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抗眼镜王蛇毒鸡卵黄抗体的研制及初步应用 被引量：12
1
作者 余清声 王桂平 +2 位作者 王薇 覃媛 黄劭 《中华微生物学和免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2004年第9期695-698,共4页
目的　研制抗眼镜王蛇毒鸡卵黄抗体 ,并研究该抗体在鸡卵黄中表达过程。方法　以甲醛减毒处理的眼镜王蛇粗毒免疫莱航母鸡 ,母鸡免疫应答后 ,在卵黄中产生抗眼镜王蛇毒抗体 ,应用嗜硫色谱柱HiTrapIgYPurificationHP从鸡卵黄中提取抗眼... 目的　研制抗眼镜王蛇毒鸡卵黄抗体 ,并研究该抗体在鸡卵黄中表达过程。方法　以甲醛减毒处理的眼镜王蛇粗毒免疫莱航母鸡 ,母鸡免疫应答后 ,在卵黄中产生抗眼镜王蛇毒抗体 ,应用嗜硫色谱柱HiTrapIgYPurificationHP从鸡卵黄中提取抗眼镜王蛇毒抗体 ;以间接ELISA法及双向免疫扩散测定抗体的效价、特异性及免疫活性 ;采用Lowry氏法测定蛋白含量 ;采用SDS PAGE法测定相对分子质量 (Mr)及鉴定抗体纯度。结果　母鸡初次免疫第 9天即有抗体产生 ,初次免疫 6 0d后抗体效价超过 1∶10 0 0 0 0 ,卵黄抗体经嗜硫色谱柱纯化后 ,经SDS PAGE检测为电泳纯 ,纯化后抗体效价较纯化前提高 4倍 ,每枚蛋中平均可获得较纯抗体 97.5mg。动物体外中和试验表明 ,特异性IgY能有效中和眼镜王蛇毒 ,阻止眼镜王蛇毒对小白鼠的攻击。结论　研制并鉴定了抗眼镜王蛇毒鸡卵黄抗体 ,分析抗体在产蛋期卵黄液中表达的进度 ,为今后该抗体的持续、高质量诱导奠定基础 。 展开更多
关键词 眼镜王蛇毒 鸡卵黄抗体 免疫 表达 特异性 体外中和试验 抗体产生 纯化 动物体 电泳
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抗眼镜王蛇毒鸡卵黄抗体的制备 被引量：7
2
作者 王桂平 余清声 +1 位作者 覃媛 黄劭 《中国药理学通报》 CAS CSCD 北大核心 2004年第12期1426-1429,共4页
目的　研制抗眼镜王蛇毒鸡卵黄抗体 ,并研究该抗体在鸡卵黄中表达过程。方法　以甲醛减毒处理的眼镜王蛇粗毒免疫莱航母鸡 ,母鸡免疫应答后 ,在卵黄中产生抗眼镜王蛇毒抗体 ,应用嗜硫色谱柱HiTrapIgYPurificationHP从鸡卵黄中提取抗眼... 目的　研制抗眼镜王蛇毒鸡卵黄抗体 ,并研究该抗体在鸡卵黄中表达过程。方法　以甲醛减毒处理的眼镜王蛇粗毒免疫莱航母鸡 ,母鸡免疫应答后 ,在卵黄中产生抗眼镜王蛇毒抗体 ,应用嗜硫色谱柱HiTrapIgYPurificationHP从鸡卵黄中提取抗眼镜王蛇毒抗体 ;以间接ELISA法及双向免疫抗散法测定抗体的效价、特异性及免疫活性 ;采用福林酚法测定蛋白含量 ;采用SDS PAGE法测定分子量及鉴定抗体纯度 ;抗体的特异性及交叉反应采用酶联免疫吸附法进行进行验证。结果　母鸡初次免疫第 9天即有抗体产生 ,初次免疫 6 0天后抗体效价超过 10 5;卵黄抗体经嗜硫色谱柱纯化后 ,经SDS PAGE检测为电泳纯 ,纯化后抗体效价较纯化前提高 4倍 ,每枚蛋中平均可获得较纯抗体 97 5mg ;所获取的抗体具有高度特异性 ,与蝰蛇科属的其它蛇毒无交叉反应 ,与眼镜蛇科蛇毒存在不同程度交叉反应 (蛇毒浓度大于5 0 0 μg·L-1时明显 )。结论　本研究首次研制并鉴定了抗眼镜王蛇毒鸡卵黄抗体 ,开拓了我国蛇伤治疗的新领域 ,并分析抗体在产蛋期卵黄液中表达的进度 ,为今后该抗体的持续、高质量诱导奠定基础 ,同时也促进其它抗蛇毒鸡卵黄抗体的研究开发及蛇毒单克隆抗体的研制。 展开更多
