酰胺酶活性、菌体浓度以及溶氧水平为主要指... 以抗癌药物L天冬酰胺酶生产为应用背景,针对发酵过程中存在严重耗氧问题,研究了氧载体对发酵过程的影响。通过对几种氧载体的筛选,认为正十二烷最适合于该发酵过程。随后以产物L天冬酰胺酶活性、菌体浓度以及溶氧水平为主要指标,考察了氧载体在发酵过程中的作用,实验表明,发酵基质中5%正十二烷的添加量为最佳浓度,这种氧载体的加入,明显地提高了发酵介质中的溶氧水平,改善了供氧条件,增加了菌体浓度,提高了L天冬酰胺酶发酵水平,在优化条件下。 展开更多
关键词 氧载体 l-天冬酰胺 发酵过程
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丝素纳米颗粒的制备及应用于L-天冬酰胺酶的固定化 被引量:11
6
作者 张雨青 相入丽 +1 位作者 阎海波 陈晓晓 《高等学校化学学报》 SCIE EI CAS CSCD 北大核心 2008年第3期628-633,共6页
丝素蛋白纤维溶于高浓度中性盐溴化锂溶液或氯化钙-乙醇-水三元溶剂中,经过透析和纯化可以制成3种液态丝素.SDS-PAGE分析结果表明,其分子量分布范围明显不同.应用能与水混溶的有机溶剂如丙酮等可将这种丝素制成丝素纳米颗粒,用SEM观察... 丝素蛋白纤维溶于高浓度中性盐溴化锂溶液或氯化钙-乙醇-水三元溶剂中,经过透析和纯化可以制成3种液态丝素.SDS-PAGE分析结果表明,其分子量分布范围明显不同.应用能与水混溶的有机溶剂如丙酮等可将这种丝素制成丝素纳米颗粒,用SEM观察到丝素纳米颗粒粒径分布范围为50~120nm.以戊二醛为交联剂,将治疗急性淋巴性白血病常用酶制剂L-天冬酰胺酶共价结合在丝素纳米颗粒上.酶活性分析结果表明,由肽链断裂较少的丝素制备的纳米颗粒更适合于酶的生物结合.酶动力学研究结果表明,这种固定化酶活性回收率为44%,热稳定性较游离酶有明显提高,最适pH值范围加宽为6.0~8.0,最适反应温度提高10℃;抗胰蛋白酶水解能力明显增强.结果表明,丝素纳米颗粒与丝素蛋白膜一样,是一种酶固定化的良好载体,在药物缓释系统方面具有潜在的研究和开发价值. 展开更多
关键词 丝素纳米颗粒 l-天冬酰胺 固定化 交联
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定点突变提高枯草芽孢杆菌L-天冬酰胺酶的活力及稳定性 被引量:11
7
作者 张显 龙水清 +2 位作者 饶志明 杨套伟 徐美娟 《食品与生物技术学报》 CAS CSCD 北大核心 2015年第11期1128-1134,共7页
L-天冬酰胺酶可以催化L-天冬酰胺转化为L-天冬氨酸和氨。它可以通过降解食品原料中的L-天冬酰胺而降低高温烹制食品中丙烯酰胺的含量。由于食品预处理环境的复杂性,只有具有高酶活且稳定的酶才能满足食品生产中的应用。作者通过点突变... L-天冬酰胺酶可以催化L-天冬酰胺转化为L-天冬氨酸和氨。它可以通过降解食品原料中的L-天冬酰胺而降低高温烹制食品中丙烯酰胺的含量。由于食品预处理环境的复杂性,只有具有高酶活且稳定的酶才能满足食品生产中的应用。作者通过点突变提高来源于Bacillus subtilis B11-06的L-天冬酰胺酶(Bs AII)的酶活和热稳定性。通过序列比对和同源模拟选择5个点进行突变,构建6个突变菌株。酶活测定结果表明,突变体酶S299N_(ansz)和P348A_(ansz)的酶活较Bs AII分别提高28%和32%。其中P348A_(ansz)的热稳定性和p H稳定性较Bs AII均有明显提高。本研究表明,第299和348位氨基酸残基对酶的催化作用有较大影响,对该酶的催化机理的研究提供了一定的基础,并提高了该酶的工业应用潜力。 展开更多
关键词 l-天冬酰胺 定点突变 热稳定性 pH稳定性
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几种因素在L-天冬酰胺酶化学修饰中对酶活力及抗原性的影响 被引量:10
8
作者 曹淑桂 田洁 +3 位作者 赵秋宇 丁忠田 王树歧 程玉华 《药学学报》 CAS CSCD 北大核心 1990年第10期732-738,共7页
