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RNA干扰茄病镰刀菌ALP基因及其基因沉默菌株的制备
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作者 梁涛 刘珂凤 +3 位作者 何宏 赵桂秋 王婷 喻文倩 《中国真菌学杂志》 CSCD 2013年第1期10-13,19,共5页
目的构建RNA干扰质粒载体抑制茄病镰刀菌碱性丝氨酸蛋白酶(ALP)基因,通过检测ALP的表达及酶活性变化筛选出基因沉默菌株。方法构建2个ALP的干扰载体,转化茄病镰刀菌孢子,获得ALP基因沉默菌株△ALP1、△ALP2,通过RT-PCR检测△ALP1、△ALP... 目的构建RNA干扰质粒载体抑制茄病镰刀菌碱性丝氨酸蛋白酶(ALP)基因,通过检测ALP的表达及酶活性变化筛选出基因沉默菌株。方法构建2个ALP的干扰载体,转化茄病镰刀菌孢子,获得ALP基因沉默菌株△ALP1、△ALP2,通过RT-PCR检测△ALP1、△ALP2的ALP基因mRNA变化,并通过蛋白琼脂廓清率培养基检测ALP酶活性变化,对所得菌株的毒力进行判断。结果 RNA干扰后所获基因沉默菌株中,ALP的mRNA表达量显著低于标准茄病镰刀菌株(F=184.67,P<0.01),其中ΔALP2抑制效果较好、酶活性显著低于标准菌株及△ALP1(q=5.276、5.463,P<0.01)。结论通过LiAc转化法对茄病镰刀菌ALP进行RNA干扰,可有效抑制茄病镰刀菌ALP的表达;ALP基因沉默茄病镰刀菌株的获取,为进行动物体内实验、深入研究ALP在茄病镰刀菌性角膜炎发病机制中的作用、探索新型治疗方法提供思路。 展开更多
关键词 茄病镰刀菌 真菌性角膜炎 丝氨酸蛋白酶 RNA干扰
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Modified ulcer debridement in the treatment of the superficial fungal infection of the cornea 被引量:3
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作者 Jun-Yi Wang Dian-Qiang Wang +2 位作者 Xiao-Lin Qi Jun Cheng Li-Xin Xie 《International Journal of Ophthalmology(English edition)》 SCIE CAS 2018年第2期223-229,共7页
AIM: To evaluate the efficacy of modified corneal ulcer debridement in superficial fungal keratitis unresponsive to medications.METHODS: A total of 209 patients(209 eyes) with fungal keratitis, involving no more t... AIM: To evaluate the efficacy of modified corneal ulcer debridement in superficial fungal keratitis unresponsive to medications.METHODS: A total of 209 patients(209 eyes) with fungal keratitis, involving no more than 50% of the stromal depth and not responding to antifungal agents for 2 wk, were recruited in this retrospective, noncomparative study. The patients were treated with modified corneal ulcer debridement. All visible corneal infiltrates were removed under an operating microscope to obtain a clean stromal bed and smooth incised edges. Antifungal drugs were used immediately after surgery. Healing time of the ulcers was recorded. Fungal recurrence, visual acuity, corneal thickness and risk factors for treatment failure were monitored.RESULTS: The follow-up was 13.6±5.8m o. The corneal ulcers healed in 195 of 209 eyes(93.3%), with a mean healing time of 8.4±6.8 d. The other 14 eyes were further treated by penetrating keratoplasty(PK)(1 eye), anterior lamellar keratoplasty(LK)(7 eyes), conjunctival flap covering(4 eyes) or amniotic membrane