关键词 眼镜王蛇毒 卵黄抗体(IgY) 鸡
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眼镜王蛇毒中毒发病机理的研究报告 被引量：4
3
作者 李其斌 黄嫣娇 +1 位作者 林可干 方饶墀 《蛇志》 1990年第4期7-10,共4页
采用CM-Sepharose CL-6B柱层■可从广西产眼镜王蛇毒中得到28个蛋白峰,研究表明眼镜王蛇毒是一种含有多种毒性组份的毒性蛋白,可引起动物的局部损伤及心、肝、肺、肾、脑、肋肌和神经、血液等多个器官系统的病理学改变。眼镜王蛇毒中毒... 采用CM-Sepharose CL-6B柱层■可从广西产眼镜王蛇毒中得到28个蛋白峰,研究表明眼镜王蛇毒是一种含有多种毒性组份的毒性蛋白,可引起动物的局部损伤及心、肝、肺、肾、脑、肋肌和神经、血液等多个器官系统的病理学改变。眼镜王蛇毒中毒死亡的主要原因为神经毒素致呼吸麻痹引起全身重要生命器官缺氧加上急性微循环衰竭的综合作用所致,并提出有关抢救新方法。 展开更多
关键词 眼镜王蛇 蛇毒 中毒 发病机理
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抗眼镜王蛇毒卵黄抗体的免疫活性及其对眼镜王蛇毒的中和作用 被引量：3
4
作者 王桂平 刘新艳 +1 位作者 朱柳 余清声 《中国临床药理学与治疗学》 CAS CSCD 2007年第11期1250-1254,共5页
目的:探讨抗眼镜王蛇毒卵黄抗体的免疫活性及其在体内外对眼镜王蛇毒的中和作用。方法:采用嗜硫色谱法一步分离纯化抗眼镜王蛇毒卵黄抗体,通过间接ELISA法对制备的抗眼镜王蛇毒卵黄抗体进行免疫活性检测,采用小鼠体内外保护实验评估抗... 目的:探讨抗眼镜王蛇毒卵黄抗体的免疫活性及其在体内外对眼镜王蛇毒的中和作用。方法:采用嗜硫色谱法一步分离纯化抗眼镜王蛇毒卵黄抗体,通过间接ELISA法对制备的抗眼镜王蛇毒卵黄抗体进行免疫活性检测,采用小鼠体内外保护实验评估抗眼镜王蛇毒卵黄抗体对眼镜王蛇毒的中和作用。结果:嗜硫色谱法制备的卵黄抗体具有良好的免疫活性,并且对眼镜王蛇毒素显示较好的中和效应,在体外6mg/kg抗眼镜王蛇毒卵黄抗体可有效地中和约4LD50(约1.6mg/kg)的眼镜王蛇毒素,而在体内可有效地中和约3LD50(约1.2mg/kg)的眼镜王蛇毒素。结论:抗眼镜王蛇毒卵黄抗体对眼镜王蛇毒具有良好的中和作用,本项目为抗眼镜王蛇毒卵黄抗体的进一步研究开发提供实验依据。 展开更多
关键词 眼镜王蛇毒 卵黄抗体 免疫活性 中和作用
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眼镜王蛇神经毒素的提纯及其性质的研究 被引量：2
5
作者 刘静芳 《河北医学院学报》 1992年第1期14-18,共5页