为了寻求在较好地保持酶活力的同时解除L-天冬酰胺酶抗原性的方法,采用不同分子量的乙酸酐、右旋糖酐和单甲氧基聚乙二醇,作为修饰剂和不同的修饰方法对该酶进行了化学修饰。结果表明在保持酶活性和降低抗原性方面,大分子修饰剂右旋糖... 为了寻求在较好地保持酶活力的同时解除L-天冬酰胺酶抗原性的方法,采用不同分子量的乙酸酐、右旋糖酐和单甲氧基聚乙二醇,作为修饰剂和不同的修饰方法对该酶进行了化学修饰。结果表明在保持酶活性和降低抗原性方面,大分子修饰剂右旋糖酐、单甲氧基聚乙二醇优于小分子乙酸酐,底物保护修饰优于直接修饰;活化PEG,优于活化PEG_1。在底物保护下的PEG,修饰酶其抗原性完全解除的同时,酶活力保持在30%以上。 展开更多
关键词 化学修饰 抗原性 l-天冬酰胺
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溶氧对L-天冬酰胺酶发酵的影响及其控制 被引量:9
9
作者 刘红 蔡绍皙 潘红春 《中国生物制品学杂志》 CAS CSCD 2003年第6期345-347,共3页
目的 探索溶氧对L-天冬酰胺酶发酵过程的影响及其控制方法。方法 通过装液量试验、接种量试验、葡萄糖试验和氧载体试验,考察摇瓶发酵过程中溶氧对L-天冬酰胺酶合成的影响,采用通纯氧自控pH的发酵工艺进行溶氧控制和pH控制。结果 采用... 目的 探索溶氧对L-天冬酰胺酶发酵过程的影响及其控制方法。方法 通过装液量试验、接种量试验、葡萄糖试验和氧载体试验,考察摇瓶发酵过程中溶氧对L-天冬酰胺酶合成的影响,采用通纯氧自控pH的发酵工艺进行溶氧控制和pH控制。结果 采用通纯氧自控pH的发酵工艺,可延长发酵周期,有效防止菌体过早自溶,大大促进L-天冬酰胺酶的合成,较分批发酵提高产酶83%,达到110u/ml。发酵动力学特性分析表明,该发酵方式L-天冬酰胺酶的合成与菌体生长不相关,控制比生长速率μ为0.15~0.301/h,均有利于L-天冬酰胺酶的合成,可使Qp_(max)达到3922mmol/g.h。结论 溶氧对大肠杆菌L-天冬酰胺酶的合成有严重影响,已建立了控制溶氧的发酵工艺。 展开更多
关键词 溶氧 大肠杆菌 发酵动力学 l-天冬酰胺
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重组L-天冬酰胺酶Ⅱ的中试工艺及其性质的研究 被引量:8
10
作者 吴敬 吴梧桐 +1 位作者 赖龙生 刘景晶 《中国药学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2000年第4期268-271,共4页
目的 :通过重组L 天冬酰胺酶Ⅱ中试工艺及其性质的研究 ,旨在获得大量的高纯度产品。方法 :采用 5 0 0L发酵罐发酵 ,对所获得菌体进一步提取纯化 ,产品用还原SDS PAGE(十二烷基硫酸钠 聚丙酰胺凝胶电泳法 ) ,HPLC测定纯度 ,质谱和等电... 目的 :通过重组L 天冬酰胺酶Ⅱ中试工艺及其性质的研究 ,旨在获得大量的高纯度产品。方法 :采用 5 0 0L发酵罐发酵 ,对所获得菌体进一步提取纯化 ,产品用还原SDS PAGE(十二烷基硫酸钠 聚丙酰胺凝胶电泳法 ) ,HPLC测定纯度 ,质谱和等电聚焦电泳分别测相对分子质量、等电点 ,并进行了紫外扫描。结果 :发酵液产酶活力达到 2 0 0U·mg-1,提取回收率为80 % ,纯化总回收率为 5 7% ,产品比活为 2 2 0U·ml-1,电泳 30 μg上样量显示一条带 ,HPLC测纯度大于 95 %。该酶Mr为13835 6 ,pI为 4.85 ,紫外最大吸收值在 2 78nm处。 结论 :本研究对实现重组L 天冬酰胺酶Ⅱ的工业化生产有重要意义。 展开更多
关键词 l-天冬酰胺 SDS-PAGE 中试工艺
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抗癌酶制剂L-天冬酰胺酶在甲壳素上的固定化 被引量:5
11
作者 周纪宁 金浩 +1 位作者 江体乾 李永丰 《华东理工大学学报(自然科学版)》 EI CAS CSCD 北大核心 1999年第5期438-441,445,共5页