transplantation(2 eyes). The best corrected visual acuity(BCVA) was ≥20/70 in 80.3% of the eyes, ≥20/40 in 56.9% of the eyes, and ≥20/25 in 27.3% of the eyes. The corneas at the lesions became thinner, but all in the safe range. No fungal recurrence or corneal ectasis developed during the follow-up. The risk of treatment failure was higher in patients with preoperative hypopyon(P=0.036) and ever using steroid(P=0.025).CONCLUSION: Modified surgical debridement is a simple and effective method for the treatment of superficial fungal infection of the cornea, with improved visual acuity and no recurrence. Such an intervention in time can rapidly control fungal infection and largely shorten corneal ulcer healing time. 展开更多
关键词 fungal keratitis superficial fungal infection debridement cornea ulcer corneal scraping
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茄病镰刀菌ALP小干扰RNA载体的构建与表达
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作者 刘珂凤 梁涛 +3 位作者 赵桂秋 王婷 喻文倩 何宏 《预防医学论坛》 2013年第4期286-288,共3页
[目的]进一步研究碱性丝氨酸蛋白酶(ALP)在真菌性角膜炎发病机制中的作用,寻找有效的治疗措施。[方法]根据载体质粒pBC-hygro要求设计两对小干扰RNA,退火后连接于载体相应位点,经双酶切及测序鉴定后,分别转染标准茄病镰刀菌株,得到菌株... [目的]进一步研究碱性丝氨酸蛋白酶(ALP)在真菌性角膜炎发病机制中的作用,寻找有效的治疗措施。[方法]根据载体质粒pBC-hygro要求设计两对小干扰RNA,退火后连接于载体相应位点,经双酶切及测序鉴定后,分别转染标准茄病镰刀菌株,得到菌株ΔALP1和ΔALP2。采用蛋白琼脂廓清特殊培养基检测酶活性变化,Western-blot检测ALP的表达,并与标准茄病镰孢菌比较。[结果]检测ΔALP1菌株、ΔALP2菌株和对照菌株各6份,其CH值标准株为0.80±0.01,ΔALP1为0.80±0.03,ΔALP2为0.86±0.03,ΔALP1与标准株的差异无统计学意义(P>0.05),ΔALP2大于标准菌和ΔALP1株(P<0.01)。ALP蛋白条带的积分值(INT×mm2),标准株为1 240.29±289.77,ΔALP1为603.58±120.55,ΔALP2为401.84±117.94,ΔALP1与ΔALP2均低于标准株(P<0.01),ΔALP1高于ΔALP2(P<0.05)。[结论]成功地构建了ALP小干扰RNA载体及稳定转染菌株。 展开更多
关键词 茄病镰刀菌 真菌性角膜炎 丝氨酸蛋白酶 RNA干扰
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真菌性角膜溃疡前房积脓培养结果的临床分析 被引量:16
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作者 李绍伟 谢立信 +3 位作者 晋秀明 史伟云 孙士营 曾庆延 《眼科研究》 CSCD 北大核心 2002年第4期340-342,共3页
目的 探讨真菌性角膜溃疡前房积脓的培养结果与真菌菌种、病程、病理和预后的关系。方法 随机选定拟行穿透角膜移植术的真菌性角膜溃疡且合并前房积脓的患者33例33眼,术中取前房积脓行真菌培养并鉴别菌种,病变角膜片同时做真菌培养和病... 目的 探讨真菌性角膜溃疡前房积脓的培养结果与真菌菌种、病程、病理和预后的关系。方法 随机选定拟行穿透角膜移植术的真菌性角膜溃疡且合并前房积脓的患者33例33眼,术中取前房积脓行真菌培养并鉴别菌种,病变角膜片同时做真菌培养和病理检查。结果 全部角膜片真菌培养均阳性。15眼前房积脓培养阳性,其中溃疡穿孔7眼中有6眼阳性。未穿孔26眼中有9眼前房积脓培养阳性。前房积脓培养阳性者12眼为镰刀菌,2眼为梨头霉属,1眼为曲霉菌。病理结果:菌丝穿透后弹力层10眼,8眼前房积脓培养阳性;菌丝未穿透后弹力层16眼,2眼前房积脓培养阳性。结论 真菌性角膜溃疡未合并穿孔者的前房积脓多数为无菌性积脓(65.38%),合并穿孔则前房积脓多为有菌性(85.71%),即使前房积脓为有菌性,通过手术绝大多数可以控制感染保存眼球。 展开更多
关键词 真菌性角膜溃疡 前房积脓 真菌培养 病程 病理学 预后
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