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KLF4基因沉默大鼠肝星状细胞中Smad 2、3、7 mRNA及蛋白表达观察 被引量:3
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作者 李涛 牛丽娟 +4 位作者 刘文宣 杨磊 李曼 曹丹丹 刘殿武 《山东医药》 CAS 北大核心 2016年第31期24-27,共4页
目的观察Kruppel样因子4(KLF4)基因沉默对大鼠肝星状细胞HSC-T6中Smad 2、3、7 mRNA及蛋白表达的影响。方法设计并构建针对大鼠KLF4基因的3个干扰质粒(p GPU6-1、p GPU6-2、p GPU6-3),将质粒转染HSC-T6细胞,检测KLF4 mRNA及蛋白,筛选出... 目的观察Kruppel样因子4(KLF4)基因沉默对大鼠肝星状细胞HSC-T6中Smad 2、3、7 mRNA及蛋白表达的影响。方法设计并构建针对大鼠KLF4基因的3个干扰质粒(p GPU6-1、p GPU6-2、p GPU6-3),将质粒转染HSC-T6细胞,检测KLF4 mRNA及蛋白,筛选出沉默效果最好的重组质粒用于后续实验。将HSC-T6细胞分为A、B、C、D组,A组常规培养细胞;B组在培养液中加入TGF-β_1 50 ng/m L;C组转染重组质粒p GPU6-3;D组转染干扰质粒p GPU6-3 24 h后,再加入TGF-β_1 50 ng/m L。采用real-time PCR法检测各组细胞中的Smad2、Smad3、Smad7mRNA。采用Western blotting法检测各组细胞中的Smad2、Smad3、Smad7蛋白和磷酸化Smad2、3(p-Smad2、3)蛋白。结果 B、D组细胞中Smad2、Smad3、Smad7 mRNA相对表达量高于A组,C组细胞中Smad7 mRNA相对表达量高于A组(P均<0.05)。C组、D组细胞中p-Smad2、p-Smad3蛋白相对表达量低于A组,Smad7蛋白相对表达量高于A组(P均<0.05)。B组细胞中Smad2、p-Smad2、Smad3、p-Smad3、Smad7蛋白相对表达量均高于A组(P均<0.05)。结论 KLF4基因沉默后,HSC-T6细胞(包括被TGF-β_1激活的HSC-T6)中p-Smad2、p-Smad3蛋白表达下调,Smad7 mRNA及蛋白表达上调;抑制KLF4基因表达可能有抗纤维化作用,作用机制与抑制TGF-β_1/Smad信号通路激活有关。 展开更多
关键词 kruppel因子4基因 人肝星状细胞 转化生长因子β1 SMAD 基因沉默 肝纤维化
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siRNA沉默KLF4的表达促进食管癌KYSE140细胞的增殖及迁移 被引量:3
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作者 黄邵洪 胡昆鹏 +1 位作者 严淑红 叶升 《中国肿瘤生物治疗杂志》 CAS CSCD 北大核心 2013年第3期301-305,共5页
目的:探讨体外沉默Kruppel样因子4(Kruppel like factor 4,KLF4)基因的表达对食管癌KYSE140细胞增殖及迁移的影响。方法:Western blotting法检测人食管癌细胞株KYSE140、KYSE150、EC109及EC9706及食管永生化细胞NE3中KLF4蛋白的表达,化... 目的:探讨体外沉默Kruppel样因子4(Kruppel like factor 4,KLF4)基因的表达对食管癌KYSE140细胞增殖及迁移的影响。方法:Western blotting法检测人食管癌细胞株KYSE140、KYSE150、EC109及EC9706及食管永生化细胞NE3中KLF4蛋白的表达,化学合成2对靶向KLF4的siRNA(KLF4-siRNA1,KLF4-siRNA2),并设对照siRNA(Ctrl-siRNA),分别体外转染至高表达KLF4的食管癌KYSE140细胞中,形成KLF4-siRNA1-KYSE140、KLF4-siRNA2-KYSE140及Ctrl-siRNA-KYSE140细胞,通过MTT实验、Transwell实验分别检测转染后食管癌KYSE140细胞的增殖及迁移。结果:食管癌细胞株KYSE140中KLF4蛋白的表达明显高于KYSE150、EC109及EC9706细胞株[(5.62±0.02)vs(1.71±0.23)、(3.24±0.35)、(3.16±0.41),均P<0.05]。KLF4-siRNA1-KYSE140、KLF4-siRNA2-KYSE140与Ctrl-siRNA-KYSE140细胞相比,KLF4蛋白表达明显降低[(0.49±0.18)、(0.32±0.09)vs(0.98±0.19),均P<0.05],细胞增殖能力明显增高[(1.2±0.8)、(1.4±0.1)vs(0.6±0.1),均P<0.05],迁移细胞数量也明显增加[(780±22)、(475±25)vs(83±17)个,P<0.05]。结论:KLF4在人食管癌细胞的增殖和迁移过程中起着负调控作用。 展开更多
关键词 kruppel因子4基因 食管癌 KYSE140细胞 增殖 迁移
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