研究了以甲壳素为载体固定化 L天冬酰胺酶的最适条件,探讨了固定化 L天冬酰胺酶的一系列理化性质。交联剂用量、缓冲液p H 值和载体活化时间均对 L天冬酰胺酶的固定化有一定影响,得到的固定化 L天冬酰胺酶的活力回... 研究了以甲壳素为载体固定化 L天冬酰胺酶的最适条件,探讨了固定化 L天冬酰胺酶的一系列理化性质。交联剂用量、缓冲液p H 值和载体活化时间均对 L天冬酰胺酶的固定化有一定影响,得到的固定化 L天冬酰胺酶的活力回收可达 25.4% 。固定化 L天冬酰胺酶理化性质的实验研究表明,酶经固定化后,对蛋白水解酶的稳定性及存贮稳定性均较游离酶有很大程度的提高。 展开更多
关键词 l-天冬酰胺 甲壳素 固定化 抗癌制剂
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用活化的单甲氧基聚乙二醇修饰L-天冬酰胺酶 被引量:6
12
作者 史凌洋 魏东芝 《华东理工大学学报(自然科学版)》 CAS CSCD 北大核心 2001年第6期601-604,共4页
使用活化的单甲氧基聚乙二醇 ( m PEG2 )对 L -天冬酰胺酶进行修饰 ,修饰过程中加入底物 L-天冬酰氨保护酶的活性中心。得到的修饰酶抗体结合能力消失 ,保留酶比活力 32 .8% ,酶的常温稳定性和热稳定性均有显著提高。荧光胺法分析残余... 使用活化的单甲氧基聚乙二醇 ( m PEG2 )对 L -天冬酰胺酶进行修饰 ,修饰过程中加入底物 L-天冬酰氨保护酶的活性中心。得到的修饰酶抗体结合能力消失 ,保留酶比活力 32 .8% ,酶的常温稳定性和热稳定性均有显著提高。荧光胺法分析残余氨基数目得出酶分子的 92个自由氨基中有5 展开更多
关键词 MPEG2 l-天冬酰胺 修饰 荧光胺法 单甲氧基聚乙二醇 抗癌药物 活力
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大肠杆菌的培养及L-天冬酰胺酶活力的测定 被引量:6
13
作者 乐薇 孙小梅 李步海 《中南民族大学学报(自然科学版)》 CAS 2003年第3期14-16,23,共4页
讨论了大肠杆菌 L -天冬酰胺酶发酵液酶活力的影响因素 ,筛选了大肠杆菌产酶的优化条件 .发现了发酵液酶活力的最适 p H随缓冲介质的变化而变化 ;甘氨酸介质中 ,p H 6 .5 0~ 9.5 0均适于酶活测定 ,且 p H 8.0 0时酶活最高 ;硼酸、Tris... 讨论了大肠杆菌 L -天冬酰胺酶发酵液酶活力的影响因素 ,筛选了大肠杆菌产酶的优化条件 .发现了发酵液酶活力的最适 p H随缓冲介质的变化而变化 ;甘氨酸介质中 ,p H 6 .5 0~ 9.5 0均适于酶活测定 ,且 p H 8.0 0时酶活最高 ;硼酸、Tris、磷酸介质中 ,在 p H 8.5 0时 ,酶活力依次下降 ;酶反应的适宜温度 4 0~ 5 0℃ .对菌株培养的研究表明 ,葡萄糖对产酶有抑制作用 ,适当提高摇床转速可使发酵液酶活力由原来的 136 U /m L增至 14 5 U /m L .在确定的最优培养条件 37℃ ,p H 7.0 0 ,2 5 0 r/min下 ,产酶稳定期可持续 12 h. 展开更多
关键词 大肠杆菌 l-天冬酰胺 活力测定 培养
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右旋糖苷及PEG-2对大肠杆菌L-天冬酰胺酶的化学修饰 被引量:8
14
作者 HafsaKarmElahi 吴梧桐 +1 位作者 刘景晶 周笑艳 《药物生物技术》 CAS CSCD 1997年第2期118-121,共4页
本文综述了活化右旋糖苷 (MW4 0 0 0 0 )和含有两条聚乙二醇链的 PEG- 2 (PEGMW50 0 0 )对大肠杆菌 L-天冬酰胺酶的化学修饰。修饰酶可保持 50 %酶活 ,并且明显提高了抗胰蛋白酶及胰凝乳蛋白酶水解的能力 ,降低对特异的天冬酰胺酶抗体... 本文综述了活化右旋糖苷 (MW4 0 0 0 0 )和含有两条聚乙二醇链的 PEG- 2 (PEGMW50 0 0 )对大肠杆菌 L-天冬酰胺酶的化学修饰。修饰酶可保持 50 %酶活 ,并且明显提高了抗胰蛋白酶及胰凝乳蛋白酶水解的能力 ,降低对特异的天冬酰胺酶抗体的敏感性 ,体内实验还表明修饰酶在动物体内循环持久性延长 ,使之更适于作为治疗药物。 展开更多
