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题名黄枝油杉ISSR-PCR反应体系的建立与优化
被引量：4
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作者
谢伟玲
柴胜丰
蒋运生
唐健民
邹蓉
韦霄
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机构
广西喀斯特植物保育与恢复生态学重点实验室
广西师范大学生命科学院
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出处
《种子》
北大核心
2016年第6期17-21,共5页
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基金
广西林业科技项目(编号:桂林科字[2012]第26号)
广西科技攻关项目(编号:桂科能1598025-49)
桂林市科技攻关项目(编号:20130414)
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文摘
先运用正交设计进行初步筛选,再用单因素设计逐一优化对ISSR-PCR扩增效果有影响的Mg2＋、Taq DNA聚合酶、dNTP、引物、模板DNA、循环次数及退火温度。建立了黄枝油杉的最佳反应体系和程序,即25μL体系中含2.0mmol/L的Mg2＋、1.5UTaq DNA聚合酶、0.10mmol/L的dNTP、1.0μmol/L的引物、30ng的模板DNA以及2.5μL10×PCR buffer,其余的用灭菌的ddH2O补够25μL。扩增程序：94℃预变性5min;94℃变性30s,48～56℃（不同的引物,其退火温度不同,根据具体引物而定）退火45s,72℃延伸90s,以上3个步骤循环50次;最后72℃延伸7min;扩增产物放在4℃冰箱中保存。该体系和程序稳定性良好,结果可靠,可用于黄枝油杉遗传多样性分析。
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关键词
黄枝油杉
ISSR-PCR
正交设计
单因素试验
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Keywords
keteleeria calcarea cheng et l.k.fu
ISSR-PCR
orthogonal design
singlefactor test
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分类号
S791.15
[农业科学—林木遗传育种]
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