本文用SP-SephadexC-25柱层析法分离广西眼镜王蛇蛇毒,得到19个组分,其中7个组分有毒性。对毒性较强,含量较高的4个毒性组分(即神经毒素Ⅴ、Ⅶ、Ⅷ和Ⅹ)用SephadexG-50凝胶过滤法进行纯化,并对神蛇经毒素Ⅶ和Ⅹ用CM-SephadexC-50柱层析... 本文用SP-SephadexC-25柱层析法分离广西眼镜王蛇蛇毒,得到19个组分,其中7个组分有毒性。对毒性较强,含量较高的4个毒性组分(即神经毒素Ⅴ、Ⅶ、Ⅷ和Ⅹ)用SephadexG-50凝胶过滤法进行纯化,并对神蛇经毒素Ⅶ和Ⅹ用CM-SephadexC-50柱层析法做了进一步纯化。经聚丙烯酰胺凝胶电泳(PAGE)鉴定,这4个神经毒素均为单一条带。用SDS-PAGE法测得神经毒素Ⅴ、Ⅶ、Ⅷ和Ⅹ的分子量分别为7800,6700,8400和8000,并用它们进行了小鸡颈二腹肌神经—肌肉接头传递的阻遏试验,结果表明这4个神经毒素均有阻遏神经—肌肉接头传递的作用,而且阻遇作用基本不可逆,属于突触后神经毒素。 展开更多
关键词 眼镜王蛇 蛇毒 神经毒素 柱层析
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广西眼镜王蛇毒一种碱性蛋白的分离纯化及性质研究 被引量：1
6
作者 林文珍 庄茂辛 +2 位作者 舒雨雁 林政炯 周元聪 《广西医科大学学报》 CAS 北大核心 2007年第2期189-192,共4页
目的:广西眼镜王蛇毒一种碱性蛋白的分离纯化和性质研究。方法:分离纯化采用DEAE-Sepharose CL-6B离子交换柱层析,Sephadex G-75凝胶过滤和CM-Sepharose CL-6B离子交换柱层析;通过电泳,磷脂酶A2(PLA2)酶活力测定,氨基酸组成分析,N端序... 目的:广西眼镜王蛇毒一种碱性蛋白的分离纯化和性质研究。方法:分离纯化采用DEAE-Sepharose CL-6B离子交换柱层析,Sephadex G-75凝胶过滤和CM-Sepharose CL-6B离子交换柱层析;通过电泳,磷脂酶A2(PLA2)酶活力测定,氨基酸组成分析,N端序列测定及药理实验进行性质研究。结果:从广西眼镜王蛇毒中分离到一种电泳纯的碱性蛋白(命名为CM-IV),相对分子质量约为14000,等电点约为8.65;PLA2的比活力为23μmol·mg-1/min。氨基酸组成分析表明,其分子中Cys的含量占6.85%;利用蛋白质直接测序N端序列为TKCYVTPDVK。药理实验表明它对实验用小白鼠有致死性(LD50约为0.2mg/kg),并具有心脏毒性,但无血小板抑制活性。根据Genebank Blast分析软件,它的N端序列与神经毒素具有高度的同源性。结论:这种碱性蛋白可能为神经毒素,但却拥有PLA2的活力。 展开更多
关键词 眼镜王蛇 纯化 性质 碱性蛋白
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普通离子交换剂用于HPLC柱层析法快速分离眼镜王蛇毒(英文)
7
作者 李其斌 莫武宁 +3 位作者 黄光武 金城记代彦 中村真理子 小杉忠诚 《蛇志》 2002年第3期1-8,共8页
目的　为了经济快速分离眼镜王蛇(Ophiophagushannah,Oh)蛇毒中的毒素成分。　方法　用普通离子交换剂于高效液相色谱柱 (HPLC) TSKgel SP-Toyopearl 65 0 SF (4× 1 5 0 mm)层析法 ,实验取得最佳分离条件后 ,将蛇毒样品上柱后进行... 目的　为了经济快速分离眼镜王蛇(Ophiophagushannah,Oh)蛇毒中的毒素成分。　方法　用普通离子交换剂于高效液相色谱柱 (HPLC) TSKgel SP-Toyopearl 65 0 SF (4× 1 5 0 mm)层析法 ,实验取得最佳分离条件后 ,将蛇毒样品上柱后进行梯度洗脱 ,各洗脱峰收集后在 Cosmosil 5 C4-AR-3 0 0柱 (4 .6× 1 5 0 mm)上进行逆相 HPLC分析。