关键词 l-天冬酰胺 右旋糖苷 化学修饰 大肠肝菌 PEG
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多聚唾液酸对L-天冬酰胺酶的修饰及修饰酶特性研究 被引量:5
15
作者 王颖达 郭丽 +2 位作者 钱世钧 孟广震 张树政 《生物工程学报》 CAS CSCD 北大核心 2000年第4期517-520,共4页
The colominic acid was covalently coupled to L asparaginase molecule by reductive amination.Depending on the molar ratios of colominic acid asparaginase (30∶1,50∶1 and 100∶1),a modified enzyme molecule contained 4.... The colominic acid was covalently coupled to L asparaginase molecule by reductive amination.Depending on the molar ratios of colominic acid asparaginase (30∶1,50∶1 and 100∶1),a modified enzyme molecule contained 4.7,7.2 and 12 colominic acid molecule,they retained 58%,56% and 33.2% of the initial asparaginase activity,respectively.In comparison with the native enzyme,modified enzyme had lower immunogenicity and antigenicity,longer half life time ( in vitro ),more resistance ability to trypsin proteolysis,and similar Km value for L asparagine. 展开更多
关键词 l-天冬酰胺 多聚唾液酸 免疫原性 淋巴系肿瘤
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抗癌药物L-天冬酰胺酶及其研究进展 被引量:7
16
作者 刘红 潘红春 《四川轻化工学院学报》 2000年第2期31-36,共6页
L-天冬酰胺酶是一种对白血病和淋巴瘤有很好治疗效果的抗癌药物。文章从L-天冬酰胺酶的来源、酶学特性、生理作用、酶分子修饰和制备技术几方面详细论述了其最新研究进展。
关键词 抗癌药物 l-天冬酰胺 生理作用 分子 制剂
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基于人工神经网络的L-天冬酰胺酶发酵培养基优化 被引量:7
17
作者 王云龙 刘松 +1 位作者 堵国成 陈坚 《食品与发酵工业》 CAS CSCD 北大核心 2018年第8期27-33,共7页
为提高重组Bacillus subtilis发酵生产L-天冬酰胺酶(EC 3.5.1.1,L-Asparaginase,L-ASNase)的水平,应用人工神经网络算法对其发酵培养基进行优化。首先通过单因素实验和Plackett-Burman实验筛选显著因素,再进行中心组合实验建立实验数据... 为提高重组Bacillus subtilis发酵生产L-天冬酰胺酶(EC 3.5.1.1,L-Asparaginase,L-ASNase)的水平,应用人工神经网络算法对其发酵培养基进行优化。首先通过单因素实验和Plackett-Burman实验筛选显著因素,再进行中心组合实验建立实验数据样本,最后利用JMP10.0建立神经网络模型优化发酵培养基组成。经优化,获得最佳培养基组成:蔗糖65 g/L、酵母蛋白胨28 g/L、玉米浆11 g/L、KH_2PO_411.5 g/L、NaCl 3.3 g/L、(NH_4)_2SO_44 g/L、K_2HPO_4·3H_2O 22.5 g/L、MgSO_4·7H_2O 1 g/L、L-天冬酰胺2 g/L。在该培养基条件下,L-ASNase产量达到515.6 U/mL,较优化前提高了90.9%。研究结果为L-ASNase上罐优化提供了基础数据。 展开更多
关键词 枯草芽孢杆菌 l-天冬酰胺 发酵优化 发酵培养基 人工神经网络
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抗肿瘤酶制剂L-天冬酰胺酶治疗白血病的研究进展 被引量:5
18
作者 周纪宁 金浩 +1 位作者 李永丰 江体乾 《生物医学工程学杂志》 EI CAS CSCD 北大核心 2000年第3期342-345,共4页
L-天冬酰胺酶具有显著的抗肿瘤作用。为了最大限度地发挥酶疗法的优势 ,可以对天然酶进行化学改性、包埋或固定化。尤其值得重视的是固定化酶体外循环净化血浆技术 ,该研究对人类攻克白血病提出了一个新的思路与方法 。
关键词 l-天冬酰胺 白血病 固定化 体外循环
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固定化L-天冬酰胺酶间歇催化反应的动力学模型 被引量:3
19
作者 周纪宁 金浩 江体乾 《华东理工大学学报(自然科学版)》 CAS CSCD 北大核心 1999年第3期269-272,共4页
测定了37°C下以固定化L-天冬酰胺酶为催化剂,50μmol/LL-天冬酰胺的Tris缓冲液(pH=7.4)为底物的时歇反应转化率,并用建立的数学模型对反应过程进行拟合。计算结果表明,提出的传质-催化反应动力学模... 测定了37°C下以固定化L-天冬酰胺酶为催化剂,50μmol/LL-天冬酰胺的Tris缓冲液(pH=7.4)为底物的时歇反应转化率,并用建立的数学模型对反应过程进行拟合。计算结果表明,提出的传质-催化反应动力学模型能较好地描述反应过程,并揭示固定化酶的传质-催化过程受扩散作用控制。 展开更多
关键词 l-天冬酰胺 固定化 动力学 催化反应
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基于表达元件和宿主优化促地衣芽胞杆菌高效表达L-天冬酰胺酶 被引量:2
20
作者 杨新愿 饶忆 +4 位作者 张梦茜 王佳琪 刘文渊 蔡冬波 陈守文 《生物工程学报》 CAS CSCD 北大核心 2023年第3期1096-1106,共11页
L-天冬酰胺酶(L-asparaginase, L-ASN)广泛用于恶性肿瘤治疗及低丙烯酰胺食品生产,然而其较低的表达水平限制了应用推广。异源蛋白表达是提高目标酶表达水平的有效策略,芽胞杆菌广泛用于酶蛋白的高效生产,本研究拟通过表达元件及宿主优... L-天冬酰胺酶(L-asparaginase, L-ASN)广泛用于恶性肿瘤治疗及低丙烯酰胺食品生产,然而其较低的表达水平限制了应用推广。异源蛋白表达是提高目标酶表达水平的有效策略,芽胞杆菌广泛用于酶蛋白的高效生产,本研究拟通过表达元件及宿主优化提高芽胞杆菌(Bacillus)中L-天冬酰胺酶产量。首先,筛选了5种信号肽(SPSacC、SPAmyL、SPAprE、SPYwbN、SPWapA)用于L-天冬酰胺酶的分泌表达,其中SPSacC介导下L-天冬酰胺酶分泌效果最好,酶活达到157.61 U/mL。随后,选取了4种芽胞杆菌强启动子(P43、PykzA-P43、PUbay、Pbac A),其中串联启动子PykzA-P43介导的L-天冬酰胺酶表达量最高,较对照菌株提高了52.94%。最后,筛选了3种芽胞杆菌表达宿主:地衣芽胞杆菌(Bacillus licheniformis)Δ0F3和BL10、枯草芽胞杆菌(B. subtilis) WB800,其中,地衣芽胞杆菌BL10作为宿主时,L-天冬酰胺酶酶活最高,达到了438.3 U/mL,较对照菌株提高了81.83%,为目前报道的L-天冬酰胺酶摇瓶酶活最高水平。综上所述,本研究成功构建了一株高产L-天冬酰胺酶的地衣芽胞杆菌工程菌株BL10/PykzA-P43-SPsacC-ansZ,为L-天冬酰胺酶工业化生产奠定了基础。 展开更多
关键词 l-天冬酰胺 地衣芽胞杆菌 信号肽 启动子 表达宿主
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