非单峰组分再进行 HPLC凝胶过滤柱TSKgel Toyopearl HW-40 Fine(4× 2 5 0 mm)层析 ,层析峰组分再进行 HPLC逆相分析。　结果　眼镜王蛇毒经HPLC离子交换柱层析获得了 1 6个蛋白组分 ,其中有 5个组分经逆相 HPLC分析单一组分 ;另外的复合性组分再进行 HPLC凝胶过滤柱层析后又得到 5个单峰蛋白组分。　结论　HPLC离子交换柱层析对分离蛇毒蛋白很有实用价值 ,特别是蛇毒样品量少的情况下 (1 0 ug)也能较好分离。还具有分离时间短 (1 h左右 ) ,无须低温条件等优点。 展开更多
关键词 普通离子交换剂 HPLC柱层析法 分离 眼镜王蛇毒
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鸡卵黄抗眼镜王蛇毒抗体IgY的理化特性 被引量：2
8
作者 王薇 余清声 王桂平 《蛇志》 2003年第4期5-8,共4页
目的　研制抗眼镜王蛇毒鸡卵黄抗体并研究该抗体的理化特性。　方法　拟用减毒后的眼镜王蛇毒免疫母鸡后 ,从卵黄中制备抗眼镜王蛇毒抗体 Ig Y。采用间接 ELISA法对此抗体的理化特性进行研究。　结果　 ELISA显示免疫后 12天开始出现特... 目的　研制抗眼镜王蛇毒鸡卵黄抗体并研究该抗体的理化特性。　方法　拟用减毒后的眼镜王蛇毒免疫母鸡后 ,从卵黄中制备抗眼镜王蛇毒抗体 Ig Y。采用间接 ELISA法对此抗体的理化特性进行研究。　结果　 ELISA显示免疫后 12天开始出现特异性抗体 ,且抗体滴度逐渐升高 ,约在免疫后 6 0天左右 ,最高可达 1:10 0 0 0 0 ,此最高滴度可维持 30天 ,以后滴度逐渐降低 ,至免疫后 10 0～ 110天 ,滴度仍可维持在最高滴度的一半 ( 1:50 0 0 0 )。此抗体在 10～ 6 5℃温度范围内活性保持稳定 ;在 p H为 4～ 12范围内 ,抗体活性稳定 ;此抗体经胰蛋白酶处理 1h内 ,活性下降不明显 ,但 1h以后活性迅速下降。　结论　从卵黄中制备抗眼镜王蛇毒抗体 Ig Y,是可行的 ,稳定的。 展开更多
关键词 眼镜王蛇毒 鸡卵黄免疫球蛋白IgY 酶联免疫吸附测定 理化特性
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蛇毒冻干粉的鉴别及质量控制的研究——Ⅰ.广东眼镜蛇蛇毒与眼镜王蛇蛇毒的理化性质及其特征性吸收光谱曲线的比较
9
作者 何子安 孙方人 《蛇志》 1992年第1期8-10,12,共4页
本文对广东眼镜蛇蛇毒与眼镜王蛇蛇毒冻干粉的外观色泽、理化性质、含水量、含氮量和紫外吸收光谱曲线进行了较系统的分析测试.其结果为这两种蛇毒的鉴别及其制品质量的控制提供了实验依据.
关键词 眼镜蛇 眼镜王蛇 蛇毒冻干粉 鉴定
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广东眼镜蛇蛇毒与眼镜王蛇蛇毒冻干粉的鉴别及质量控制的研究　V．广东眼镜蛇蛇毒与眼镜王蛇蛇毒的氨基酸分析
10
作者 何子安 孙方人 +1 位作者 章光远 陈玉珍 《蛇志》 1996年第1期8-10,共3页
本文采用日立８３５－５０型氨基酸自动分析仪测定了广东眼镜蛇蛇毒与眼镜王蛇蛇毒的氨基酸成分，结果表明两种蛇毒的氨基酸组成基本相同，但多种氨基酸的含量存在明显差异，为蛇毒鉴别和质控提供实验依据。
关键词 蛇毒 眼镜蛇毒 眼镜王蛇 氨基酸
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